Определение букарбана в трупном материале

Букарбан широко применяется как антидиабетическое средство. Передозировка препарата и его медленное выделение из организма могут привести к интоксикации. Морфологическая картина отравления не характерна, поэтому решающее значение в диагностике имеет судебно-химическое исследование внутренних органов.

Наблюдавшиеся нами 3 случая отравления букарбаном послужили основанием для разработки методики его определения в трупном материале. Изолирование проводили подкисленным этанолом. Для обнаружения букарбана разработаны микрокристаллические реакции и реакции окрашивания с применением тонкослойной хроматографии.

В основу количественного определения положена реакция диазотирования с последующим сочетанием с β-нафтолом.

Методика. 50—100 г измельченного объекта заливают этанолом, подкисляют спиртовым раствором щавелевой кислоты до pH 2,0 по универсальному индикатору и настаивают 24 ч при перемешивании. Повторно извлекают в течение 10 ч, промывают 100 мл этанола, объединенные спиртовые извлечения выпаривают досуха при 60°С, балластные вещества 2 раза осаждают абсолютным этанолом по 50 мл. Осадок растворяют в 50 мл 3% раствора едкого натра, насыщают кристаллическим хлоридом натрия и нагревают до 60°С на водяной бане. Через 15 мин раствор центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость фильтруют через ватный тампон и извлекают 3 раза хлороформом по 25 мл. Хлороформный слой отделяют, а водный подкисляют 25% раствором серной кислоты до pH 1,0 и экстрагируют 3 раза эфиром по 25 мл. Эфирные извлечения объединяют, испаряют досуха, остаток растворяют в 10 мл этанола, фильтруют и объем доводят до метки. Раствор (1) исследуют качественно и количественно.

Изолирование из крови. Кровь в количестве 25—50 мл разбавляют водой 1:1, добавляют 50% раствор трихлоруксусной кислоты до полного осаждения форменных элементов, центрифугируют и извлекают эфиром, как описано выше.

Качественное обнаружение. По 0,5 мл полученного спиртового раствора (1) испаряют досуха и исследуют.

1. С 5% раствором хлорида кадмия через 5—10 мин под микроскопом наблюдаются серые кристаллы в виде снопов и призм. Чувствительность 10 мкг. Угол погасания кристаллов прямой, знак удлинения отрицательный. Показатели преломления: n_g= 1,706, п_р= 1,604, n_g—Пр = 0,102, плеохроизмом не обладает.

2. С 5% раствором сульфата меди через 5—10 мин под микроскопом наблюдаются серые призматические кристаллы. Чувствительность 15 мкг. Угол погасания кристаллов прямой. Знак удлинения отрицательный. Показатели преломления: n_g= 1,633, п_р= 1,521, n_g—п_р = = 0,112, плеохроизмом не обладает.

3. С 1% раствором п-диметиламинобензальдегида в 5% растворе серной кислоты наблюдается желтое окрашивание. Чувствительность 5 мкг.

Таких микрокристаллических реакций не дают: стрептоцид белый, сульгин, сульфацил, норсульфазол, сульфадимезин, сульфантрол, этазол, уросульфан, фталазол, диакарб, бутамид, цикламид, адебит.

Тонкослойную хроматографию проводят на пластинке (размер 13X Х18 см) с закрепленным слоем силикагеля КСК, активированного при 110°С в течение 30 мин. Система: хлороформ-метанол, 9: 1, метчик — 1 капля 0,1% спиртового раствора букарбана. Длина пробега растворителя 10 см. Разрешающая возможность системы 500 мкг. Проявители — 0,5% раствор нитрита натрия в 2% растворе соляной кислоты и 2% раствор р-нафтола в 5% растворе едкого натра. На хроматограмме наблюдают оранжевые пятна с R₁ 0,46—0,49. Открываемый минимум 3 мкг букарбана.

Заключение об обнаружении букарбана основывается на совокупности реакций: с 5% раствором хлорида кадмия, с 5% раствором сульфата меди и данных хроматографии в тонком слое силикагеля.

Количественное определение. К части спиртового раствора (1) прибавляют 0,5 мл 0,5% раствора нитрита натрия в 2% растворе соляной кислоты и смесь прибавляют к 1 мл 2% раствора β-нафтола в 5% растворе едкого натра. Объем доводят этанолом до 5 мл и окрашенный раствор колориметрируют на фотоэлектроколориметре ФЭК-ZAl, светофильтр зеленый 510 нм, кювета 5 мм, контроль — этанол. Количество букарбана находят по графику, построенному вышеописанным способом стандартных растворов. Подчиняемость закону Бера в интервале 10— 500 мкг. Методику предварительно апробировали на искусственных смесях (почка, печень, желудок). Выход букарбана при добавлении 20 мг к 100 г объектов составил 48—52%. Опыты проводили со свежей печенью и с печенью, находившейся 2 мес при комнатной температуре.

Из табл. 1 видно, что при содержании 5—20 мг букарбана из свежей печени было выделено в среднем 43,1—49,6%, из загнившей — 30,4—41,3%.

Граница определения 0,3 мг в 100 г объекта.

В контрольных опытах с загнившей и свежей печенью получены отрицательные результаты всех качественных реакций, а также реакции с β-нафтолом, лежащей в основе количественного определения.

Вышеописанную методику применили на экспертном материале. Гр-ку К., 60 лет, доставили в больницу в бессознательном состоянии. Диагноз: отравление букарбаном. Через 15 ч наступила смерть. При исследовании трупа обнаружены признаки асфиктической смерти. Для судебно-химического исследования доставлены желудок, тонкая и толстая кишка, печень, почка, кровь. Результаты анализа представлены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что наибольшее количество букарбана найдено в тонкой кишке, желудке и печени, меньше — в других объектах.

Выводы

1. Разработана методика доказательства отравления букарбаном.
2. При содержании 5—20 мг букарбана в 100 г печени выход его составил: из свежей печени 43,1—49,6%, из загнившей — 30,4—41,3%.