Количественное определение амитриптилина в трупном материале

За последние 10 лет зарубежные авторы предложили ряд методик количественного определения амитриптилина в водных растворах и биологических жидкостях (Wallace и Dahl, 1967; Facino 1968; Karen Worm, 1969; Westerlund, 1970; Breyer и Remmer, 1971; Faber и Mulder, 1974, и др.). Эти методы можно подразделить на флюориметрические, спектрофотометрические и газохроматографические. Низкая чувствительность методов (по данным авторов, чувствительность флюориметрических методов—100 мкг/мл, спектрофотометрических— 100—200 мкг/мл, газохроматографических— 10—100 мкг во вводимом объеме) исключает возможность их использования для судебно-химического анализа.

Рис. 1. Спектральные кривые комплексов амитриптилина с красителями.

Рис. 2. Зависимость экстракции комплекса амитриптилина с бромфеноловым синим от отношения компонентов.
По горизонтали: вверху — количество 0,001 М раствора бромфенолового синего (в мл); внизу — количество 0,001 М раствора амитриптилина (в мл).

Поэтому мы изучили возможность экстракционно-фотометрического определения амитриптилина. С этой целью исследовали ряд красителей (бромфеноловый синий, бромкрезоловый пурпурный, метиловый оранжевый). Комплексы амитриптилина с красителями получали при использовании ацетатного буферного раствора pH 4,05 и содержании амитриптилина 10 мкг в 1 мл хлороформного раствора. Спектры поглощения комплексов амитриптилина с красителями снимали на спектрофотометре СФ-4А в области 300—500 нм (рис. 1).

Наиболее отвечал нашим требованиям бромфеноловый синий (Е 1 см комплекса амитриптилина с бромфеноловым синим равняется 600, с бромкрезоловым пурпурным — 420, с метиловым оранжевым — 440).

Определяя методом изомолярных серий оптимальные условия образования и экстрагирования комплекса амитриптилина с бромфеноловым синим, установили, что максимальная абсорбция хлороформного экстракта комплекса наблюдается при pH 2,0 и отношении компонентов бромфеноловый синий — амитриптилин 19: 1 (рис. 2).

Методика. К 1 мл водного раствора амитриптилина в делительной воронке добавляли 9 мл ацетатного буферного раствора с pH 2,0, 4,2 мл 0,1% водного раствора бромфенолового синего и 10 мл хлороформа. Экстрагировали комплекс хлороформом при энергичном встряхивании воронки в течение 1 мин. Оптическую плотность окрашенного в лимонно-желтый цвет хлороформного экстракта измеряли на спектрофотометре СФ-4А при длине волны 420 нм в 10 мм кювете относительно хлороформа. Расчет количества амитриптилина производили по калибровочному графику, построенному для стандартных растворов амитриптилина с содержанием препарата от 10 до 200 мкг в 1 мл этилового спирта по описанной выше методике. Подчинение закону Бера наблюдается в пределах от 1 до 20 мкг в 1 мл исследуемого раствора. Чувствительность метода составляет 1 мкг препарата в 1 мл исследуемого раствора.

Определение амитриптилина этим методом можно проводить и на фотоэлектроколориметре (ФЭК-56М, кювета 10 мм, светофильтр № 3), но удельный коэффициент поглощения комплекса несколько ниже (E1 см =440).

Калибровочный график для определения амитриптилина по комплексу с бромфеноловым синим на спектрофотометре СФ-4А представлен на рис. 3.

Рис. 3. Калибровочный график для определения амитриптилина по комплексу с бромфеноловым синим на спектрофотометре СФ-4А.
По горизонтали — концентрация амитриптилина (в мкг/мл).

Определение амитриптилина в трупном материале (при добавлении 5 мг препарата на 100 г органа)

Для анализа брали по 100 г печени, желудка с содержимым, почек, кишечника с содержимым, сердца, мозга. Результаты проведенных исследований представлены в таблице. Для каждого органа ставили контрольные опыты, результаты которых были отрицательными.

Из таблицы следует, что при добавлении 5 мг амитриптилина к 100 г органа извлекается от 68 до 87% препарата.

Изолирование амитриптилина из свежего биологического материала производили спиртом, подкисленным щавелевой кислотой, по следующей схеме:

Описанный метод количественного определения использовали при доказательстве отравления амитриптилином.

Судя по обстоятельствам дела, 15-летняя девушка приняла около 30 таблеток амитриптилина, через 2 сут скончалась в больнице. Для судебно-химического исследования доставлены: желудок, тонкая кишка, мозг, печень, почки. Изолирование амитриптилина проводили по описанной выше схеме, обнаружение — путем исследования 1/4 части извлечения в тонком слое силикагеля КСК с использованием реакций окрашивания и в УФ-свете.

При количественном определении амитриптилина в 100 г органа в желудке с содержимым обнаружено 1,35 мг, в тонкой кишке с содержимым — 0,43 мг, в мозге — 0,55 мг, в печени — 3,8 мг, в почках — 0,94 мг амитриптилина. Отсюда следует, что при подозрении на отравление амитриптилином на исследование необходимо в первую очередь брать печень и желудок с содержимым.

Вывод

Разработан экстракционно-фотометрический метод количественного определения амитриптилина в трупном материале, позволяющий определять от 68 до 87% препарата.