Применение электрофореза и эмиссионной спектрографии для установления живорожденности

В отечественной и зарубежной литературе опубликованы многочисленные сообщения о применении электрофореза для исследования белков сыворотки и плазмы крови, экссудатов и транссудатов, женского молока, спермы, мочи, слизи и т. д. (А.А. Прокофьева-Бельговская, 1948; Н.И. Лазаров и В.М. Зайцев, 1957; Г. Фонген и П. Мюллер, 1960; А.С. Литвак, 1962; М.Б. Табакман, 1963; Ю.В. Павлов, 1964; Б.М. Семенов, 1965, и др.).

Как известно, в клинической практике важное место отводят определению белковых фракций, содержание и изменение которых отражают реактивность организма и имеют большое диагностическое значение.

О.М. Фейгина с соавторами (1964), В.А. Таболин и Ю.В. Вельтищев (1964), В.И. Яблокова (1965), В.А. Тородайко (1966) исследовали содержание белковых фракций в сыворотке крови новорожденных детей при поздних токсикозах, гемолитической болезни, недоношенности. Выявлен ряд характерных изменений по сравнению с нормой.

Изучая белковые фракции у плодов в различные сроки антенатального периода, В.И. Яблокова выяснила, что с нарастанием срока внутриутробной жизни количество альбуминов постепенно снижается, а процентное содержание γ-глобулинов постепенно увеличивается.

Анализ сывороток новорожденных детей позволяет изучить проницаемость плаценты для различных белковых фракций. Отсутствие определенных сывороточных белков, характерных для материнского организма, у новорожденных показывает, что эти белки не проходят через стенку плаценты (В. Гитциг, 1963).

После рождения в кровь младенца уже не поступают готовые белки — они целиком синтезируются в его организме.

Исследуя сыворотку в первые дни и месяцы после рождения, можно получить представление о белковом синтезе в этот период (Шейдегер с соавторами, 1956).

По данным В. Гитциг, содержание альбумина у новорожденных не снижается, а содержание у-глобулинов, наоборот, после рождения резко падает. Следовательно, альбумин синтезируется самим плодом, а γ-глобулины поступают от матери.

В доступной литературе мы не встретили работ о сравнительном определении содержания количества белковых фракций сыворотки крови у мертворожденных и живорожденных младенцев и о возможности установления живорожденности методом электрофореза.

Для решения этого вопроса мы применили электрофорез на бумаге. Изучали белковые фракции сыворотки трупов 35 живо- и 35 мертворожденных младенцев. Из яремной вены брали 1—2 мл крови, центрифугировали при 4000 оборотах в течение 30 мин. Брали 0,01 мл сыворотки для электрофоретического разделения белков (по общепринятой методике), используя аппарат для электрофореза Киевских экспериментальных мастерских (ЭМИБ), хроматографическую бумагу, веронал-мединаловый буфер при pH 8,6. Разделение производили при комнатной температуре в течение 3,5 часов (напряжение 350 в, сила тока 4 ма). Белковые фракции окрашивали бром-феноловым синим, а краситель, не связанный с белком, удаляли 2% уксусной кислотой. Количество белка в отдельных фракциях определяли фотоэлектроколориметрически.

В фореграммах, полученных из сыворотки крови новорожденных младенцев, постоянно выявлялись следующие фракции: альбумины, α₁-, α₂-, β-, и γ-глобулины. В сыворотке крови из трупов живорожденных младенцев фракция альбуминов и α-глобулинов выражена более четко, чем у мертворожденных (табл. 1).

Как видно из табл. 1, содержание белковых фракций в частности, альбуминов, α1- и γ-глобулинов) у живо- и мертворожденных младенцев резко различается. Это может быть использовано для суждения о живорожденности или мертворожденности.

Таблица 1

Результаты исследования белковых фракций сыворотки из трупов живорожденных и мертворожденных младенцев

Естественно, что указанные выше изменения белковых фракций в сыворотке не могли произойти без существенного перераспределения макро- и микроэлементов в организме младенца (в частности, в крови).

Многие отечественные и зарубежные авторы указывают, что микроэлементы, вступая во взаимодействие с белками, образуют сложные комплексные соединения, обладающие высокой биологической активностью (церулоплазмин — соединение меди с белками, входящее в состав α-глобулиновой фракции, железосодержащие ферментные комплексы — гемопротеин, трансферин, сизерафелин и т. д.).

А.О. Войнар (1956), комбинируя электрофорез с последующим спектральным анализом, установил, что в комплексе альбуминов сыворотки крови содержатся в пересчете на золу 0,01 % Pb, 0,1% Si, 0,05% Cu, 0,01% Mn, 0, 01% Ti, 0,01% Al; фракция α₁-глобулина бедна микроэлементами, а фракция α₂-глобулина содержит преимущественно Cu, Si; β-глобулины содержат 0,01% Pb, 0, 01% Mn, 0,1 % Si, 0,1% Ti, 0,01 Cu, 0,01% Al, 0,001% Cr, 0,05% Zn; наиболее богаты микроэлементами γ-глобулины.

Опубликована обширная литература о микроэлементах крови (В. Ковальский и В.С. Чебаевская, 1952; И.С. Гусев с соавторами, 1953; А.О. Войнар, 1955; Ш.В. Бабаев, 1956; А.К. Павлова, 1956; В.А. Монов, 1956; М.Б. Алексеева и В.И. Белозерская, 1957; М.А. Васильев, 1956; М.Б. Табакман, 1965, и др.), доказано активное участие элементов фосфора, железа, меди в процессах газообмена, тканевого дыхания и т. д.

Для изучения неорганических элементов крови из трупов живорожденных и мертворожденных младенцев мы применили эмиссионную спектрографию. В химически чистые тигли брали по 2 мл крови из трупов новорожденных, высушивали в сушильном шкафу при температуре 60° до постоянного веса, а затем без обугливания растирали в агатовой ступке до пудрообразного состояния. В навесках по 25 мг каждый объект (кровь) спектрографировали по 3 раза, снимая на спектрографическую пластинку сначала спектр железа, потом эталон (печень из трупа взрослого).

Мы пользовались эмиссионным спектральным анализом с общей системой исследования объектов для идентификации (или дифференциации), разработанной в Научно-исследовательском институте судебной медицины Министерства здравоохранения СССР. Спектрограммы фотометрировали микрофотометром МФ-2. Всего исследовали кровь из 48 трупов живорожденных и 48 мертворожденных младенцев.

В крови из трупов младенцев постоянно обнаруживали до 15 элементов, в том числе Р, Cu, Са, К, Na, Fe, А1 и др.

Для дифференциальной диагностики мертво- и живорожденности использовали коэффициенты отношений Mg/P, Fe/P, Са/Р, Cu/P, Na/P,. К/P.

Как видно из табл. 2, коэффициенты отношений Cu/Р и Са/Р у живорожденных и мертворожденных значительно различаются. Они могут служить дифференцирующими признаками при установлении живорожденности. Статистическая обработка полученных нами данных показала достоверность и специфичность результатов исследования.

Таблица 2

Результаты спектрографического исследования крови из трупов живорожденных и мертворожденных после статистической обработки

Выводы

1. Для судебно-медицинского установления живорожденности можно применять электрофорез, так как процентное содержание ряда белковых фракций сыворотки крови у живо- и мертворожденных различное.
2. Установить живорожденность эмиссионным спектральным анализом крови можно, так как относительное количественное содержание ряда элементов у живо- и мертворожденных младенцев различно.