К вопросу исследования трупного материала на хлорохин

В последнее время в судебно-медицинской практике наблюдаются случаи отравления хлорохиндифосфатом (Л.И. Семененко, А.Н. Покус). В химическом отношении это дифосфат-7-хлор-4¹-диэтиламино-метилбутиламино-хинолин (синонимы: делагил, резохин, хлорквин, хин-гамин и др.), широко применяющийся для лечения малярии, волчанки, полиартритов, амебного гепатита, абсцесса печени и других заболеваний.     

В отечественной литературе мы не нашли указаний на методику обнаружения хлорохина, в иностранной встретили только работу Haskins. В ней описана качественная проба на хлорохин в моче, основанная на изменении окраски раствора метилоранжа в растворе борной кислоты. Метод неспецифичен и имеет низкую чувствительность.

Учитывая указанные недостатки, мы решили разработать качественные реакции на хлорохиндифосфат, изучить их чувствительность, специфичность и пригодность для судебно-химических целей.

Экспериментальная часть

С общеалкалоидными реактивами хлорохин дает нехарактерные аморфные осадки. Поэтому было обращено внимание на получение окрашенных продуктов. Известно, что при окислении аминов и производных хинолина могут образоваться окрашенные соединения. На этой основе мы разработали следующие реакции обнаружения хлорохина.

1. К части исследуемого порошка прибавляли каплю концентрированной серной кислоты и кристаллик бертолетовой соли. Через 1—2 мин. возникало красно-фиолетовое окрашивание. Открываемый минимум — 5 мкг.

2. К части исследуемого порошка прибавляли каплю концентрированной соляной кислоты и кристаллик бертолетовой соли. Тотчас возникало оранжево-желтое окрашивание. Открываемый минимум — 10 мкг.

3. К части исследуемого порошка прибавляли каплю 25% раствора серной кислоты и 1 каплю насыщенного раствора хлорной извести. Тотчас возникало желтое окрашивание, исчезающее или ослабевающее со временем. Открываемый минимум — 10 мкг.

4. К части исследуемого порошка прибавляли 5 капель 50% серной кислоты, кристаллик бихромата калия и нагревали на водяной бане. Через 2—3 мин. возникало зеленое окрашивание, переходящее от прибавления 25% раствора аммиака в фиолетовое. Открываемый минимум — 10 мкг.

Наличие в молекуле хлорохина хинолинового цикла позволило применить следующие реакции.

5. К 1 мл раствора хлорохиндифосфата прибавляли 0, 5 мл смеси равных объемов насыщенного раствора нитрата висмута в разведенной соляной кислоте и 10% раствора йодида калия. Образовывался оранжево-красный осадок. Открываемый минимум — 20 мкг.

6. К капле раствора хлорохиндифосфата прибавляли каплю бромной воды. Образовывался желтый осадок. Открываемый минимум — 5 мкг.

Специфичность реакций проверяли с аминохинолом, хинином, трихомонацидом, аминазином, депаркином, пипольфеном, ноксироном, нитропентоном, нембуталом, люминалом, барбамилом, пахикарпином, кокаином, резерпином, папаверином, дикаином, платифиллином, эрготалом, пилокарпином, кофеином, дионином, кодеином, сальсолидином, новокаином, пирамидоном, атропином и стрихнином. Специфическими для обнаружения хлорохина оказались реакции с концентрированными соляной и серной кислотами в присутствии бертолетовой соли и с 25% раствором серной кислоты и хлорной известью.

Аналог хлорохина — аминохинол — в реакции с концентрированной серной кислотой и бертолетовой солью дает интенсивное лимонно-желтое окрашивание сразу после прибавления серной кислоты, переходящее в вишнево-красное от прибавления бертолетовой соли. Открываемый минимум — 15 мкг.

Для идентификации хлорохиндифосфата в трупном материале провели следующие опыты. К 100 г измельченной печени прибавляли 0,5; 1; 5 и 10 мг хлорохиндифосфата в виде 0, 1% водного раствора и, тщательно перемешав, оставляли на 24 часа. Извлекали подкисленной водой (при pH 3, 0—4, 0) по методу Васильевой с последующим извлечением эфиром из кислой (pH 3, 0—4, 0) и щелочной среды (при pH 10, 0). Целесообразность такого варианта объяснялась следующим. Хлорохин-дифосфат и другие его соли хорошо растворимы в воде и плохо в спирте, эфире, хлороформе и др. Основание хлорохина легко растворяется в эфире, плохо в хлороформе, дихлорэтане и др.

Остатки по испарении растворителя при комнатной температуре растворяли в точном объеме этилового спирта (не более 5—10 мл) и исследовали качественно и количественно.

Качественное исследование сухих остатков проводили общеалкалоидными, а также предлагаемыми цветными реакциями на хлорохин. Положительные результаты были получены только, с остатками щелочных извлечений.

В отечественной литературе мы не нашли данных о количественном определении хлорохина. В иностранной литературе имеется несколько работ. Так, Parikh, Mukherji использовали способность хлорохина образовывать нерастворимые осадки с кремневольфрамовой кислотой для весового метода определения последнего в таблетках и инъекционных растворах. Fuhrmann описал усовершенствованный метод определения хлорохина в моче на основе образования труднорастворимого комплекса с хлоридом ртути. Kurada исследовал продукты обмена хлорохина методами хроматографии и УФ спектрофотометрии. Baumler, Ludin определяли хлорохин в крови и желудке с содержимым методами тонкослойной хроматографии, УФ и ИК спектроскопии. Brodie и др. применили флуоресцентный метод определения хлорохина.

Для количественного определения хлорохина мы пользовались методом Fuhrmann как наиболее доступным. Определенную часть остатка (после испарения спирта) растворяли в точном объеме 0,1 н. раствора соляной кислоты (50—100 мл), 1—2 мл этого раствора переносили в колориметрическую пробирку емкостью 10 мл, 0,1 н. раствором соляной кислоты доводили до метки и прибавляли 0,25 мл реактива Таире (раствор 2,7 г сулемы и 7,2 г йодида калия в 100 мл воды в присутствии 5 мл ледяной уксусной кислоты). Через 10 мин. сравнивали степень мутности со стандартной шкалой, приготовленной одновременно с испытуемой пробой в пределах 2—20 мкг с интервалом 2 мкг.

Как видно из таблицы, хлорохин извлекается водой в пределах 67-81,5%.

Результаты опытов

Во всех параллельно поставленных контрольных опытах качественные реакции на основание хлорохина были отрицательными.

На основании экспериментальных данных предлагается следующая методика исследования трупного материала: а) изолирование хлорохина производят из 100 г измельченного материала подкисленной водой по методу Васильевой (при pH 3, 0—4, 0) с последующим извлечением эфиром из аммиачной среды при pH 10, 0(5×40 мл). Эфирные извлечения объединяют и оставляют в чашке Петри для испарения. Остаток растворяют в точном объеме этилового спирта (5—10 мл). Капли этого раствора наносят на предметные стекла и фарфоровые пластинки. Остатки по испарении растворителя исследуют общеалкалоидными реактивами и приведенными выше цветными реакциями на хлорохин.

Количественное определение проводят так, как это описано выше. Необходимо учитывать возможность завышения результатов при исследовании сильно разложившегося трупного материала.

Разработанную методику успешно применили для исследования внутренних органов трупа ребенка, умершего от отравления хлорохин-дифосфатом. По количеству обнаруженного хлорохина в 100 г объекта органы можно расположить в следующем порядке: желудок, кишечник, почки, легкие. В мозгу хлорохин не обнаружен.