Некоторые методологические аспекты изучения морфофункционального состояния надпочечников человека

Основным методологическим аспектом проблемы изучения ответной реакции различных органов и систем организма человека на внешние воздействия является выбор модели адекватно отражающей их исходное состояние. Особенно актуальным это становится в случаях исследования роли танатогенных стрессоров. Традиционно в качестве такой модели используется мгновенная смерть от несовместимых с жизнью повреждений. Считается, что наступление летального исхода без выраженного агонального периода не сопровождается развитием структурных изменений, вызванных процессом умирания [7], позволяя рассматривать морфофункциональное состояние изучаемых органов в качестве “исходного”. При планировании научных исследований в выборе модели исходного состояния, а также подборе адекватных групп исключающих анатомо-физиологические, возрастные и прочие различия, как правило, не возникает существенных сложностей. В тоже время за рамками исследований высоко реактогенных парных органов, в частности надпочечников, зачастую остается наличие их асинхронного функционирования, сопровождающегося выраженными структурными отличиями. Игнорирование данного фактора может повлечь за собой значительные искажения трактовки полученных результатов. Именно анализ с позиций структурно-функциональной неоднородности парных органов, позволил выявить наличие возникающей с возрастом асимметрии контралатеральных надпочечников [3], а так же зависимость последней от причины и механизма смерти, вида соматической патологии, наличия ряда сопутствующих факторов [2-6, 8]; установить, что использование показателей, отражающих морфофункциональную неоднородность парных надпочечников, позволяет с высокой, в ряде случаев, до 100% долей вероятности выделить ведущий танатогенетический фактор.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведено морфометрическое исследование 32-х пар надпочечников (НП) мужчин в возрасте 21-55 лет погибших без агонального периода от несовместимых с жизнью повреждений. По результатам аутопсии и гистологического исследования были исключены случаи с выраженной соматической патологией. Сроки от момента наступления смерти до проведения вскрытия составляли 25,1±2,1 часов. Надпочечники фиксировали в растворе формалин-кальция и взвешивали. На трех параллельных срезах, делящих железу на четыре равные по длине части, по сетке Автандилова с шагом 1 мм определяли количество точек соответствующих корковому и мозговому веществу [1]. Общее количество точек принимали за 100%. Массу коркового (КВ) и мозгового (МВ) вещества, а также их соотношение (КВ/МВ) в правом и левом надпочечнике вычисляли по рассчитанному процентному соотношению зон. Площадь ядер и цитоплазмы эндокриноцитов клубочковой, пучковой и сетчатой зон коркового вещества и хромаффинных клеток мозгового вещества измеряли на гистологических препаратах окрашенных гематоксилином и эозином при увеличении х300, для этого изображение поля зрения светового микроскопа вводилось в компьютер с помощью видеокамеры с последующей калибровкой с использованием объекта-микрометра. В программе Adobe PhotoShop 5.0 пользуясь опцией «лассо», позволяющей измерять площадь неправильных фигур, обводили контуры клеток и их ядер. В каждой зоне было проведено измерение не менее 30-ти клеток. Статистическая обработка осуществлена с использованием пакета программ STATISTIСA 6.0 for Windows. Использован t-тест для зависимых и независимых величин и непараметрические тесты Вилкоксона и Манна-Уитни, корреляционный и дискриминантный анализы. Выбор параметрического или непараметрического метода проводился в зависимости от правильности распределения величин в вариационном ряду, проверка проводилась с помощью теста Колмогорова-Смирнова. Статистически значимыми результаты считались при p<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Установлено, что у погибших без агонального периода от несовместимой с жизнью механической травмы масса контралатеральных надпочечников, а также масса их коркового и мозгового вещества статистически значимо не различаются (табл. 1).

Таблица 1

Параметры надпочечников человека в случаях смерти от несовместимой с жизнью механической травмы

Здесь и далее: М – средняя арифметическая, m – ошибка средней арифметической
p* – статистическая значимость разницы по отношению к величине соответствующего параметра левого надпочечника.

Также у контралатеральных надпочечников отсутствовали различия большинства гистологических характеристик: толщины, характера, клеточного состава и степени инфильтрации капсулы, степени кровенаполнения, насыщения липидами и липофусцином различных морфофункциональных зон, распространенности и степени кариопикноза адренокортикоцитов. В тоже время установлено, что очаговая мононуклеарная, преимущественно лимфоцитарная инфильтрация клубочковой зоны правого и левого надпочечника имеет разную степень выраженности. Если в левом надпочечнике её избирательная локализация в клубочковой зоне отмечается в 19 % случаев, то в клубочковой зоне правого надпочечника очаговая инфильтрация встречается в 34% случаев, причем это никак не связано с наличием инфильтрации в парном надпочечнике.

Средние площади ядер адренокортикоцитов КЗ:ПЗ:СЗ соотносятся в левом НП как 1:1,42:1,33; в правом НП как 1:1,39:1,36. При этом средняя площадь ядер адренокортикоцитов клубочковой и сетчатой зон в правом надпочечнике статистически значимо больше, чем в левом (табл. 2).

