Оценка возможностей применения технологии лазерной микродиссекции для целей молекулярно-генетического экспертного анализа (генотипирования) хромосомной ДНК человека

Д.б.н., проф. П.Л. ИВАНОВ, эксп. С.Н. ЛЕОНОВ, к.м.н. Е.Ю. ЗЕМСКОВА

ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» (дир. — д.м.н. А.В. Ковалев) Минздравсоцразвития России, Москва

The estimation of possibilities for the application of the laser capture microdissection technology for the molecular-genetic expert analysis (genotyping) of human chromosomal DNA

P.L. IVANOV, S.N. LEONOV, E.YU. ZEMSKOVA

Federal state budgetary facility «Russian Centre of Forensic Medical Expertise», Russian Ministry of Health and Social Development, Moscow

Проведена оценка возможностей применения технологии лазерной микродиссекции (LCM) для целей молекулярно- генетического экспертного анализа (генотипирования) хромосомной ДНК человека. В качестве экспериментальной использовалась методика мультиплексного мультилокусного анализа полиморфизма аутосомной ДНК в препаратах буккальных эпителиоцитов, полученных с помощью LCM. Принципиальными моментами явились применение физических методов контрастирования микропрепаратов (фазово-контрастной микроскопии и микроскопии в темном поле) и ПЦР- совместимый клеточный лизис. Для генотипирования использовали амплификационную панель AmpFlSTR Minifiler PCR Amplification Kit («Applied Biosystems», США). Показано, что описанная методика позволяет достоверно проводить генотипирование хромосомной ДНК в суммарных препаратах из 10—20 диссектированных диплоидных клеток. Это близко к расчетному пределу чувствительности метода. В работе даны некоторые практические рекомендации.

Ключевые слова: лазерная микродиссекция, молекулярно-генетическая экспертиза, генотипирование ДНК в микропрепаратах, типирование полиморфизма хромосомной ДНК.

The present study was designed to estimate the possibilities of application of the laser capture microdissection (LCM) technology for the molecular-genetic expert analysis (genotyping) of human chromosomal DNA. The experimental method employed for the purpose was the multiplex multilocus analysis of autosomal DNA polymorphism in the preparations of buccal epitheliocytes obtained by LCM. The key principles of the study were the application of physical methods for contrast enhancement of the micropreparations (such as phase-contrast microscopy and dark-field microscopy) and PCR-compatible cell lysis. Genotyping was carried out with the use of AmpFISTR Minifiler TM PCR Amplification Kits («Applied Biosynthesis», USA). It was shown that the technique employed in the present study ensures reliable genotyping of human chromosomal DNA in the pooled preparations containing 10-20 dissected diploid cells each. This result fairly well agrees with the calculated sensitivity of the method. A few practical recommendations are offered.

Key words: laser capture microdissection, molecular-genetic expertise, DNA genotyping in micropreparations, typing of chromosomal DNA polymorphism.