Современное состояние судебно-медицинского исследования вещественных доказательств и пути развития

Эффективность судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств биологического происхождения всегда связано с разработкой новых и совершенствованием уже существующих лабораторных методов исследования, применяющихся в различных областях медицины и биологии (серологии, иммунологии, биологии и энзимологии: гематологии и молекулярной генетики).

Большое разнообразие биологических объектов, а также широкий круг вопросов, решаемых экспертами–биологами, требует от них совершенного владения современными серологическими, иммунологическими, цитологическими, хроматографическими и электрофоретическими методами исследования.

Цель данной работы – отметить наиболее эффективные лабораторные методы исследования, расширяющие современные возможности судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств и наметить пути их реального внедрения в экспертную практику.

Современная судебно-медицинская серология располагает методами выявления групповых антигенов многочисленных изосерологических систем как в жидкой крови, так и в ее следах, различных выделениях и в волосах. Применяемые в настоящее время реакция абсорбции в количественной модификации, абсорбции-элюции, смешанной агглютинации позволяют выявлять антигены в следах крови очень малых размеров. Реакцию торможения агглютинации применяют с целью выявления групповых антигенов сывороточных систем крови ,таких как Gm и Km(Inv)

Целесообразно выявление групповых антигенов сразу нескольких изосерологических систем , таких как Rh , MNSs , P и ряда других, что позволяет существенно расширить возможности групповой идентификации и дифференцирования.

В экспертизе спорного отцовства широко используются антитела к групповым антигенам многих систем ,таких как (Kell , Daffi , Kidd , Luthtran).

Антитела этих систем являются неполными, т.е. проявляют серологическую активность в антиглобулиновом тесте, в коллоидных полимерных средах или после обработки испытуемых эритроцитов протеолитическими ферментами.

Одним из прогрессивных методов исследования является метод генетического анализа. Он имеет ряд преимуществ: применим для работы с минимальным количеством материала , который может быть частично разрушен, обладает большой информативностью- позволяет быстро получить результат.

Применение полимеразной цепной реакции вполне допустимо для любой ткани , из которой можно выделить ДНК. В практической работе таким объектом является кровь,слюна,сперма, их пятна, а также волосы.

При наличии жидкой крови исследования ДНК весьма широко производится в лабораториях. Однако, при исследовании пятен крови, выделений и особенно смешанных пятен, результаты не всегда положительные, что объясняется многими обстоятельствами. Прежде всего, из пятна не всегда можно выделить ДНК. Но при обнаружении ДНК в смешанных пятнах не всегда можно сделать вывод о принадлежности крови и выделений определенному лицу. Поэтому может быть учтен только положительный результат. Иммунологические методы с успехом применяются при определении видовой специфичности биологических объектов, при дифференцировании таксономически близких видов животных и для определения групповых антигенов в исследуемом материале (реакция кольцепреципитации, электропреципитации, двойной диффузии в агаре по Ouchterlony, реакция торможения преципитации, иммуноэлектрофореза).

Безусловно успешным было применение лазерного индикатора иммунологических реакций ИРЛ-010, который не только повышает чувствительность иммунологических реакций, но и позволяет объективизировать учет полученных результатов. Прибор успешно прошел клинические испытания (определение видовой и групповой принадлежности пятен крови и выделений).

Все большее применение находят различные цитологические методы исследования, используемые для диагностики регионального происхождения следов крови , определения органной специфичности частиц и тканевых наложений, а также определения половой принадлежности крови, слюны, изолированных клеток, вырванных волос. Методики определения половой принадлежности этих объектов имеют большое значение для следствия, особенно в тех случаях, когда групповая характеристика крови проходящих по делу лиц разного пола совпадают.

Большое применение, особенно за последнее время, приобрели иммунофлюоресцентные методы исследования. С их помощью можно в мельчайших объектах (единичная клетка) определить видовую и групповую принадлежность. Реакция является очень чувствительной, в результате чего можно ожидать неспецифических результатов. Это обязывает экспертов перед исследованием проводить подборку титра изосыворотки и совмещение его с красящим титром люминесцирующей.. Правильной оценке результатов мешает возникающая аутолюминесценция, для устранения которой целесообразно введение в реакцию альбумина, меченого родамином. Применение данного метода с успехом применяется не только для определения видовой и групповой принадлежности в мельчайших объектах, но и для дифференцирования антигенов крови и выделений, а также антигенов спермы и влагалищных выделений, буккального эпителия и.т.д.

В настоящее время нами предложены методы определения групповой принадлежности по системам АВО,Резус, MNSs, Льюис методом иммунофлюоресценции.

Таким образом, существует много методик, определения групповой принадлежности в любых объектах биологического происхождения (кровь, выделения, волосы, кости и др.) Недостатком указанных методик является либо их малая чувствительность ( реакция КРА),либо их неспецифичность(реакция РСАи РАЭ), либо влияние предмета-носителя, который оказывает воздействие на сыворотки, в результате чего антигенная принадлежность не может быть установлена. Невыявление может быть связано и со слабыми свойствами самого антигена. Кроме того, за последние 5-10 лет начали встречаться случаи необнаружения антигенов системы АВО даже в свежих образцах крови, выделений, волос и др. В литературе имеются указания(1,2), что при патологических состояниях организма групповая принадлежность не определяется даже в образцах жидкой крови выделений, волосах и т.д. При различных заболеваниях, таких как лейкоз, туберкулез, грипп, грибковые поражения отмечается неправильное определение групп крови (отсутствие агглютинации, невозможность идентификации антигенов и т.д.). Нами разработан способ определения групповой принадлежности в объектах биологического происхождения при патологических состояниях организма, который может использоваться при работе с гнилостно-измененными объектами (кровь, выделения, волосы и др.) в тех случаях, когда другими методами групповая принадлежность не может быть определена(3).

