Химико-токсикологический анализ производных фенилалкиламина методом хроматомасс-спектрометрии

Среди лекарственных стимуляторов ЦНС наиболее распространены производные фенилалкиламина, основными представителями которых являются  амфетамин, метамфетамин (первитин, винт),  метилендиоксиамфетамин (MDA, ева),  метилендиоксиметамфетамин  (MDMA, экстази, адам).

Число случаев злоупотребления производными фенилалкиламина неуклонно растет, что делает необходимым изучение  методов   обнаружения их  в биологическом материале. В последнее время все чаще на исследование поступает моча живых лиц с целью обнаружения производных амфетамина. 

В настоящей работе описано исследование мочи живых лиц на наличие основных представителей из группы  фенилалкиламинов   при направлении объектов из наркологических диспансеров с целью их исследования на: психостимуляторы;  метамфетамин;   наркотики; наркотические и сильнодействующие вещества. Возраст обследуемых колебался от 24 до 31 года. Обстоятельства дела, при которых объекты направлялись на исследование были следующими: задержаны милицией;  задержаны с наркотиками;  управление транспортом в  состоянии наркотического опьянении; установление диагноза.

В качестве предварительного метода анализа  на производные фенилалкиламина мы использовали флюоресцентно-поляризационный  иммуноанализ. Результат  принимали за положительный если концентрация основного представителя из данной группы – амфетамина в моче превышала 1000 нг/мл (величина пороговой концентрации для предварительного метода анализа).

Экспериментальная часть

Метод обнаружения амфетаминов  в моче основан на жидкость-жидкостной экстракции с последующим проведением дериватизации с  использованием  дериватизирующих агентов: трифторуксусного ангидрида (ТФУА) или пентафторпропионового ангидрида ( ПФПА). Производные фенилалкиламинов с ТФУА или ПФПА   идентифицируют методом хроматомасс-cпектрометрии.

Пробоподготовка.  К 2 мл мочи добавляют 2 мл раствора гидроксида натрия (1М), 5 мл дистиллированной воды, 20 мл дихлорметана и экстрагируют на встряхивателе в течение 30 мин. Смесь центрифугируют в течение 5 мин и верхний слой отбрасывают. Органический слой профильтровывают через безводный сульфат натрия, к экстракту добавляют 50 мкл метанольного раствора соляной кислоты, выпаривают досуха при комнатной температуре  и исследуют методом хроматомасс-спектрометрии.

Хроматомасс-спектрометрия. 

Исследование проводили на хроматомасс-спектрометре   с газовым хроматографом Agilent 6890 и масс-селективным детектором Agilent Technologies 5973. Колонка хроматографа кварцевая, капиллярная (30 м х 0.25 мм) на метилфенилсиликоне. Начальная температура колонки-70⁰С. Время выдержки при начальной температуре - 1 минута. Подъем  температуры от 70 до 280^оС-20^оС/мин. Скорость газа носителя (гелий) – 1.0 мл/мин. Температуры инжектора, источника и квадруполя -280⁰С, 230⁰С и 150⁰С соответственно. Объем вводимой пробы-1 мкл.    

Методика исследования.

Методика исследования включает введение в газовый хроматограф стандартных растворов амфетамина и метамфетамина в виде их производных с ТФА (трифторуксусный ангидрид), или ПФПА (пентафторпропионовый ангидрид), последующее введение контрольного образца без определяемых веществ и затем введение исследуемой пробы.

Сухой остаток исследуемого образца количественно переносят с помощью 0,5 мл смеси растворителей метанол-хлороформ в соотношении 1:1 во флакон вместимостью 1мл, испаряют досуха под током теплого воздуха. Во флакон с сухим остатком с помощью шприца вносят 30 мкл реактива ТФА (трифторуксусный  ангидрид) или ПФПА (пентафторпропионовый ангидрид), флакон герметично закрывают, тщательно встряхивают, нагревают в термостате 5 минут при 50°С, доводят до комнатной температуры и испаряют досуха. Во флакон с сухим остатком внесят 30 мкл этилацетата и 1 мкл полученного раствора вводят в испаритель хроматографа.

Идентификацию наблюдаемых на хроматограмме пиков проводят в режиме сканирования индивидуальныж ионов по масс-спектрам электронного удара, ионным  масс-хроматограммам  и  библиотекам масс-спектров: NIST.02.L и PMW_TOX3.L Масс-спектры   дериватизированных    производных фенилалкиламина представлены в таблице 1

Таблица 1.

Масс-спектры дериватизированных производных фенилалкиламина

_______________________________________________________________________

   Название                                         Интенсивность  mz

_______________________________________________________________________

                         дериватизированного                        дериватизированного 

__________________ПФПА__________________________ТФУА________________

Амфетамин     140, 118, 91, 69, 65                 231,190, 118, 91, 69, 65                                                  

Метамфетамин   204, 160, 118, 91, 69                   245, 154, 118, 110, 91                                                              

Эфедрин              338, 294, 204, 160, 119              338, 244, 154, 110, 69                                                                

МДА                   179, 136, 77, 51, 44                     140, 132, 117, 105, 91, 77

МДМА                339, 204, 152, 135, 119               289, 162, 154, 135, 110

Псевдоэфедрин     438, 338, 294, 204                   357, 338, 244, 154, 110

_________________________________________________________________________

Из всех исследований мочи от живых лиц, проведенных нами на наркотические вещества в 2003 – 2004 гг  25% составили исследования на производные фенилалкиламина. Из них 21% - с положительным результатом. Количество положительных исследований на производные амфетамина в 2004 г возросли по сравнению с 2003 г в 2.6 раза. При этом в 48% случаев как в 2003 г так и в 2004 г. были обнаружены производные фенилалкиламина в различных сочетаниях. В 31% случаев в 2003 г. и в 33% случаев в 2004 г. при исследовании мочи на наркотические вещества было установлено совместное присутствие производных   фенилалкиламина  с  алкалоидами  опийной  группы (морфин,  кодеин, 6-моноацетилморфин);  в 12% случаев как в 2003 г. так и в 2004 г.  с каннабиноидами и с лекарственными веществами (димедрол, амитриптилин, карбамазепин, трамадол, фенобарбитал);  в ряде случаев с кокаином, метадоном и некоторыми другими веществами. При этом пробоподготовка проводилась раздельно:  2 мл мочи  исследовали на производные фенилалкиламина,  5 мл исследовали на алкалоиды опийной группы, лекарственные вещества, кокаин, метадон и 10 мл исследовали на наличие в моче основного метаболита тетрагидроканнабинола – 11-нор-9-карбокситетрагидроканнабинола.      Хроматомасс - спектрометрическое исследование проводили после дериватизации каждой  пробы: с трифторуксусным ангидридом или пентофторпропионовым ангидридом   для исследования на производные фенилалкиламина  и   с бис-триметилсилилацетамидом или пентофторпропионовым ангидридом и пентофторпропанолом для исследования на алкалоиды опийной группы, метадон, кокаин, лекарственные вещества, каннабиноиды.

Результаты исследования мочи  живых лиц на наличие производных фенилалкиламина в Бюро судебно-медицинской экспертизы Министерства здравоохранения Московской области за 2003-2004 гг представлены в таблице 2.

Таблица 2

Обнаружение производных фенилалкиламина в  моче живых лиц

Выводы.

1. Производные фенилалкиламина являются одним из основных  классов наркотиков.
2. Предложен хроматомасс-спектрометрический метод подтверждения  производных фенилалкиламина в моче с использованием их дериватизации.