Изолирование и идентификация циннаризина в биологических объектах

Циннаризин (Стугерон, Cerepar, Cinnacet, Midronal и др.) используется в медицине как препарат, улучшающий мозговое, периферическое, коронарное кровообращение и микроциркуляцию. В доступной нам литературе мы не встретили данных о методах изолирования циннаризина из трупного материала. Целью нашего исследования явилась разработка способов выделения циннаризина и его идентификации в биологических объектах. Для разрешения поставленной задачи нами было проведено три серии исследований.

1. Изолирование циннаризина из таблеток.

100 мг измельчённых таблеток встряхивали в колбе с 10 мл хлороформа троекратно по 5-10 минут, через 30 минут фильтровали. Фильтрат исследовали методами хроматографии в тонком слое сорбента, газожидкостной хроматографии, УФ - спектрофотометрии, а также использовали его в качестве стандартного раствора при исследовании извлечений из трупного материала.

2. Исследование извлечения из таблеток.

С реактивом Драгендорфа по Шталю наблюдали оранжевое окрашивание. С реактивом Марки, с 10% раствором хлорного железа окрашивания не наблюдали.

Хроматографию в тонком слое сорбента проводили на пластинках «Сорбфил» - ПТСХ-П-А. Использовали следующие системы растворителей: I – толуол-ацетон-этанол-25% аммиак (45:45:7,5:2,5); II – хлороформ-ацетон-диоксан-25% аммиак (45:5:47,5:2,5); III – этилацетат-метанол-25% аммиак (17:2:1). В качестве проявителя использовали реактив Драгендорфа по Шталю – наблюдали появление оранжевых пятен. Значения Rf: I – 0,76; II – 0,81; III – 0,83.

УФ - спектрофотометрия. В спектре поглощения растворов извлечений в 0,1 н растворе соляной кислоты и в этиловом спирте наблюдали максимумы поглощения при 229 нм, 253 нм и 283 нм и минимумы поглощения при 223 нм, 236 нм, 280 нм и 289 нм.

Газожидкостная хроматография. Газохроматографическое исследование проводили на хроматографе «Кристалл – 2000» с использованием пламенно-ионизационного детектора на стеклянной колонке 100х0,3 см, заполненной хроматоном N-AW-DMCS зернением 0,16-0,20 мм с нанесённой жидкой фазой 5% OV-101. Время удерживания циннаризина 6,23 минут.

Хромато-масс-спектрометрия. Исследование проводили на хроматографе Agilent 6890 Plus, оборудованном масс-селективным детектором Agilent 5973N и капиллярной колонкой HP-5MS длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной фазы 0,25 мкм. Время удерживания циннаризина 18,52 минут (основные ионы m/z = 201, 117, 167, 202, 251, 165, 118, 115).

3. Исследование биологического материала.

Исходя из физико-химических свойств циннаризина, для изолирования его из биологического материала были использованы три метода: а) подкисленной водой по Васильевой; б) водой, подкисленной соляной кислотой; в) подкисленным спиртом по Стасу-Отто. Исследовали искусственную смесь печени с циннаризином. К 25 г печени добавляли по 25 мг циннаризина и оставляли на 24 часа, после чего изолировали вышеописанными методами. Экстракцию проводили из кислой среды при рН=2,0 смесью хлороформ-эфир 2:1, из аммиачной среды при рН=9,0 хлороформом. В извлечениях из щелочной среды циннаризин идентифицировали с использованием физико-химических методов анализа: хроматография в тонком слое сорбента, УФ - спектрофотометрия, газожидкостная хроматография, хромато-масс-спектрометрия.

Количественное определение проводили газохроматографически с использованием метода абсолютной калибровки. Порог чувствительности во вводимой пробе (1 мкл) составлял 0,05 мкг.

Обнаружено, что методом Васильевой изолируется из трупного материала 32 %, водой, подкисленной соляной кислотой – 34 %, методом Стаса-Отто – 89% циннаризина от введённого количества.

Метод изолирования по Стасу-Отто был использован при исследовании секционного материала (печень, почка, желудок, кишечник), подтвердившего эффективность данного метода для доказательства наличия циннаризина.

Анализ результатов проведённого исследования позволил нам придти к следующему заключению.

1. При судебно-химических исследованиях для изолирования циннаризина из биологического материала  целесообразно использовать метод Стаса-Отто.
2. Для идентификации циннаризина следует применять комплекс физико-химических методов исследования, включающий хроматографию в тонком слое сорбента, газожидкостную хроматографию, спектрофотометрию в ультрафиолетовой области спектра, хромато-масс-спектрометрию.