О возможности определения давности спермы методом хроматографии на бумаге

Недавно начали появляться сообщения о возможности использования хроматографии для исследования спермы [Н. Мидзухо, М. Цегелька, Р. Кубичек, Э. Линье, Ф. Сантави, Э. Мартин-Мартин (М. Сеgelka, R. Kubicek, Е. Linger, F. Santavy, E. Martin-Martin)]. Большинство авторов, за исключением Фьори (Fiori), изучавшего сперму человека, работало с семенной жидкостью животных.

В условиях практической экспертизы получение подлежащей исследованию семенной жидкости нередко производится заочно, в связи с чем весьма важно бывает знать давность ее эякуляции. Отсюда возникла необходимость специальной методики исследования. Известно, что белки, имеющиеся в семенной жидкости, после эякуляции подвергаются гидролизу- Это сопровождается появлением и нарастанием свободных аминокислот. Отсюда следует, что давность получения семенной жидкости может устанавливаться на основании определения ее- аминокислотного состава, который легко и быстро выявляется хроматографически.

Мы использовали нисходящую одномерную хроматографию. Применяли бумагу Ленинградской фабрики № 2, нарезанную на полоски размером 40 X 3 см. Растворителем служила смесь бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 4:1:5, проявителем — 0,1% раствор- нингидрина в хлороформе. Изучена семенная жидкость 20 мужчин (у 2 из них не обнаружено сперматозоидов) в возрасте от 21 года до 37 лет, полученная путем мастурбации или неполного коитуса. Ее брали в стерильный флакон из-под пенициллина и хранили при комнатной температуре. На исходную линию полосок хроматографической бумаги наносили одинаковые объемы семенной жидкости давностью до 30 минут, до 2 и 5 часов, 1, 5 и 10 суток и 1 месяца. Всего приготовили 140 хроматограмм. Изучены также 10 образцов спермы, хранившейся в флаконах от 2 месяцев до 1 года. Для контроля методом хроматографии на бумаге исследованы по 5 образцов слюны, носовой слизи и мочи разных лиц.

Изучение хроматограмм семенной жидкости позволило выявить- ряд закономерностей. Во всех случаях на исходной линии соответственно месту нанесения спермы отмечалось интенсивно синее пятно с примыкающим к нему со стороны, в которую перемещается растворитель, более бледным пятном полулунной или округло-овальной формы, обращенным вогнутой поверхностью к исходной линии. По данным Фьори и др., это образование является пятном спермина.

Вслед за спермином располагались в виде цепочки отдельные аминокислоты. Количество их было различным в зависимости от давности спермы; оно обуславливало интенсивность окрашивания соответствующих пятен. Семенная жидкость давностью до 30 минут всегда давала интенсивно синее или сине-фиолетовое пятно спермина у исходной линии и иногда 1–2 еле заметных слабоокрашенных пятна аминокислот (аргинин, гистидин). В хроматограммах спермы, имевшей большую давность, всегда выявлялось от 4 до 11 аминокислот, расположенных цепочкой в определенной последовательности (цистеин, аминоуксусная кислота, серии, аланин, тирозин, метионин, лейцин, аргинин, аспарагиновая кислота, гликокол, валин). Эти аминокислоты мы распознавали путем параллельного исследования в качестве «свидетелей» стандартных аминокислот.

Хроматограммы спермы 2 мужчин (А и Б). Внизу указана давность спермы.

Нарастание аминокислот, выражающееся на хроматограмме соответственным увеличением числа пятен, их интенсивности и площади обусловливается, по-видимому, усилением процесса гидролиза белка спермы, что подтверждается открытой Фишером и др. (В. В. Рачин- ский) пропорциональностью площади пятен хроматограммы логарифмам концентрации аминокислот в первоначальной капле.

Изучение хроматограмм спермы позволяет утверждать, что аминокислотный состав ее у разных людей в соответственно одинаковые сроки времени с момента эякуляции не одинаков как по количеству аминокислот, так и по их концентрации. На рисунке даны хроматограммы семенной жидкости 2 мужчин. Можно надеяться, что индивидуальное своеобразие хроматограмм послужит одним из оснований для решения вопроса о принадлежности спермы тому или иному лицу.

Интересен и тот факт, что при большой давности спермы окраска у исходной линии, где, как было указано, проявляются пятна спермина, бледнеет, а иногда и совсем исчезает. В хроматограммах 10 образцов спермы давностью 2 и более месяцев выявлялось от 6 до 12 аминокислот (цистеин, лизин, аргинин, аспарагиновая кислота, серии, гликокол, аланин, валин, лейцин) при исчезновении окраски, соответствующей спермину.

Так, на полоске бумаги, где наносились сперма 3-дневной давности и смесь известных аминокислот, наблюдалось интенсивное синее окрашивание пятна у исходной линии и следующего за ним в виде цепочки ряда аминокислот, которые легко определялись по контрольным «свидетелям» (идентификация треонина и тирозина проведена без контрольных аминокислот: по коэффициенту скорости движения.— Rf). На полоске же, где были нанесены семенная жидкость 2-месячной давности и в качестве «свидетелей» смеси известных аминокислот, отсутствовали интенсивное синее окрашивание у исходной линии и ци- стеин. Эти своеобразные изменения были четко выражены во всех 10 случаях хроматографирования образцов семенной жидкости давностью 2 и более месяцев. В 2 из них, помимо исчезновения или резкого снижения спермина и цистеина, наблюдались также снижение интенсивности окраски и уменьшение размеров пятна тирозина, которое в одном случае вовсе отсутствовало.

Для проверки специфичности метода получены хроматограммы слюны, мочи и носовой слизи. Ни в одном случае не наблюдалось у исходной линии интенсивного синего окрашивания, соответствующего спермину, и характерной для семенной жидкости цепочки аминокислот.

Выводы

1. Хроматография семенной жидкости помогает дифференцировать, свежую сперму от других выделений.
2. Структура хроматограмм одной и той же спермы закономерно изменяется в зависимости от ее давности.
3. Хроматограммы спермы отдельных людей могут отличаться индивидуальным своеобразием.
4. Хроматографический анализ целесообразно включить в комплекс методов судебномедицинского исследования семенной жидкости.

От редакции

Предложенный в статье метод не может быть непосредственно внедрен в практику. При небольшой давности спермы обнаруживался только спермин, для которого окраска нингидрином не является специфической. Цепочка аминокислот была хорошо выражена в образцах давностью в несколько дней или недель, но представление такой спермы на экспертизу под видом свежеполученной едва ли встретится в практике. Однако указанный метод представляет теоретический интерес для разработки таких вопросов, как установление давности и индивидуальных различий образцов спермы.