Выявление антигенов системы AB0 в замороженной крови

В апреле 2007 года возникла необходимость определения групповой принадлежности крови трупа UL, которая при его вскрытии в феврале была взята только для судебно-химического исследования. На момент запроса кровь хранилась в морозильной камере холодильника для биообъектов при температуре -18° С более 20 дней. От момента вскрытия трупа до окончания судебно-химической экспертизы образец жидкой крови находился в условиях положительных температур 15 дней.

Экспертам-биологам необходимо было определить групповую принадлежность трупной крови по системе АВО и ответить на вопросы, поставленные при назначении биологической экспертизы. Ранее исследования замороженной крови в отделении не проводились.

Флакон с замороженной кровью ёмкостью 10 мл получен в химическом отделении и помещен для оттаивания в холодильник при температуре +4°С. Спустя 4 часа кровь исследована в жидком виде, затем вылита на стерильную марлю в чашку Петри и высушена при комнатной температуре.

Каплю жидкой крови, имеющей коричневый цвет и некоторую прозрачность, помещали на предметное стекло под покровное и микроскопировали. В препарате целые эритроциты не найдены, поля зрения покрыты бесцветной массой, вероятно, стромой или «тенями» эритроцитов, присутствует небольшое количество палочковидных микробных тел.

Был сделан вывод о том, что кровь подверглась гемолизу (греч. haima — кровь, lysis — растворение), в основе которого лежит разрыв оболочки эритроцита и выход гемоглобина в окружающую среду. Такая реакция могла произойти:

• • при хранении крови в условиях положительных температур, когда вследствие прекращения ферментативной активности начинается пассивное проникновение в эритроциты воды с последующим растягиванием и разрывом мембраны и выбросом из клеток молекул гемоглобина;
• • при микробном воздействии, когда бактерии, уже живущие в теле или возникшие для разложения тканей, разрушают клетки;
• • при замораживании крови. Повреждающее действие низких температур на клетки связано с кристаллизацией воды при её превращении в лёд, ведущей к нарушению структуры клеточной мембраны и её деструкции.

Разрушенные эритроциты теряют способность к агглютинабельности.

Подобные изменения могут происходить и в плазме.

При исследовании жидкой трупной крови в реакции прямой агглютинации микроскопического результата нет. Предпринята попытка определения групповой принадлежности по методике Шиффа. После 5-минутного центрифугирования получили более концентрированный осадок и надосадочную жидкость практически одного цвета. При прибавлении к осадку, разведённому физиологическим раствором стандартных изогемагглютинирующих сывороток анти-А и анти-В, видимого результата не получено, что связано с деструкцией эритроцитов. К исследуемой надосадочной части добавляли 1 % взвесь стандартных эритроцитов А и В. Получена четкая агглютинация с эритроцитами А и слабая - с эритроцитами В, что не исключало наличие в крови агглютининов α и β. Высказано предположение о принадлежности образца к группе О αβ.

Следующим этапом было выявление антигенов и агглютининов в высушенной на марле крови тремя основными методами: количественной реакцией абсорбции агглютининов, реакцией абсорбции-элюции и методом покровного стекла по Ляттесу.

КРА проведена с а- и Р-изосыворотками двух серий. Снижение титра абсорбированных сывороток не получено, что могло наблюдаться при отсутствии антигена в крови либо при его разрушении. В РАЭ исследованы три участка пятна с изосыворотками и цоликлонами анти-А, анти-В, анти-Н двумя сериями каждого реагента с титром 1/128-1/256, с разными условиями абсорбции, элюцией в пробирках. При микроскопическом учете во всех реакциях выявлен только антиген Н. Присутствие агглютининов определяли 0,1% взвесью стандартных эритроцитов А, В, О. Получен положительный результат реакции с эритроцитами А и В при отсутствии агглютинации с эритроцитами О.

Проведенные реакции позволили отнести кровь трупа Ш. к группе Оар, что было подтверждено дальнейшим исследованием вещественных доказательств (смывов из-под трупа, одежды потерпевшего).

Нами высказано предположение о том, что в замороженной трупной крови даже при некотором микробном загрязнении, деструкция эритроцитов не ведёт к потере её антигенных характеристик. Мембранные поверхностные структуры эритроцитов, составной частью которых являются антигены, сохраняют свои иммунологические свойства довольно продолжительное время (если труп не подвергся значительным гнилостным изменениям).

За последние 6 месяцев были исследованы ещё пять образцов замороженной трупной крови для уточнения групповой принадлежности. Изначально кровь доставлена в биологическое отделение в высушенном виде на марлевых салфетках. Однако установить группу не удалось из-за слабой экстрагируемости следов и полученных разноречивых результатов. Запрошенные в химическом отделении образцы крови исследованы по схеме, описанной выше. Получены четкие результаты реакций, позволившие уверенно высказаться о группе крови потерпевших. Замечено, что чем раньше от момента вскрытия заморожена кровь, тем лучше выявляемость антигенов и агглютининов. Мы даже предположили, что замораживание способствует усилению иммунологических свойств.

Известно, что высокие температуры быстрее снижают качество крови, чем низкие. Современные методы криоконсервирования позволяют длительно сохранять эритроциты в течение 10 и более лет в замороженном состоянии при -196° С, что почти не влияет на их структуру. Все методики направлены на сохранение эритроцитов как функциональных клеток крови. Замороженную плазму можно хранить до 90 дней при температуре -25° С и ниже без потери её свойств.

Для судебно-медицинских целей важно сохранить антигенные свойства эритроцитов. Как показали наши исследования, замораживание трупной крови в ряде случаев позволяет успешно решить поставленные задачи.