Широко внедряются в практику судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств биологического происхождения различные хроматографические методы исследования (на бумаге, на пластинах силуфоля и т.д.). Они позволяют с высокой чувствительностью устанавливать в следах наличие крови, мочи, слюны (но не пота), позволяют также контролировать загрязненность предметов-носителей выделениями человеческого организма в месте расположения следа или пятна крови, что имеет решающее значение для оценки результатов последующего выявления в нем групповых антигенов системы АВО или других изосерологических систем.

Очень перспективным является метод афинной хроматографии, позволяющей одномоментно в одном и том же объекте устанавливать наличие крови и выявлять в ней групповые антигены системы АВО. Этот метод с большим успехом используется при исследовании следов выделений, а также следов крови с примесью различных выделений организма человека.

Среди лабораторных методов исследования, применяемых в экспертной работе, следует отметить электрофоретические методы исследования, прочно вошедшие в повседневную практику. Для электрофоретического анализа могут быть использованы различные поддерживающие среды, каждая из которых располагает различной разрешающей разделительной способностью (полиакриламидный гель, агаровый, крахмальный и т.д.). Однако наибольшей разрешающей способностью обладает полиакриламидный гель (по плотности, способности дифференцированию белковых фракций, инертности).

Электрофоретическими исследованиями в последние годы удалось установить генетическую природу весьма полиморфных протеиновых компонентов, присущих только слюне человека. В настоящее время известно около 16 таких систем, позволяющих дифференцировать слюну человека, приблизительно на 50 фенотипов. В ближайшем будущем эти генетически полиморфные белковые системы могут быть использованы не только в экспертизах спорного отцовства, но и для дифференцирования следов слюны на вещественных доказательствах.

Достоинством электрофоретического метода исследования состоит в том, что по числу расположения и интенсивности фракций в геле можно судить о генах, кодирующих синтез определенного белка. Электромофоры, одинаково мигрирующие в геле, могут, тем не менее, кодироваться разными аллелями, поскольку синонимические триплеты кодируют одну и ту же аминокислоту, а замены некоторых аминокислот не изменяют электрофоретической подвижности белка. Следовательно, электрофорез в геле дает заниженную оценку степени генетической изменчивости.

Результаты широкого применения метода изоэлектрического фокусирования (ИЭФ), основанного на разном принципе фракционирования, привели к совершенно новому этапу в развитии естественных наук, и, в частности, генетики в судебно-медицинской серологии. Благодаря большой разрешающей способности ИЭФ удается зарегистрировать более высокий уровень полиморфизма сывороточных, ферментных систем и тканевых белков, а также намного больше генетических вариантов, чем это было сделано с помощью традиционных электрофоретических методов. С помощью ИЭФ был разработан метод определения собственных групп волос(4).

При экспертизе сходства волос сравнивать волосы возможно лишь при их одинаковой региональной принадлежности, а применение метода изоэлектрического фокусирования в ультратонком полиакриламидном геле для анализа не-S карбоксиметилированных кератинов волос человека дает возможность устанавливать их полиморфизм в качественном и релятивном соотношении волокнистых и матриксных компонентов. Выявленные различия в изоэлектрофоретической картине имеют характерные признаки, позволяют дифференцировать фенотипические группы. Изоэлектрические установленные признаки кератиновых компонентов не корригируют с половозрастной принадлежностью, рядом морфологических характеристик волос (цвет, форма) и не зависят от сроков хранения волос.

Вопрос о порциальности антигенов и антител является одним из основных при определении групповой принадлежности. Антиген В представлен тремя порциями-антигенами В , В ,В . Изоантитела анти-В также представлены тремя порциями- анти-В , анти-В , анти-В Эксперт, введя в реакцию сыворотку, никогда не знает ее парциальный состав. Из этого следует, что эксперт не знает, какой парциальный антиген выявлен. При повторном исследовании с другими сыворотками может быть получен совершенно другой результат. Вместе с тем, серологические возможности для установления парциальности антител ограничены, но могут быть с успехом проведены с помощью лектинов. Лектинология из направлений судебно-медицинского исследования вещественных доказательств является весьма перспективной и необходимой. Существуют фитагглютинины специально направленные на определенные порции антигенов А и В. К сожалению, за последнее время поиском фитагглютининов никто не занимается.

В целом же внедрением в широкую экспертную практику современных лабораторных методов исследования позволит значительно повысить эффективность судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств биологического происхождения.

С этой целью необходимо дальнейшее оснащение судебно-медицинских лабораторий современной аппаратурой, диагностическими реагентами и реактивами, а также повышение теоретических и практических знаний на курсах специализации и усовершенствования по судебно-медицинскому исследованию вещественных доказательств биологического происхождения.