Определение возраста умершего по толщине интимы грудной аорты, содержанию в ней общего холестерина и удельному содержанию клеток

Целью работы было изучение возрастных изменений 3 признаков интимы аорты — общего холестерина (X), толщины (h) и удельного содержания клеток (Q) для установления закономерностей временного развития (старения) и определения возраста умершего по значениям этих признаков.

Для этого на текущем секционном материале прозектур Москвы исследовали интиму грудной аорты у 137 лиц, умерших от различных заболеваний и несчастных случаев, в возрасте от 1 дня жизни до 99 лет. Материал брали в первые 2—24 ч после смерти.

В результате исследования установили, что временное развитие изучаемых признаков старения интимы описывается показательной зависимостью изменения величины признака (Y) от возраста (t):

где Y — переменная величина одного из возрастных признаков; Y₀ — начальная величина признака, полученная при экстраполяции прямой развития признака к нулевому возрасту; t — время (в годах) ; Т_2х — средний период удвоения величины признака.

Установлены возрастные закономерности развития признаков для двух возрастных интервалов: «а» — от 10 до 29 лет и «б» — от 30 до 89 лет.

Формулы, описывающие возрастную зависимость, приведены ниже:

Для наглядности данные возрастные закономерности вынесены на полулогарифмический график, где представлены средние величины признаков с ошибкой по каждому десятилетию жизни (см. рисунок).

Из графика следует, что логарифмы величин признаков изменяются линейно с возрастом. Коэффициент прямолинейной корреляции (г) между возрастом и логарифмом величины концентрации холестерина равен 0,84±0,04, между логарифмом величины удельного содержания клеток в интиме и возрастом (обратная связь) г=—0,85±0,04, между логарифмом толщины интимы и возрастом г=0,90±0,02. Высокие коэффициенты корреляции выбранных признаков со временем дают возможность определить возраст по 3 исследуемым признакам.

Сущность метода заложена в сравнении величины возрастных признаков каждого конкретного случая с возрастными уровнями показателей временного развития интимы.

Формулы для определения возраста выведены соответственно из формул (2—7).

По величине признаков и соответствующим формулам для 3 показателей можно установить «возраст» интимы:

Искомый возраст равен среднему арифметическому экспериментально полученных «возрастов» интимы по холестерину (tx), по толщине (th) и удельному содержанию клеток интимы (tϱ):

Приближение к паспортному возрасту в целом по массиву оказалось наибольшим при использовании средней арифметической величины, полученной по 3 изучаемым показателям.

Приведенные закономерности старения интимы грудной аорты, по-видимому, характерны для жителей средней полосы России.

Методика определения возраста умершего по содержанию общего холестерина, толщине и удельному содержанию клеток интимы

Приготовление материала. В области передне-боковой стенки грудной аорты на уровне отхождения первой пары межреберных артерий, где атеросклеротические бляшки встречаются редко, вырезали по току крови участок аорты с нормальной интимой

размером от 1X2 до 2X3 см, иссекая при этом участки аорты с липидными пятнами и атеросклеротическими бляшками. Этот участок аорты с нормальной интимой считали за «стандартный» (в условиях, исключающих немедленную обработку материала, стандартный участок необходимо поместить в 5% нейтральный формалин). Далее резали его вдоль на 2 кусочка. Первый, размером 1,5X0,5 см, фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 5—6 дней для приготовления гистологических препаратов. От второго кусочка с помощью пинцета и ножниц отслаивали интиму от подлежащей медии.

Определение возраста умершего по концентрации холестерина в интиме грудной аорты. Интиму взвешивали. Навеска должна быть не менее 150 мг. Холестерин экстрагировали смесью Блюра (3 части этилового спирта и 1 часть диэтилового эфира) при комнатной температуре в темноте в течении 6—7 сут, концентрацию холестерина определяли по общепринятой методике М.И. Прохоровой и 3. Н. Тупиковой (1965).

Пример.

В опытной пробе концентрация холестерина (X) в интиме аорты была равна 2100 мг%. Логарифм этой величины равен 3,3222. Подставляя lgX в формулу (9), находим экспериментальный возраст по холестерину: t_x = 117,27 (lg 2100 — lg 250) = 117,27 (3,3222—2,3979) = 117,27 -0,924= 108 лет.

