Определение карбоксигемоглобина в костном мозге

Для распознавания смертельного отравления окисью углебоксигемсоединений в биологическом материале, рода важное значение имеет количественное определение кар- Рекомендованный для судебно-химических отделений метод количественного определения этих соединений предназначен для исследования жидкой крови или мышечной ткани. Однако в судебно-медицинской практике встречаются случаи, когда исследованию подвергаются обугленные или обескровленные трупы людей или их части, что делает невозможным взятие жидкой крови или мышечной ткани для лабораторных исследований. В то же время отсутствие результатов судебно-химического исследования вызывает серьезные затруднения в установлении причины смерти.

Цель настоящего исследования - изучение возможности количественного определения карбоксигемоглобнна в костном мозге плоских и длинных трубчатых костей, которые лучше сохраняются в случаях обгорания трупа.

В доступной литературе вопросы, связанные с качественным и количественным определением карбоксигемоглобина в костном мозге, не освещены.

Методика исследования. Извлеченные из трупа кости (грудина, фрагмент крыла подвздошной и бедренной кости) очищают от мягких тканей. Костный мозг из плоских костей выдавливают при помощи пресса, а из бедренной кости выскабливают при помощи глазной ложки.

Для определения наличия карбоксигемоглобина в исследуемых образцах костного мозга были проведены предварительные качественные пробы, обычно применяемые при аналогичном исследовании жидкой крови (пробы Гоппе—Зейлера, Кункеля).

Полученную порцию костного мозга помещают в центрифужную пробирку и с целью обезжиривания образца добавляют хлороформ в соотношении 1:5. Содержимое пробирки тщательно перемешивают в течение 1—2 мин. Полученную смесь центрифугируют в течение 3 мин при 3000 об/мин. 1 мл обезжиренного костного мозга смешивают с 49 мл дистиллированной воды и оставляют для экстракции в течение 1 ч в темном месте при комнатной температуре. Затем смесь вновь центрифугируют в течение 15 мин при 6000 об/мин. К 40 мл надосадочной жидкости добавляют 1,6 мл 25% раствора аммиака.

Подготовленный для исследования раствор должен быть оптически прозрачным.

Дальнейшее исследование полученного раствора костного мозга и расчет количественного содержания карбоксигемоглобина  проводят согласно методическим указаниям о количественном определении карбоксигемоглобина и карбоксимиоглобина (М., 1974).

Было установлено, что в спектре поглощения дезоксигемоглобина в интервале 500—600 нм имеется 1 максимум светопоглощения (555 нм), а в спектре карбоксигемоглобина  — 2 максимума (538 и 568 нм). Кривые карбоксигемоглобина  и дезоксигемоглобина пересекаются в 3 точках, соответствующих длинам волн 548, 558 и 585 нм.

Коэффициент для расчета содержания карбоксигемоглобина в растворах костного мозга, который был получен при исследовании 25 контрольных проб растворов костного мозга, равен 0,350, среднее квадратичное отклонение составило 0,026, коэффициент вариации 7,43%, погрешность 0,010.

Предложенным способом нами было исследовано 100 образцов костного мозга из трупов людей, погибших от отравления окисью углерода. Определение проводили через 1 —3 сут после наступления смерти при одинаковых условиях хранения материала в холодильнике (4°С). Концентрация карбоксигемосоединений в исследуемых образцах составляла от 10 до 67 %.

Параллельно в этих же случаях проводили исследование изъятой из правой половины сердца жидкой крови. Концентрация в ней карбоксигемоглобина колебалась в пределах от 29 до 88 %.

Полученные результаты свидетельствуют, что во всех исследованных случаях смерти от интоксикации окисью углерода в костном мозге определялось содержание карбоксигемсоединений.

Достоверно определяемая минимальная концентрация карбоксигемоглобина в костном мозга в наших исследованиях составила 10%. Величина ошибки в интервале концентраций карбоксигемоглобина от 10 до 20 % составила ±3%, при концентрациях его свыше 20 % была ±7 %.

Концентрация карбоксигемоглобина в костном мозге была на 15—30 % ниже, чем в соответствующих им образцах жидкой крови.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о том, что разработанный способ оказался пригодным для количественного определения карбоксигемоглобина в костном мозге и его использование может значительно расширить возможности судебно-медицинской экспертизы отравлений окисью углерода.