Обнаружение платифиллина, саррацина и сенецифиллина в биологическом материале

Платифиллин, саррацин и сенецифиллин — производные 1-метил-пирролизидина — являются алкалоидами растений рода Senecio (крестовники).

Применение платифиллина и саррацина в качестве спазмолитиков и сенецифиллина для получения других фармацевтических препаратов, а также ядовитость этих алкалоидов создают возможность отравления ими, что вызывает необходимость соответствующих токсикологических исследований биологического материала. В литературе этому вопросу не уделяется достаточного внимания.

Данная работа проведена с целью изучения возможности идентификации платифиллина, саррацина и сенецифиллина в биологическом материале.

Мы избрали микрокристаллоскопический метод в сочетании с кристаллооптикой, позволяющий с большой точностью идентифицировать алкалоиды по характерной форме и специфическим кристаллооптическим константам микрокристаллов алкалоида либо продукта его реакции с тем или иным реактивом.

Экспериментальная часть

Мы установили некоторые кристаллооптические константы платифиллин- и саррацин-гидротартратов (применяемых в медицине), а также сенецифиллин- и платифиллин-оснований, приводимые в табл. 1.

Таблица 1

Кристаллооптические константы саррацингидротартрата, платифиллин- и сенецифиллин-оснований

Примечания. Кристаллы бесцветные, угол погасания 0°. Кристаллооптические константы платифиллингидротартрата определены В.Т. Поздняковой в 1960 г.

В поисках микрокристаллических реакций мы изучили отношение этих алкалоидов более чем к 20 реактивам. Было установлено, что указанные алкалоиды плохо образуют кристаллические осадки.

Рис. 1. Кристаллы хлороаурата платифиллина, выделенные из раствора алкалоида.

Были получены хорошо оформленные кристаллические осадки для платифиллина с золотохлористоводородной кислотой, саррацина с солью Рейнеке и сенецифиллина с составным реактивом (золотохлористоводородная кислота, ацетон и хлористоводородная кислота).

Ниже указаны условия проведения реакций, их чувствительность, а также некоторые установленные нами кристаллооптические константы продуктов реакций.

Хлороаурат платифиллина — C₁₈H₂₇0₅N • AuCl₃. Желтые сростки из призматических кристаллов (рис. 1), образующиеся при взаимодействии платифиллина с 10% раствором хлорного золота. Средний размер 0,16х0,02 мм. Открываемый минимум 16 мкг платифиллина. Предельная концентрация 1:1250. Кристаллы двуосные, ромбической сингонии, угол погасания 0°, знак удлинения положительный. Показатели преломления: n_g = 1,621; n_р= 1,573; двупреломление n_g—n_р = 0,058.

Рейнекат саррацина — C₁₈H₂₇O₅N • [Cr(CSN)₄ • (NH₃)₂]. При взаимодействии саррацин-гидротартрата с 1% свежеприготовленным раствором соли Рейнеке (тетрароданодиаминохромиата аммония) образуются сложные розетки из почти неокрашенных призматических кристаллов (рис. 2) размером 0, 24X0, 2 мм. Открываемый минимум 12,5 мкг. Предельное разбавление 1:4000. Кристаллизация лучше протекает в эксикаторе; при низкой температуре она замедляется. Кристаллам присуще прямое погасание, отрицательное удлинение. Показатель преломления n =1,678; n_р= 1,621; двупреломление n_g—n_р = 0,057.

Рис. 2. Кристаллы рейнеката саррацина, выделенные из раствора алкалоида.

Рис. 3. Кристаллы хлороаурата сенецифиллина, выделенные из раствора алкалоида.

