Сравнительная оценка методов изолирования эхинопсина из биологического материала

Эхинопсин применяется в медицине в качестве нервно-мышечного стимулятора. Методы изолирования его из биологического материала не описаны.

Мы изучили возможность выделения эхинопсина из биологического материала методами, которые применяются для выделения других алкалоидов при судебно-химическом анализе. Эхинопсин изолировали подкисленным спиртом (метод Стас-Отто), водой, подкисленной щавелевой кислотой (метод А.А. Васильевой), водой, подкисленной серной кислотой (метод В.Ф. Крамаренко), водой, подкисленной трихлоруксусной кислотой, и методом Грус-Харди, модифицированным для изолирования алкалоидов.

К 100 г измельченной печени, взятой сразу же после вскрытия трупа, добавляли до 10 мл водного раствора эхинопсина (5 мг/мл). Для метода Грус-Харди брали 50 г измельченной печени. Пробы оставляли на 24 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая. Кислые подщелоченные вытяжки экстрагировали хлороформом (по методу В.Ф. Крамаренко кислую вытяжку экстрагировали эфиром). После выпаривания органических растворителей в сухих остатках определяли количество выделенного эхинопсина фотоэлектроколориметрически и спектрофотометрически.

Определение эхинопсина фотоэлектроколориметрическим методом. Эхинопсин, взаимодействуя с хлоридом окисного железа, дает окрашивание. Эту цветную реакцию мы положили в основу фотоэлектроколориметрического метода количественного определения. Сухие остатки выделенного эхинопсина растворяли в воде (хлороформные извлечения из кислых вытяжек и вытяжек, полученных методом Грус-Харди, растворяли в 20 мл воды, а сухие остатки после выпаривания хлороформных извлечений из щелочных вытяжек растворяли в 10 мл воды). Через 20— 30 мин брали по 2 мл полученных растворов, прибавляли по 0,3 мл воды, 0,5 мл 3% водного раствора хлорида окисного железа и по 0,2 мл раствора фторида натрия (реактив состоит из 40 мл воды, 60 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты и 1 г фтористого натрия). Раствором сравнения была смесь 2,3 мл воды, 0,5 мл 3% водного раствора хлорида окисного железа и 0,2 мл подкисленного водного раствора фторида натрия.

Данный метод является специфическим. Об этом свидетельствует то, что при работе с материалом, не содержащим эхинопсина, оптическая плотность извлечений была равна нулю. Светопоглощение окрашенных растворов подчиняется закону Бугера — Ламберта — Бера в пределах концентраций от 0,2 до 3 мг эхинопсина в пробе. Чувствительность метода 0,25 мг эхинопсина в 3 мл конечного объема.

Определение эхинопсина спектрофотометрическим методом. При изучении возможности применения УФ-спектрофотометрии предварительно изучали УФ-спектр поглощения растворов эхинопсина в воде. Установили, что эхинопсин имеет максимумы светопоглощения в воде при длинах волн 235, 323 и 335 нм. Более интенсивным является максимум при длине волны 235 нм, при котором и производили определение.

Светопоглощение водных растворов эхинопсина подчинялось закону Бугера — Ламберта — Бера в пределах концентраций препарата от 0,3 до 1 мг в 100 мл. Удельный показатель поглощения в водном растворе при длине волны 235 нм равен 1148,5±5,54.

Были также сняты УФ-спектры поглощения вытяжек из печени, не содержащей эхинопсина (контроль). Растворы сухих остатков этих вытяжек в воде оказались оптически пустыми (за исключением растворов вытяжек, полученных по методу Стае — Отто). Результаты этих предварительных опытов и позволили определить извлеченный эхинопсин спектрофотометрическим методом. Объектом исследований во всех случаях был биологический материал, не подвергавшийся гнилостному разложению.

Сравнительная оценка методов изолирования эхинопсина

Для определения спектрофотометрическим методом брали по 1 мл раствора сухих остатков (см. фотоэлектроколориметрический метод) и доводили водой до 100 мл. Оптическую плотность измеряли спектрофотометром СФ-4А при длине волны 235 нм (против воды).

Полученные нами данные приведены в таблице. Из данных таблицы следует, что эхинопсин извлекается как из кислых, так и из подщелоченных вытяжек.

Выводы

1. Проведена сравнительная оценка изолирования эхинопсина 5 методами.
2. Наиболее эффективным является метод А.А. Васильевой, основанный на изолировании эхинопсина водой, подкисленной щавелевой кислотой, а также метод изолирования эхинопсина водой, подкисленной трихлоруксусной кислотой и метод Грус-Харди.
3. Разработаны фотоэлектроколориметрический спектрофотометрический методы количественного определения выделенного эхинопсина.