Постадийное изучение потерь гликозидов при судебно-химических исследованиях

Проведенные нами исследования показали, что сердечные гликозиды в разной степени изолируются из тканей внутренних органов. Возврат добавленных в количестве 1 мг к 100 г свежей ткани печени гликозидов в среднем был следующим: ланатозида С — 74,9%, дигоксина — 69,9%, дигитоксина — 54,4%, строфантина К — 57,1%, строфантина Г — 47,0%. Для характеристики потерь представляло интерес постадийное их изучение при судебно-химическом исследовании на различные гликозиды, что и явилось целью настоящей работы.

Были избраны ланатозид С и дигитоксин как гликозиды одной и той же подгруппы дигиталиса, которые изолируются и очищаются по одной методике, но характеризуются наивысшей и наименьшей величинами выхода. Исследовали также строфантин К как представитель подгруппы строфанта, требующей принципиально иного способа очистки от экстрактивных веществ.

Примечание. При добавлении ланатозида С и строфантина К к ткани печени или к ее спиртовому гомогенату мы не получили статистически достоверной разницы в результатах их выхода. Поэтому для данных гликозидов стадию II самостоятельно не обрабатывали.

Опыты проводили с тканью печени трупов лиц, погибших от травмы. Гликозиды из расчета 1 мг на 100 г измельченного органа (средняя проба) добавляли на 4 разных стадиях: I — непосредственно к измельченной печени (до начала исследования), II —-к спиртовому гомогенату печени (к навеске, залитой спиртом), III — к спиртовому извлечению из печени (к фильтрату), IV — к спиртовой жидкости после осаждения и удаления белковой фракции экстрактивных веществ. Исследование выполняли ранее описанными методами (JI. М. Власенко, 1972, 1973, 1975). Однако колоночный адсорбционный метод очистки строфантина К от экстрактивных веществ заменили не менее эффективным, но более простым способом осаждения основным ацетатом свинца. Для этой цели модифицировали методику, предложенную для очистки извлечений гликозидов из растительных объектов (М.Г. Тарасова, 1962). В качестве осадителя использовали официнальный препарат основного ацетата свинца, описанный в ГФ VIII.

Таблица 3

Методика очистки. Выпаренные спиртово-хлороформные экстракты обрабатывали 10 мл 20% раствора этанола, количественно переносили в центрифужную пробирку емкостью 12—15 мл, подщелачивали 1 каплей 10% раствора едкого натра, прибавляли 8 капель раствора основного ацетата свинца, тщательно смешивали и оставляли на 3—5 мин. Затем прибавляли 0,2 мл 10% раствора сульфата аммония, перемешивали и вновь оставляли на 10 мин, после чего центрифугировали. Центрифугат сливали в делительную воронку, а чашку, пробирку и осадок промывали (2 раза по 5 мл) 20% раствором этанола. Промывную жидкость присоединяли к основному центрифугату, насыщали кристаллическим сульфатом аммония (как правило, достаточно 10,5 г) и 4 раза извлекали смесью хлороформа со спиртом 8:2 (10, 10, 5 и 5 мл). Извлечения фильтровали через слой безводного сульфата натрия и испаряли досуха при температуре не выше 60°С. В остатке определяли строфантин К по ранее описанной методике (Л.М. Власенко, 1975).

Полученные результаты (табл. 1—3) показали следующее.

1. В процессе изолирования дигитоксина, ланатозида С и строфантина К из ткани печени и осаждения белковой фракции экстрактивных веществ спиртом в большей степени теряется дигитоксин. Из общих потерь дигитоксина (45,6%) примерно 35% теряются при его изолировании и осаждении белков. Установлено, что основная масса этих потерь (примерно 28 из 35%) происходит на стадии осаждения спиртом и отделения белковой фракции экстрактивных веществ.

Совершенно иными были потери и их распределение при исследовании ланатозида С и строфантина К. Общие потери в процессе изолирования гликозида из ткани печени и осаждения белков спиртом составляли в среднем 6,1% Для ланатозида С и 7,4% для строфантина К, из этого количества на стадии осаждения белков терялось в среднем около 5% гликозида.

Это положение согласуется с признанными биохимическими данными о неодинаковой для разных гликозидов прочности связи с белками, например крови.

2. Степень изолирования органического вещества из биологического объекта нельзя характеризовать только его растворимостью в тех или иных растворителях: необходимо учитывать прочность его связи с белками и другими экстрактивными веществами. Так, дигитоксин и ланато зид С имеют примерно одинаковую растворимость в 95% этаноле (по нашим данным, в 100 мл его растворяется 1,30 г дигитоксина и 1,38 г ланатозида С), но при осаждении белков этанолом дигитоксин теряется на 28%, а ланатозид С — примерно на 5%.

3. Основные потери (в среднем 35%) строфантина К происходят в процессе его дополнительной очистки и экстракции и могут быть уменьшены с усовершенствованием этих операций.

Вывод

Изучены и обсуждены потери дигитоксина, ланатозида С и строфантина К на различных стадиях исследования трупного материала.