Сохраняемость 2,4-динитрофенола в трупном материале

2,4-динитрофенол применяется в качестве полупродукта в синтезе ряда органических веществ, как антисептик древесины, реактив и индикатор [1,2]. Он обладает значительной токсичностью для теплокровных организмов. Известны случаи отравления 2,4-динитрофенолом  людей с летальным исходом. В химико-токсикологическом отношении данное вещество изучено недостаточно [2].

Целью настоящего исследования явилось изучение особенностей сохранения 2,4-динитрофнола в разлагающемся трупном материале.

В процессе исследования к мелкоизмельченной ткани трупной печени прибавляли 2,4-динитрофенол из расчета 0,1г на 100г биоматериала и тщательно перемешивали печеночную ткань с веществом. Полученные искусственные смеси сохраняли при 16-18 ^оС в плотно закрытых склянках темного стекла. В подобных же условиях хранили контрольные образцы печени.

Содержание исследуемого вещества и его метаболита - 2-амино-4-нитрофенола - в приготовленных искусственных смесях и контрольных образцах определяли по истечении 24 ч от начала эксперимента, а затем через каждые сутки хранения. При этом 25 г искусственной смеси или такое же количество контрольного образца печени настаивали с 50 мл ацетона 30 минут при перемешивании. Жидкое извлечение отделяли, операцию настаивания повторяли в описанных условиях дважды. Отдельные ацетоновые извлечения объединяли, пропускали через стеклянный фильтр с безводным сульфатом натрия, слой сульфата натрия промывали порцией ацетона объемом 20 мл. Фильтраты объединяли, растворитель испаряли. Остаток растворяли в 4-5 мл системы растворителей гексан-диоксан-пропанол-2(15:5:1). Раствор вносили в колонку размером 490×11мм, заполненную 10г силикагеля L 40/100 ("Chemapol" Чехия) и хроматографировали, используя подвижную фазу гексан-диоксан-пропанол-2(15:5:1). Элюат собирали фракциями по 2 мл каждая. 2,4-динитрофенол и его метаболит обнаруживали во фракциях методом ТСХ (пластины  "Силуфол" UV- 254, элюент-этилацетат-бензол (2:8)) по совпадению значении Rf исследуемых веществ и веществ-стандартов. В предлагаемых условиях 2,4-динитрофенол обнаруживался во фракциях  16-24, метаболит – во фракциях 56-72

Фракции, содержащие анализируемое вещество, объединяли , элюент испаряли. Остаток в каждом случае растворяли в 10-100 мл системы растворителей  гексан-диоксан-пропанол-2 (40:10:2). 2-8 мкл полученного раствора вводили в хроматограф ''Милихром '' с УФ-детектором и осуществляли хроматографирование, используя колонку с сорбентом  ''Силасорб-600 '' размером 64×2 мм и подвижную фазу гексан-диоксан-пропанол-2 (40:10:2). Скорость подачи подвижной фазы 100мкл/мин, скорость диаграммной ленты 720 мм/час. 2,4-динитрофенол или его метаболит идентифицировали по времени удерживания (соответственно 3,71 и 8,74 мин).

Количественное содержание анализируемого соединения определяли по площади хроматографического пика, используя уравнение калибровочного графика и пересчитывали на навеску. Результаты определения представлены на рисунке.

Как свидетельствуют полученные данные, 2,4-динитрофенол в предлагаемых условиях сохранения определяется в трупном материале в течение 13 дней. На 16-е сутки удается обнаружить его следы. В дальнейшем 2,4-динитрофенол не обнаруживается .

Через сутки после приготовления искусственных смесей помимо 2,4-динитрофенола в биоматериале можно было определить продукт его трансформации- 2-амино-4-нитрофенол. Количество 2-амино-4-нитрофенола в биоматериале вначале возрастает, достигая максимальных значений на 8-10 сутки, а затем начинает падать. В целом, метаболит 2,4-динитрофенола определяется со 2 по 19 сутки эксперимента.   

Результаты изучения сохраняемости 2,4-динитрофенола в трупном материале