Изолирование, обнаружение и определение базудина в биологическом материале

Фосфорорганический пестицид базудин (диазинон) — маслянистая жидкость, растворим в воде (при 20° 40 мг/л), хорошо растворяется в эфире, спирте, бензоле. Температура кипения 89° при 0,1 мм рт. ст. Он относится к среднетоксическим препаратам.

Ранее мы установили, что 1 % спиртовой раствор базудина дает характерные микрокристаллы с 1 % раствором хлористого палладия, 0,8% раствором хлористого йода, 2 н. раствором йодистого брома в бромистом калии, насыщенным раствором пикролоновой кислоты и модифицированным реактивом фосфорновольфрамовой кислоты.

Для установления пригодности указанных реакций для обнаружения базудина в биологическом объекте необходимо было разработать наиболее целесообразный способ его изолирования. С этой целью изучили способы: перегонку с водяным паром, подкисленной водой, подкисленным спиртом, а также непосредственное настаивание объекта с органическими растворителями.

Изолирование из биологических объектов с помощью первых 3 методов проводили методами, описанными ранее¹. Количество выделенного базудина определяли фотоэлектроколориметром по образованию фосфорномолибденового синего.

При перегонке с водяным паром получали 200 мл дистиллята. Базудин экстрагировали 3 раза эфиром по 70 мл. Извлечения объединяли, фильтровали через сухой фильтр в сухую фарфоровую чашку. Эфир удаляли при комнатной температуре досуха. При изолировании подкисленным спиртом или подкисленной водой хлороформные извлечения как из кислого, так и из щелочного раствора исследовали отдельно.

Таблица 1

Влияние природы растворителя на выход базудина

Сухие остатки, полученные после испарения растворителя, количественно переносили в колбу Кьельдаля при помощи 15 мл воды, 3 мл концентрированной серной и 5 мл концентрированной азотной кислот, нагревали до выделения густых паров серного ангидрида. Минерализат разбавляли водой до 100 мл в мерной колбе, 50 мл его переносили в другую мерную колбу емкостью 100 мл, добавляли 5 мл восстанавливающей смеси (2 г метола, 10 г сульфита натрия, 300 г метабисульфита натрия растворяли в воде и доводили до 1 л водой) и 10 мл молибдата аммония (50 г молибдата аммония растворяли в 500 мл 10 н. серной кислоты и доводили до 1 л водой), через 10 мин добавляли 20 мл 34% раствора ацетата натрия. Объем окрашенного в голубой цвет раствора доводили водой до метки и колориметрировали с красным светофильтром и кюветой с рабочей длиной 10 мм. Перегонкой с водяным паром, подкисленной водой и подкисленным спиртом базудин из биологического объекта изолировался недостаточно, не более 4,28% исходного содержания (20 мг на 100 г печени), что можно объяснить недостаточной летучестью и ограниченной растворимостью в воде. Поэтому мы более подробно изучили настаивание с органическими растворителями, которое применяется для выделения некоторых фосфорорганических соединений из биологических объектов. В первую очередь изучили влияние природы органического растворителя, концентрации водородных ионов (объекта) и кратности настаивания трупного материала растворителем. К 100 г биологического материала добавляли базудин, перемешивали, оставляли на сутки, заливали 100 мл органического растворителя и оставляли в течение 1 ч при частом взбалтывании. Растворитель отделяли, фильтровали через сухой фильтр (содержащий 10—15 г безводного сульфата натрия) в фарфоровую чашку, упаривали на водяной бане при 40°, остаток количественно переносили в колбу Кьельдаля и минерализовали. Базудин определяли указанным выше методом. Результаты приведены в табл. 1.

Принимая во внимание результаты данных табл. 1, дальнейшую работу вели с этиловым эфиром. Изучили некоторые вопросы, касающиеся извлечения базудина из биологического материала — влияние рН среды, а также кратности настаивания объекта.

Таблица 2

Влияние рН среды и кратности настаивания объекта на выход базудина

Примечание. При изучении влияния рН к объекту добавляли 20 мг, а при изучении настаивания — 10 мг базудина.

Как видно из табл. 2, при повышении рН до 6,0 ускорялся переход базудина в слой органического растворителя, но при дальнейшем ее повышении снижался: при рН 6,0 его выделение составляло 28,46%, а при рН 7,0 — лишь 19,54%.

Для изучения влияния кратности настаивания в 100 г затравленного биологического материала доводили рН до 6,0 (рН определяли потенциометром марки ЛГТУ-01) и настаивали со 100 мл этилового эфира в течение 1 ч при частом взбалтывании. Эфирный слой отделяли, а объект заливали новой порцией эфира. Этот процесс повторяли в одной серии опытов 1 раз, в другой — 2 раза и т. д.

Извлечения объединяли, упаривали, остаток минерализовали и исследовали количественно на базудин.

Таким образом, 3-кратная обработка эфиром позволяет изолировать до 56,23% базудина, дальнейшее увеличение кратности незначительно повышает выход препарата.

Применение перечисленных выше реакций после изолирования базудина из печени давало аналогичные результаты, микрокристаллы сохраняли первоначальную свою форму.

¹ М.Д. Швайкова. Судебная химия. Медгиз. М., 1959.