О возможности фотометрического определения алкоголя в крови и моче трупов с помощью фотоэлектроколориметров

В последнее время все больше применяют физико-химические методы количественного определения алкоголя и, в частности, фотометрический, предложенный Feldstein и Klendshoj (1954). В Советском Союзе этот метод описан в работах В.М. Колосовой (1961, 1963) и И.С. Карандаева (1962, 1963), предложивших свою модификацию его для определения алкоголя в крови и моче трупов.

Сущность фотометрического метода определения алкоголя заключается в восстановлении бихромата калия в кислой среде алкоголем, ускоренно диффундирующим из объекта под действием карбоната калия. В зависимости от концентрации алкоголя раствор бихромата калия изменяет свою окраску от светло-оранжевой до темно-синей. После фотометрирования эталонных растворов, содержащих этиловый спирт, и контрольных проб строится градуировочный график, по которому определяется содержание алкоголя в исследуемых объектах. Использование 3 реактивов (раствора бихромата калия в серной кислоте, водного раствора перманганата калия и раствора м-нитробензальдегида в серной кислоте) позволяет установить наличие или отсутствие этилового алкоголя. Каждый из указанных реактивов реагирует по-разному, приобретая различные характерные окраски.

В.М. Колосова и И.С. Карандаев для фотометрирования восстановленного бихромата калия этиловым алкоголем предлагают универсальный фотометр «ФМ» или другие модели фотометров, работающих в видимой области спектра. По данным этих авторов, наиболее чувствительная область при определении этилового алкоголя на «ФМ» лежит в пределах длины волны 436—465 ммк. Быстрота и специфичность метода позволяют шире использовать его в судебно-медицинской практике. Многие судебно-медицинские лаборатории оснащены фотоэлектроколориметрами, работающими в видимой и ультрафиолетовой области спектра. Возникает возможность применения этих приборов для фотометрирования исследуемых растворов при определении алкоголя.

Оптические плотности растворов в зависимости от длины волны и толщины слоя кюветы

Калибровочный график при фотометрическом определении алкоголя.

Мы использовали для этой цели отечественный прибор ФЭК-М и однолучевой фотоэлектроколориметр, изготовленный в ЧССР. Шкалу готовили по методике И.С. Карандаева. Оптическая плотность шкальных растворов    (λ = 460 ммк, кювета с толщиной слоя 3 мм) была максимальной при концентрации 0, 4‰ по отношению к нулевой пробе; плотности следующих концентраций (2 и 4‰) при λ = 460 ммк были ниже нуля. Таким образом, фотометрирование исследуемых растворов на ФЭК-М при условиях, предложенных авторами, исключается. Это можно объяснить тем, что растворы со значительно различающимися цветовыми оттенками имеют свой максимум поглощения при различных длинах волн. В данном случае раствор с концентрацией алкоголя 0,4‰ светло-оранжевого цвета со слабым буроватым кольцом имеет максимум поглощения при λ = 480 ммк; при более глубоком восстановлении бихромата калия алкоголем (концентрации алкоголя 2—4‰ и выше) раствор приобретает бурый цвет с сине-зеленым кольцом и имеет максимум поглощения в другой области спектра.

В дальнейшем мы выявляли возможность фотометрирования шкальных растворов (концентрации алкоголя 0, 4, 2 и 4‰) и исследуемых проб на ФЭК-М при различных длинах волн и оптимальные условия для определения алкоголя (см. таблицу).

Как видно из таблицы, наибольшая оптическая плотность шкальных растворов достигается при λ = 620 ммк и кювете с толщиной слоя 5 мм. Поэтому фотометрирование эталонных растворов и исследуемых проб необходимо производить при этих условиях. Нулевой пробой служил раствор бихромата калия в контрольной пробе. Воспроизводимость шкалы при фотометрировании растворов с λ = 620 ммк составляет 2—8%. Градуировочный график строят по общеизвестным методикам: по оси ординат наносят цифровые значения шкалы оптической плотности, по оси абсцисс — значение концентрации этилового спирта в промиллях (см. рисунок).

При исследовании возможности применения ФЭК-М для фотометрического определения алкоголя мы изменили температурный режим термостатирования шкальных растворов. Пробы помещали в термостат при 65—70° на 30 мин. Ошибка воспроизведения при этом уменьшается до 2—5%.

Выводы

1. При фотометрическом определении этилового алкоголя в крови и моче трупов по методике В.М. Колосовой и И.С. Карандаева можно использовать фотоэлектроколориметры. Замеры оптических плотностей исследуемых растворов необходимо проводить при λ = 620 ммк и кювете с толщиной слоя 5 мм.
2. При повышении температуры термостатирования исследуемых проб до 65—70° ошибка воспроизведения уменьшается до 2—5%.