Дополнительный прием к спектрофотометрическому методу для дифференциации этилового и метилового спирта

Описание метода, предложенного (в нескольких вариантах) рядом авторов в 1950—1954 гг., и предложенной нами модификации его для осуществления быстрых массовых анализов непосредственно в морге дано в статье «Определение алкоголя в крови спектрофотометрическим методом» >.

Определение алкоголя в крови спектрофотометрическим методом заключается в следующем. В стеклянный бюкс диаметром 4,5 см и высотой 4 см отмеривают 1 мл 10% раствора К2СО3 и 1 мл исследуемой пробы крови. В тигель из белой керамики диаметром 2 см и высотой 2 см, поставленный на дно бюкса, отмеривают 2 мл кислого раствора К2Сr 2О 7. Бюкс на 40 минут помещают в термостат при температуре 50°. Таким образом подготавливают все исследуемые пробы крови. Одновременно с этим ставят 3—4 эталонных пробы с концентрациями этилового спирта порядка 0,4; 2,0; 4,0; 6,0%о и контрольную пробу (без алкоголя).

Такая методика позволила нам проводить непосредственно в морге без каких-либо дополнительных действий визуальную полуколичественную оценку наличия алкоголя в пробе с точностью до 0,3 % 0 и констатировать отсутствие в пробе любого вида алкоголя.

Подобную оценку производят перед тем, как приступить к точным спектрофотометрическим определениям (если в том возникает необходимость) по степени окрашивания раствора бихромата (от оранжевого, через зеленые, до темно-синих тонов) относительно контрольной и эталонных проб.

Быстрота и простота такой методики, являющейся первой частью спектрофотометрического метода, дали нам возможность просмотреть более 500 проб крови человека и кролика и прийти к следующим выводам:

• 1) непосредственно в морге за 2 часа можно проводить до 20 анализов; воспроизводимость метода, определенная «методом добавок» и эталонных проб,— 0,2—0,3‰;
• 2) в изолированной крови, хранящейся в чистой стеклянной закрытой посуде, в процессе гниения до 20 дней не образовывались вещества, имитирующие алкоголь (100 проб); в крови же, хранящейся в одной посуде с внутренними органами, такие вещества иногда образовывались (30 проб);
• 3) цветовые характеристики бихромата калия для этилового и метилового спирта, формалина и ряда других веществ одинаковы только при различных их концентрациях в пробе.

Как указывалось ранее, спектральные характеристики этилового и метилового спирта близки в области 436—726 тр, при разных концентрациях: например этиловый — с концентрацией порядка 4‰ и метиловый — порядка 1‰. Окислительно-восстановительные процессы кислого раствора бихромата с метиловым спиртом проходят приблизительно в 4 раза быстрее, чем с этиловым, причем конечные продукты в этих 2 случаях различны.

Изучение спектральных характеристик раствором бихромата, применяемых в анализе проб с метиловым и этиловым спиртом в других спектральных областях, было бы чрезвычайно полезно для дифференцировки этих алкоголей. Однако такие исследования можно провести только в лабораторных условиях на специальных приборах и с затратой значительного времени.

Поэтому пока мы остановились на одном простейшем приеме, который, не усложняя методику, дает возможность визуально отдифференцировать этиловый спирт от метилового. Для этого использовали дополнительно еще один сильный окислитель КМп04 . Процесс окисления и восстановления в этом случае идет значительно энергичнее с этиловым спиртом, чем с метиловым. Так, при исследовании проб, содержащих основные, встречающиеся в судебномедицинской практике, дозы от 1 до 8‰, индикатор с КМп04 при наличии этилового спирта принимает окраску от розово-желтой до темно-коричневой в зависимости от количества спирта. Цвет этого индикатора при наличии метилового спирта в тех же дозах всегда темно-красный (наблюдение в течение 3—4 часов).

Окончательные продукты окислительно-восстановительных процессов в обоих случаях, а также у раствора бихромата различны. Поэтому спектрофотометрирование и этого индикатора было бы чрезвычайно полезным. Однако получаемые различия в окраске настолько характерны, что визуальная их оценка в общей серии опытов не может вызвать ошибки.

Предлагаемый второй индикатор в общем ходе анализа используют следующим образом: в бюксы, которые уже подготовлены к анализу на этиловый спирт, ставят еще по одному тиглю из белой керамики диаметром 1,5 см и высотой 2 см, в который влито 0,5 мл водного раствора КМп0 4 в концентрации 0,02%. Далее бюксы на 40—50 минут ставят в термостат при температуре 50°, после чего охлаждают до комнатной температуры и производят визуальную оценку.

Вывод об отсутствии алкоголя в свежей крови¹ делается по цвету индикаторов, которые сохраняют при этом первоначальную окраску, совпадающую с их окраской в контрольном опыте (без алкоголя).

Наличие в свежей крови метилового спирта в дозах 0,8—8‰ устанавливается по сохранению первоначальной окраски индикатора КМnО 4 и по резкому изменению соответственно дозам окраски индикатора c К₂Сr₂О₇.

Наличие в свежей крови этилового спирта в дозах 0,8—8‰ устанавливается по изменению цвета обоих индикаторов соответственно дозам. Визуально этиловый спирт оценивают количественно путем сравнения окрасок по раствору бихромата с эталонными пробами, а метиловый ориентировочно оценивают по тем же эталонам, но полученную концентрацию уменьшают в 4 раза. Количество алкоголя в дозах 0,2—0,8‰ определяют при более длительном пребывании бюксов в термостате.

Исследования с формалином, сероводородом, бутиловым и амиловым спиртами и другими веществами, которые хотя и реже, но все же могут встречаться в судебномедицинской практике, а также с изолированной кровью в различных стадиях ее гниения позволили нам прийти к следующим предварительным выводам: отсутствие алкоголя в пробе сильно загнившей крови устанавливается по сохранению окраски индикатора с К₂Сr₂О₇ и по резкому изменению цвета индикатора КМnO₄ .

Близкие результаты получаются при наличии в свежей крови сероводорода. При наличии в свежей крови амилового спирта в концентрациях 0,8—8‰ окислительно-восстановительные процессы в обоих индикаторах проходят быстрее, чем при наличии этилового спирта в тех же концентрациях. Даже одна эта временная характеристика может в руках экспериментатора, неоднократно проводящего подобные анализы, служить дифференциальным признаком. Нарушение соотношений в спектральных характеристиках, полученных в области 436—726 mμ (при сопоставлении со спектральными характеристиками эталонных проб), является объективным дифференциальным признаком, который можно использовать в сомнительных случаях. Визуальная дифференциация бутилового и этилового спирта затруднена близкими цветными характеристиками обоих индикаторов.

Другие вещества, имеющие судебномедицинское значение, которые могут мешать визуальной оценке этилового и метилового спирта, и некоторые вопросы, связанные с исследованием проб крови, взятых от сильно загнивших трупов, будут изучаться в ходе проверки методики в морге и при анализе полученного статистического материала.

¹ Кровь, хранившаяся в течение 5—6 дней в герметически закрытом стеклянном сосуде при температуре 18°, еще годна для таких определений.