Хлороаурат сенецифиллина — C₁₈H₂₃O₅N • AuCl₃. При взаимодействии сенецифиллина с каплей реактива, состоящего из 10% раствора золотохлористоводородной кислоты, ацетона и концентрированной хлористоводородной кислоты в соотношении 1:1:1, образуются желтые сростки в виде веток из игл (рис. 3) средней длиной 0, 5 мм. Открываемый минимум 25 мкг. Предельное разбавление 1:800. Кристаллы двуосные, угол погасания 0°, удлинение отрицательное. Показатели преломления: n_g = 1,6044; n_р = 1,5623; двупреломление n_g—n_р= 0,421.

Определение кристаллооптических констант алкалоидов и продуктов их микрокристаллических реакций проводили поляризационным микроскопом. Показатели преломления измеряли иммерсионным методом, используя набор жидкостей Харьковского завода реактивов.

При определении кристаллооптических констант продуктов реакций предварительно полосками фильтровальной бумаги удаляли маточный раствор, кристаллы промывали 1—2 каплями воды, высушивали фильтровальной бумагой и под покровное стекло вводили иммерсионную жидкость.

Разработанные микрокристаллические реакции с данными кристаллооптических исследований продуктов реакций использовали для исследования биологического материала. Изолирование производили 2 методами: извлечением водой, подкисленной щавелевой или винной кислотой, и по Крамаренко (извлечение водой, подкисленной до pH 2, 5—3, 0 серной кислотой). В качестве биологического материала использовали 100 г измельченной печени трупа человека, смешанной за сутки до исследования с платифиллином, саррацином или сенецифиллином.

Остатки после извлечения хлороформом из подщелоченной вытяжки биологического материала, не очищая, растворяли в 1 мл 0,1 н. раствора хлористоводородной кислоты и исследовали на платифиллин реакцией с хлорным золотом, на саррацин с солью Рейнеке и на сенецифиллин составным реактивом: золото, хлористоводородная кислота, ацетон, концентрированная хлористоводородная кислота (1:1:1). В случае получения кристаллов определяли их кристаллооптические константы.

Исследования показали возможность применения указанных реакций и кристаллооптических констант продуктов реакций для доказательства наличия платифиллина, саррацина и сенецифиллина в биологическом материале.

В табл. 2 приведены границы обнаружения платифиллина, саррацина и сенецифиллина в биологическом материале микрокристаллоскопическими реакциями с хлорным золотом, солью Рейнеке и составным реактивом.

Таблица 2

Границы обнаружения платифиллина, саррацина и сенецифиллина в биологическом материале

Рис. 4. Кристаллы хлороаурата платифиллина, выделенные из биологического материала.

Рис. 5. Кристаллы рейнеката саррацина, выделенные из биологического материала.

Как видно из табл. 2, границы обнаружения при извлечении из биологического материала водой, подкисленной щавелевой кислотой, несколько выше, чем водой, подкисленной серной кислотой. Однако последнее требует меньше времени, а полученные остатки значительно чище.

При идентификации платифиллина хлорным золотом и саррацина солью Рейнеке в отдельных опытах по мере приближения концентрации к границе обнаружения (около 0,005 г на 100 г материала) наблюдалось некоторое изменение формы кристаллов (рис. 4 и 5), однако кристаллооптические свойства оставались прежними.

Форма кристаллов сенецифиллин-хлороаурата, выделенного из биологического материала, оставалась неизмененной.

Выводы

1. Разработаны микрокристаллоскопические реакции обнаружения платифиллина, саррацина и сенецифиллина.
2. Определены кристаллооптические свойства как для самих алкалоидов (саррацин-гидротартрат, платифиллин- и сенецифиллин-основания), так и для продуктов взаимодействия их с реактивами: платифиллина — с хлороауратом золота, саррацина — с солью Рейнеке, сенецифиллина — с хлороауратом золота в присутствии ацетона и концентрированной соляной кислоты.
3. Данный метод можно использовать при доказательстве наличия указанных алкалоидов в биологическом материале¹.

¹ Микрокристаллические реакции с определением кристаллооптических свойств для платифиллина были применены также для исследования трупного материала от белых мышей, отравленных алкалоидам, и дали резко положительные результаты.