Определение возраста умершего по толщине интимы грудной аорты. Кусочек аорты, фиксированный в 10% растворе формалина, промывали в проточной воде, проводили через батарею спиртов и заливали в парафин, причем кусочек аорты ориентировали перпендикулярно к плоскости микротомного ножа. Готовили срезы толщиной 4—5 мкм. Для определения толщины интимы срезы окрашивали резорцин-фуксином Вейгерта (Г.А. Меркулов, 1961) или любым другим красителем по методике, выявляющей эластические мембраны. Толщину интимы измеряли при помощи окуляр-микрометра типа МОВ-1-15* от внутренней эластической мембраны до края эндотелия сосуда. Измеряли последовательно шагам в одно иоле зрения микроскопа, полученные показатели толщины интимы складывали и усредняли.

Пример.

По описанной методике установили, что толщина интимы й=350 мкм. lgft=2,5441. Подставив lgh в формулу (11), вычисляли экспериментальный возраст по толщине интимы: t_h= 112,9 (lg350 — lg68) =112,9 (2,5441—1,8325) = 112,9-0,711=80,3 года.

Определение возраста умершего по удельному содержанию клеток в интиме. Парафиновый срез толщиной 4—5 мкм окрашивали гематоксилином-эозином (Г.А. Меркулов, 1961). Окрашенные срезы помещали на предметный столик микроскопа, используя иммерсию, считали количество ядер клеток интимы, приходящихся на одно поле зрения микроскопа. Предварительно определяли площадь поля зрения микроскопа. Просмотр и подсчет клеток вели последовательно от эндотелия интимы до внутренней эластической мембраны, далее переходили на смежный участок, соблюдая при этом принятую последовательность подсчета. Считали клетки в 80—100 полях зрения, вычисляли среднюю величину удельного содержания клеток интимы на одно поле зрения. Зная площадь поля зрения при данном увеличении микроскопа, вычисляли количество клеток интимы, приходящихся на 1 мм².

Пример.

По описанной методике подсчитали удельное содержание (Q) клеток интимы, которое равно 420 клеток/мм², IgQ=2,6232. Подставив lgQ в формулу (13) для нахождения возраста по удельному содержанию клеток интимы, получили: t_Q =81,38 (lg 4900— lg 420) =81,38(3,6902—2,6232) =81,38-1,067=86,8 года.

Определение возраста умершего по 3 показателям. Возраст умершего вычисляли как среднее арифметическое показателей возрастов по 3 приведенным признакам. Рекомендуется следующая последовательность использования формул. Полученные по 3 показателям данные подставляют в формулы (9, 11, 13). Если экспериментальный возраст по формуле (14) окажется ниже 30 лет, определяют возраст по формулам (8, 10, 12) для первого возрастного интервала, далее находят возраст по формуле (14).

Пример.

Подставив значения полученных 3 возрастов (см. примеры) в формулу (14), получили искомый возраст:

Оказалось, что этот показатель превышает паспортный возраст данного индивидуума на 5,4%.

Проверка точности метода и распределение ошибок. В интервале возраста 10—89 лет получили среднюю величину абсолютного отклонения «возраста» интимы (в процентах) от паспортного возраста: М = —0,18, σ=±12,7 и m=±1,6 при п=62 случая. Таким образом, «возраст» интимы в 68% случаев соответствует паспортному возрасту индивидуума. Отклонения распределены в пределах +2σ или от +12,7% до —12,7%. В 16% случаев «возраст» интимы опережает паспортный (в интервале отклонений 12,7—35%) и в 16% случаев отстает от паспортного возраста (в интервале 12,7—35%).

Наибольший разброс абсолютных отклонений вычисленного возраста от паспортного наблюдается у лиц 9-го и особенно 10-го десятилетия жизни, что можно объяснить превалированием в этих группах долгожителей. У них процесс старения замедлен, поэтому долгожители по уровню изучаемых возрастных показателей похожи на лиц 8-го десятилетия жизни.

Между паспортным возрастом умершего и «возрастом» интимы коэффициент корреляции равен 0,95±0,01 (при t_r=24,7, Р<0,001 и п=62), что служит залогом надежности предлагаемого способа определения возраста.

Среднее абсолютное отклонение вычисленного возраста от паспортного составляет 10% в интервале 10—89 лет. Это указывает на то, что «возраст» интимы в стандартном участке грудной аорты соответствует паспортному возрасту.