Определение прижизненности механической травмы по изменению концентрации малонового диальдегида

Проблема установления прижизненности образования механических повреждений, не смотря на значительное количество предложенных методик, является по-прежнему актуальной. Значительный интерес при решении данного вопроса, по мнению Науменко В.Г. и Палимпесестовой О.А. (1992), представляют биофизические методы исследования. Одним из них является исследование сверхслабых свечений различных органов и тканей методом хемилюминесценции (ХЛ).

Сущность его заключается в регистрации параметров сверхслабого свечения, возникающего в результате протекания реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ) в различных биологических объектах. При этих реакциях образуется большое количество перекисных радикалов, находящихся в энергетически возбужденном состоянии. Конъюгируя друг с другом, они приходят в устойчивое состояние, а энергия возбуждения выделяется в виде квантов света, регистрирующихся при помощи квантометрических приборов. Применение метода регистрации параметров ХЛ позволило Н.А. Арутюняну (1979) и М.Ю. Милютину (1985) установить закономерное снижение интенсивности сверхслабого свечения в зависимости от прижизненности и давности образования механической травмы. Объясняя причины снижения уровня свечения, авторы считают, что это происходит в результате угнетения реакций ПОЛ веществами антиоксидантной природы, которые содержатся в мембранах клеточных органелл и самих клеток и, высвобождаясь при механическом разрушении клеточных структур, оказывают на процессы ПОЛ свое инактивирующее действие.

Целью настоящего исследования явилось определение концентрации малонового диальдегида (МДА), являющегося одним из продуктов реакций ПОЛ, в гомогенатах мышечной ткани при посмертной и прижизненной механической травме.

Объектом исследования были поврежденные мышцы трупов лиц, погибших на месте происшествия от механической травмы, а также мышцы травмированные через 3 часа после наступления смерти. В качестве контроля использовались неповрежденные мышцы симметричных участков тела. Гомогенаты тканей готовились в соотношении 1:10 в охлажденном 0,25 М растворе сахарозы в стеклянном гомогенизаторе. Количество МДА определялось по цветной реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК). Для этого смешивали равные объемы (2,0 мл) гомогената и 10% раствора трихлоруксусной кислоты. После центрифугирования смеси при 9 тыс. об/мин, 2,0 мл надосадочной жидкости смешивали с 4,0 мл 0,5% раствора ТБК и прогревали при 60 градусах СО на водяной бане в теченииЮ минут. Конечная концентрация МДА определялась спектрометрическим методом при длине волны 535 нм в микромолях и сравнивалась в процентном отношении с контролем. Определение концентрации МДА производилось через 3, 6,12 и 24 часа после наступления смерти.

Проведенное исследование показало, что в гомогенатах контроля концентрация МДА составила через 3 часа 100%, через 6 -103,7 ± 6,8%, через 12 часов 97,4 ± 5,2% и через сутки после наступления смерти 105,2 ± 4,3%. В мышечной ткани травмированной непосредственно перед смертью концентрация МДА через 3 часа составила 69,8 ± 3,1 %, через 6 часов после наступления смерти 47,2 ± 1,8%, через 12 часов 29,4 ± 2,5% и через сутки 18,7 ± 2,9% по отношению к контролю. Исследование концентрации МДА в экспериментально травмированной мышце через 3 часа после наступления смерти дало следующие результаты. Через 6 часов посмертной травмы количество МДА было 6,3 ± 4,3%, через 12 - ± 4,2% и через сутки - 92,2 ± 4,4%.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о достоверном снижении концентрации МДА в прижизненно травмированных мышцах, чего не наблюдается в контроле и в мышцах травмированных после наступления смерти. Это подтверждает ранее полученные результаты, свидетельствующие об угнетении реакций ПОЛ продуктами, образующимися в прижизненно травмированной мышечной ткани, и позволяет использовать методику определения концентрации МДА для определения прижизненности механических повреждений скелетных мышц.