Изменение активности сукцинат- и глютаматдегидрогеназы в миокарде крыс в зависимости от давности наступления смерти

Изучали активность сукцинат- и глютаматдегидрогеназы (соответственно СДГ и ГДГ) в миокарде белых беспородных крыс-самцов (вес 150—220 г) в различные сроки после наступления смерти. Цель изучения — проследить посмертную динамику этих ферментов и определить возможности использования показателей ферментативной активности в миокарде как экспертных критериев для установления давности наступления смерти.

Наш выбор обусловлен тем, что СДГ и ГДГ являются одними из основных в аэробном гликолизе на уровне цикла Кребса, весьма интенсивно проходящего в миокарде (Е.Ф. Лушников, 1962; Б.И. Збарский, И.И. Иванов, С.Р. Мордашов, 1965; А.И. Струков, Е.Ф. Лушников, К.А. Горнак, 1967). Имеются также литературные данные о выраженном посмертном снижении активности этих ферментов в печени, почках и некоторых других органах (Е.Ф. Лушников, Э.В. Рабина, 1963; Ю.Л. Мельников, 1969, 1970).

Для выявления активности СДГ и ГДГ использовали тетразолиевую реакцию.

СДГ 200 мг янтарнокислого натрия разводили в 5 мл дистиллированной воды, получали исходный раствор. 0,5 мл исходного раствора смешивали с 0,5 мл фосфатного буфера (рН 7,4) и 1 мл раствора тетразолия. После обработки этим раствором препараты инкубировали в течение 25 мин. при 37°, промывали дистиллированной водой, фиксировали 10% раствором нейтрального формалина в течение 10 мин., а затем вновь промывали дистиллированной водой и заключали в глицерин-желатин. ГДГ, 35 мг глютамата натрия разводили в 1,5 мл дистиллированной воды. 0,3 мл полученного исходного раствора смешивали с 0,75 мл раствора дегидрогеназы и добавляли 1 мг окисленного НАД. В дальнейшем методика обработки препарата была аналогичной для СДГ.

Крыс забивали, нанося им черепно-мозговую травму. Эксперименты проводили при 16—18° и относительной влажности 40—60%. Время изучения 24 часа (10 исследований) и 48 часов (11 исследований) после наступления смерти. Для определения исходной активности изучали миокард тотчас после наступления смерти (0 часов, 12 исследований). Всего проведено 66 исследований.

СДГ. Сразу после наступления смерти в 6 исследованиях отмечалась очень высокая активность СДГ. Гранулы формазана были четкими, местами грубыми, разной величины. Встречались единичные участки миофибрилл с менее выраженной активностью, во всех случаях наблюдалось диффузное прокрашивание фона (см. рисунок, а на вклейке). В 3 экспериментах активность СДГ была высокой, в единичных участках — удовлетворительной. В этих препаратах фон был сильно прокрашен. В 3 случаях активность фермента определялась как удовлетворительная, кое-где в отдельных мышечных пучках сохранялась как высокая и даже очень высокая. В целом активность СДГ в миокарде тотчас после наступления смерти можно определить как очень высокую.

Некоторое снижение уровня активности можно объяснить, с одной стороны, возможным падением уровня фермента в агональном периоде, с другой стороны — погрешностями в методике обработки препаратов.

Через 24 часа после наступления смерти в большинстве препаратов (7) активность была выражена удовлетворительно (см. рисунок, б на вклейке). Правда, в них обнаруживались единичные незначительные участки с более сильной или, наоборот, слабой реакцией. В 2 случаях отмечалась высокая ферментативная активность, гранулы были грубыми, довольно четкими. В 1 препарате выявить активность СДГ не удалось.

К 48-му часу посмертного периода во всех 11 препаратах активность фермента в основном отсутствовала (см. рисунок, в на вклейке). Лишь в отдельных мышечных волокнах имела место крайне слабая реакция.

ГДГ. Тотчас после наступления смерти отмечалась (7 препаратов) очень высокая активность фермента. Гранулы формазана были крупными, довольно четкими. В некоторых случаях было диффузное прокрашивание фона. В препаратах с очень высокой активностью встречались отдельные мышечные волокна с более низкой. В 3 случаях выявили высокую активность — гранулы были грубыми, неодинаковой величины. В двух — удовлетворительную — зерна формазана были бледные, нечетко выражены. Суммарно уровень активности ГДГ сразу после наступления смерти следует оценить как очень высокий.

Активность СДГ и ГДГ в миокарде крыс в зависимости от срока после наступления смерти

Обозначения: ++++ активность очень высокая; ++ удовлетворительная; + низкая: — отсутствует.

Через 24 часа после наступления смерти в 5 препаратах отметили низкую активность. В 3 препаратах она сохранялась высокой и в 2 — удовлетворительной.

К 48-му часу после смерти в 5 случаях активность полностью отсутствовала, в 5 — отметили крайне слабую реакцию.

Для большей наглядности полученные данные представлены в таблице.

Сравнительная оценка степени активности СДГ и ГДГ в миокарде показала, что посмертная динамика активности ГДГ является более выраженной. Наши данные следует рассматривать как предварительные. Однако они свидетельствуют о закономерном снижении уровня активности ферментов в миокарде в зависимости от давности наступления смерти.

К статье В.В. Жарова и Г.М. Мирошника

Рис. Активность СДГ в миокарде сразу после смерти (а), через 24 (б) часа и 48 (в) часов после наступления смерти.
а — очень высокая, б — удовлетворительная, в — отсутствует.