Экспертное значение активности дегидрогеназ в печени в зависимости от стадии пищеварительного цикла

Точное установление срока приема пищи имеет большое экспертное значение. Как известно, решение этого вопроса в настоящее время представляет определенные трудности.

По данным литературы, гистохимическая характеристика клеток печени зависит от времени, прошедшего с момента приема пищи, и ее состава (А.М. Астахова, 1971; Chang и соавт., 1968, и др.). Исходя из этого, мы изучили гистохимически активность ряда дегидрогеназ в печени крыс после разных сроков кормления.

Материал и методы. Крысы в течение 3 нед находились на стандартной диете (получали пищу 1 раз в сутки, после насыщения животных остатки пищи удаляли, вода была свободно доступна). Крыс забивали путем декапитации через 3, 6, 12 и 24 ч после кормления. Кусочки печени сразу помещали в жидкий азот и в криостате готовили срезы толщиной 25 мк (для количественного анализа) и 7 мк (для морфологического исследования).

Активность дегидрогеназ: сукцината (СДГ) и восстановленного НАД (НАД • Н-ДГ) определяли по методу Квалино и Хейхо (1960), лактата (ЛДГ), α-глицерофос-фата (α-ГФ-ДГ) и глюкозо-6-фосфата (Г-6-Ф-ДГ) — по методу Гесса, Скарпелли и Пирса (1962). Количественное исследование проводили по методу Р.П. Нарциссова и соавт. (1969). О ферментативной активности судили по распределению гранул формазана в цитоплазме гепатоцитов.

Оказалось (см. таблицу), что содержание Г-6-Ф-ДГ в печени было максимальным через 3 ч после кормления. Остальные сроки (6, 12 и 24 ч) характеризовались достоверным снижением активности фермента. Отмечено разное распределение активности по долькам в зависимости от стадии пищеварительного цикла. Через 6 ч после кормления интенсивность реакции по долькам была одинаковой, что свидетельствует о равномерном распределении фермента. Для других сроков характерно неодинаковое распределение гранул формазана как по долькам, так и внутри них, а также в цитоплазме гепатоцитов.

Наибольшая активность была в зонах, прилежащих к центральной вене.

Количественное определение α-ГФ-ДГ показало, что максимальное содержание соответствует 3 ч после кормления, а минимальное — 6—24 ч. Топография α-ГФ-ДГ на разных стадиях пищеварительного цикла также характеризовалась рядом особенностей. К ним следует отнести неравномерное распределение фермента в дольках печени крыс, голодавших 1 сут, и более или менее одинаковое распределение по долькам при других сроках. Зоны наибольшей активности через 3, 6 и 12 ч располагались вблизи центральной вены, а через 24 ч — на периферии дольки. В гепатоцитах наибольшая активность фермента при всех сроках отмечалась в перинуклеарной цитоплазме.

Динамика изменения активности дегидрогеназ в печени крыс (в микрограммах формазана на 1 мг белка среза в 1 мин)

Количество ЛДГ было наибольшим через 3 ч и снижалось к 24 ч. Топография ЛДГ при разных сроках после кормления различна. Через суточный период голодания интенсивность гистохимической реакции повышалась на периферии дольки, через 3 и 6 ч — в центре, а спустя 12 ч после кормления было выявлено равномерное распределение гранул формазана по долькам и в цитоплазме гепатоцитов.

Количественным методом установлено повышение активности СДГ через 6 ч после кормления. При этом сроке наблюдалось равномерное распределение гранул формазана по долькам и в цитоплазме гепатоцитов. Остальные сроки характеризовались достоверным снижением активности фермента. Через 4 ч интенсивность гистохимической реакции на периферии печеночных долек повышалась. В цитоплазме гепатоцитов крупные гранулы формазана локализовались вблизи ядер.

Количество НАД-Н-ДГ было наибольшим через 3 ч и снижалось к 24 ч. Локализация формазана в гепатоцитах через 3 и 6 ч после кормления была однотипна, а гранулы распределялись равномерно по всей цитоплазме. Через 12 и 24 ч они локализовались вблизи ядер, наибольшей активностью обладали клетки, прилежащие к центральной вене.

Таким образом, максимальная активность СДГ наблюдалась через 6 ч после кормления, а НАД-Н-ДГ, ЛДГ, α-ГФ-ДГ, Г-6-Ф-ДГ — через 3 ч.

Результаты исследований показали, что существует определенная динамика изменения активности ферментов группы дегидрогеназ печени в зависимости от стадии пищеварительного цикла, что можно использовать при решении вопроса о давности приема пищи.