К вопросу о признаках прижизненности механических повреждений

Проблема установления прижизненности механических повреждений является одной из ведущих в экспертизе механических повреждений. Судебными медиками проведены многочисленные исследования, направленные на разработку способов дифференциальной диагностики травмы, полученной незадолго до смерти, от повреждений, возникших после смерти.  Одним из таких методов является обнаружение в крови трупов миоглобина, что до настоящего времени считается достоверным признаком прижизненного механического воздействия.

В последние годы в практической медицине разработаны качественно новые диагностические методики обнаружения миоглобина, основанные на иммунологических серологических реакциях. Изучение литературы показало, что в крови живого здорового человека обнаруживается до 80нг/мл миоглобина. На уровень миоглобина в крови живого человека оказывает влияние целый комплекс факторов: не только травмы, но и характер физической нагрузки, интоксикации, соматические заболевания, гипоксические состояния и др. Последнее время в клинике используются методики обнаружения миоглобина в крови для диагностики инфаркта миокарда, при нервно-мышечной патологии и диффузных заболеваниях соединительной ткани. Всё вышеперечисленное вызывает необходимость изучить возможности использования современных методов обнаружения миоглобина в крови для судебно-медицинских целей.

 Целью настоящей работы было исследование уровня миоглобина в крови трупов при различных видах смерти и оценка возможности использования полученных данных в диагностике характера механических повреждений на трупе.

Материалом для данного исследования явились 80 трупов мужского и женского пола, в возрасте от 20 до 45 лет. Исследование миоглобина крови трупов проводилось в цельной крови и в сыворотке. Кровь от трупов забиралась из кровеносных сосудов. Затем определяли чувствительность диагностикумов с помощью стандартной сыворотки, входящей в состав диагностических наборов. Было использовано два вида диагностических наборов: 1.Диагностикум для выявления миоглобина производства НПО «Диагностические системы» серия 2-0302, 2.Набор эритроцитарного реагента «Скринмио-Н» производства лаборатории иммунохимии Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии.

В соответствии с инструкцией по использованию эритроцитарного диагностикума последний ресуспензировался в 2,5мл 0,85%-ного раствора натрия хлорида до образования 1%-ной равномерной суспензии эритроцитов. Затем с помощью полистироловых пластинок с «V» или «U» - образным профилем лунок с помощью микротитратора проводилось исследование. Для этого в 12 лунок пластины вносили по 2 капли (0,05мл) 0,85%-ного раствора натрия хлорида, затем в первую лунку добавляли 2 капли (0,05мл) исследуемого образца крови или сыворотки и проводили последовательно его двукратные разведения (1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и т.д.). В последнюю лунку образца не добавляли. Затем в каждую лунку вносили по 1 капле (0,025мл) взвеси диагностикума, оставляли при комнатной температуре и через 30 минут проводили учет результатов.

С помощью наборов «Скринмио – Н» проводили количественное определение содержания миоглобина в сыворотке. Для этого исследуемую сыворотку разводили в 5 раз забуференным физиологическим раствором (ЗФР), (к 0,4 мл ЗФР прибавляли 0,1 мл сыворотки), после чего делали ряд последовательных двукратных разведений в 0,025 мл ЗФР в лунках планшета по общепринятой методике. Для этого во все лунки ряда вносили по 0,025 мл ЗФР. Затем в первую лунку ряда вносили по 0,025 мл исследуемой сыворотки и стандарта. Содержимое первой лунки перемешивали и переносили с помощью автоматической пипетки во вторую лунку 0,025 мл смеси, затем из второй в третью и т.д.

Из последней лунки выливали 0,025 мл смеси. Т.о. в первых лунках исследуемая и стандартная сыворотки были разведены в 10 раз, во вторых лунках в 20 раз, в третьих - в 40 раз и т.д.

Для выявления возможной спонтанной агглютинации в две лунки планшета вносили по 0,025 мл ЗФР, после чего во все лунки добавляли по 0,025 мл эритоцитарного реагента.

Содержимое лунок тщательно перемешивали путем осторожного встряхивания и оставляли при комнатной температуре на 40 - 60 мин.

Реакцию считали положительной, если в лунках с исследуемой кровью или сывороткой так же как и в лунке со стандартом (содержащей миоглобин) наблюдалась полная агглютинация, т.е. эритроциты равномерно распределялись тонким слоем по дну лунки.

Реакцию считали отрицательной при отсутствии агглютинации эритроцитов, которые оседают на дно, образуя в центре «пуговку» или кольцо с ровным краем.

Проведенные исследования показали, что в тех случаях, когда смерть не была обусловлена травматическими воздействиями (гнойная абсцедирующая пневмония, отравление алкоголем и окисью углерода, алкогольная кардиомиопатия и др.) уровень миоглобина в крови трупа и в сыворотке крови колебался в пределах от 200 до 3200 нг/мл. Прижизненные механические повреждения сопровождались увеличением уровня миоглобина в крови трупов, концентрация которого превышала 6400 нг/мл.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что обнаружение миоглобина в крови трупа не является абсолютным признаком прижизненного механического воздействия, так как с помощью современных методов обнаружения миоглобина посредством реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) он обнаруживается в крови трупов при самых разных видах смерти, однако прижизненно причиненные механические повреждения, сопровождающиеся массивным разрушением тканей приводят к резкому увеличению уровня миоглобина в крови, что может быть использовано при установлении обстоятельств травмы.