Таблица 2

Кариометрические параметры коркового вещества надпочечников

p*- статистическая значимость разницы по отношению к аналогичному параметру левого надпочечника

Соотношение величин коэффициентов вариабельности площади ядер адренокортикоцитов КЗ:ПЗ:СЗ составляет в левом надпочечнике 1:0,97:0,96; в правом надпочечнике 1:1,10:1,14. Относительная стабильность средней площади ядер адренокортикоцитов в каждой зоне обоих надпочечников подтверждается одинаковыми коэффициентами вариабельности (табл. 2).

При расчете параметров асимметрии выявлены статистически значимые проявления правостороннего доминирования количества на 1 мм² адренокортикоцитов пучковой зоны (13,98±4,33 %), а также площади ядер адренокортикоцитов клубочковой (2,23±0,51 %) и сетчатой (3,7±1,45 %) зон коркового вещества. Однако, несмотря на статистически значимое большее количество адренокортикоцитов пучковой зоны в правом надпочечнике, установлено, что по весовым и кариометрическим параметрам пучковой зоны асимметрия отсутствует, о чем свидетельствуют близкие к нулю значения коэффициентов асимметрии (от – 0,44±2,12 % до 1,49±4,34 %) и сопоставимое со значением средней арифметической значение ее стандартной ошибки.

Наличие морфофункциональной неоднородности контралатеральных надпочечников было подтверждено и в ходе корреляционного анализа продемонстрировавшего разное количество, а также зачастую различные характер и направленность имеющихся взаимосвязей. Корреляционный анализ показателей морфофункционального состояния установил что в левом надпочечнике с увеличением площади ядер адренокортикоцитов клубочковой зоны увеличивается площадь ядер адренокортикоцитов пучковой зоны (г = 0,79, р=0,02), уменьшается насыщение липидами цитоплазмы адренокортикоцитов клубочковой (г = -0,69, р=0,03) и пучковой (г = -0,70, р=0,03) зон. Количество липидов в цитоплазме адренокортикоцитов клубочковой зоны тем меньше, чем больше в этой зоне лимфоцитов (г = -0,65, р=0,04) и чем больше адренокортикоцитов, с переполненной липофусцином цитоплазмой в сетчатой зоне (г = -0,73, р=0,02). Площадь ядер адренокортикоцитов пучковой зоны увеличивается с повышением степени кровенаполнения мозгового вещества (г = 0,67, р=0,04). Насыщение цитоплазмы адренокортикоцитов пучковой зоны суданофильными липидами уменьшается при увеличении кровенаполнения этой зоны (г = -0,71, р=0,04). Чем больше функциональная активность ядер адренокортикоцитов сетчатой зоны, тем меньше объем цитоплазмы адреналоцитов мозгового вещества (г = -0,88, р=0,01), больше выражена ее вакуолизация (г = 0,71, р=0,03), и тем меньше лимфоцитов в мозговом веществе (г = -0,74, р=0,03). При увеличении в мозговом веществе количества лимфоцитов в цитоплазме его адреналоцитов уменьшается количество и размер вакуолей (г = -0,76, р=0,03), а сама она становится менее базофильной (г = -0,72, р=0,03).

В правом надпочечнике в отличие от левого площадь ядер адренокортикоцитов клубочковой зоны не коррелирует с площадью ядер и выраженностью липоидизации пучковой зоны, но так же как и в левом отрицательно коррелирует с выраженностью липоидизации клубочковой зоны (г = -0,72, р=0,02). В свою очередь количество липидов в клубочковой зоне отрицательно коррелирует с количеством в ней лимфоцитов (г = -0,65, р=0,04) и распространением адренокортикоцитов с липофусцином в сетчатой зоне (г = -0,73, р=0,02). При увеличении в правом надпочечнике степени кровенаполнения мозгового вещества увеличивается площадь ядер адренокортикоцитов сетчатой зоны (г = 0,61, р=0,05). Увеличение кровенаполнения пучковой зоны коркового вещества сопровождается уменьшением в ней количества суданофильных липидов (г = -0,77, р=0,02). Площадь ядер сетчатой зоны положительно коррелирует с количеством лимфоцитов в мозговом веществе (г = 0,69, р=0,03) и объемом цитоплазмы его клеток (г = 0,82, р=0,02). При увеличении количества лимфоцитов в мозговом веществе правого надпочечника, также как и в левом, в цитоплазме его секреторных клеток уменьшается количество и размер вакуолей (г = -0,76, р=0,03). Кроме этого, выявлены статистически значимые положительные корреляции между массой левого и правого надпочечников, массой их коркового и мозгового вещества.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, при использовании в качестве модели относительного контроля, отражающей “исходные” параметры надпочечников, несовместимой с жизнью кратковременной механической травмы, выступающей в качестве единственного танатогенного стрессора, следует учитывать наличие их асинхронного функционирования, поскольку недоучет этого фактора может привести к значительным искажениям полученных данных. В свою очередь наличие неоднородности морфофункционального состояния парных органов может быть использовано в качестве критериев диагностики танатогенных воздействий различной природы. Правомочность этого утверждения неоднократно продемонстрирована при изучении случаев завершенного суицида [2,8], отравления этанолом и угарным газом, общего охлаждения организма, туберкулеза легких, ишемической и цереброваскулярной патологии [4-6].