Обнаружение бриллиантового зеленого в трупном материале

Бриллиантовый зеленый (viride nitens, блестящая зелень, основной ярко-зеленый, смарагдовый зеленый, малахитовый зеленый Ж) – бис-пара-диэтиламино)-трифенилангидрокарбинола оксалат [2, 3, 6, 12]. Зеленовато-золотистые комочки или золотисто-зеленый порошок, трудно растворим в воде (1:50) и спирте (1:50), растворим в хлороформе. Растворы имеют интенсивно зеленый цвет. Разлагается на прямом солнечном свете. Применяют наружно как антисептическое средство в виде 1-2% спиртового или водного раствора для смазывания при пиодермии, блефарите и др. [6]. При введении белым крысам через рот максимально переносимая доза 0,001 г/кг, абсолютная смертельная доза 0,05 г/кг. При вскрытии трупов погибших животных обнаруживают поверхностный некроз слизистой оболочки желудка и тонкой кишки, распад эритроцитов в кровяном русле, острую эмфизему, выраженные полнокровие и кровоизлияния в легких. У человека в производственных условиях бриллиантовый зеленый вызывает воспалительные заболевания кожи [2].

В практике судебно-химического отделения Бюро судебно-медицинской экспертизы Комитета по здравоохранению Иркутской области до 1991 г. не было ни одного случая обнаружения бриллиантового зеленого в трупном материале. В доступной литературе мы не встретили описания случаев обнаружения этого вещества в биологическом материале.

Приводим 2 случая из нашей практики.

Наблюдение 1. 12.11.91 из морга Иркутска были доставлены кровь и внутренние органы от трупа гр-на Т., 40 лет. Из сопроводительных документов было известно, что Т. Пытался отравиться бриллиантовым зеленым и таблетками неизвестного состава. Кровь была направлена для исследования на этанол, а внутренние органы – на лекарственные препараты.

При визуальном исследовании трупного материала было обращено внимание на изумрудно-зеленую окраску стенки желудка с содержимым, на слизистой оболочке тонкого кишечника имелись пятна зеленого цвета. От желудка и кишечника ощущался посторонний «аптечный» запах; рН среды: желудка – слабокислая по лакмусу, 5,0-6,0 по универсальному индикатору. Phan, отрицательная – по Конго; среда кишечника – нейтральная, печень имела обычный внешний вид.

В результате проведенной экспертизы в крови было обнаружено 2,3‰ этанола, в желудке, тонком кишечнике и печени были обнаружены фенобарбитал в количестве 2,4, 1 и 0,6 мг% соответственно и бриллиантовый зеленый. Изолирование лекарственных препаратов проводили подкисленной водой по методу А.В.Васильевой [11]. Кислые вытяжки имели следующую окраску: из желудка – изумрудно-зеленую, из кишечника – бледно-зеленую, из печени – зеленоватую. Основные вытяжки имели обычный внешний вид.

Для обнаружения фенобарбитала исследовали кислые вытяжки. Проводили хроматографию в тонком слое сорбента, микрокристаллоскопию, УФ-спектрфотометрию [8]. Хроматографию проводили в тонком закрепленным слое силикагеля марки КСК в системах растворителей: I – хлороформ-ацетон (9:1), II – хлороформ-н-бутанол-25% раствор аммиака (70:40:5). В качестве «свидетелей» использовали растворы фенобарбитала (в хлороформе) и бриллиантового зеленого (в этаноле). Фронт пробега растворителя – 10 см. На 1-й хроматограмме на участке с вытяжками и бриллиантовым зеленым визуально наблюдали образование пятен, имеющих собственную окраску изумрудно-зеленого цвета с Rf 0 (на линии старта). На 2-1 хроматограмме наблюдали образование полосы того же цвета от линии старта до фронта растворителя. В качестве проявителя применяли хлороформный раствор дифенилкарбазона, затем раствор сульфата ртути [8]. Rf фенобарбитала: I – 0,37, II – 0,55. Микрокристаллоскопию и УФ-спектрофотометрию фенобарбитала проводили после хроматографической очистки в 1-й системе.

Для микрокристаллоскопии использовали реакцию выделения кислотной формы, реакции с хлорцинкйодом, железоиодидной комплексной солью и реактивом Лозовой [8]. УФ-спектр поглощения снимали на спектрфотометре СФ-26 в диапазоне длин волн 220-300 нм (кювета с длиной оптического пути 1 см). Максимум светопоглощения отмечали при 239-240 нм. Для количественного определения фенобарбитала использовалась разность оптических плотностей ΔD – D _{рН 10,0} – D _{рН 2,0} при 239-240 нм [8]. Для подтверждения отсутствия азотсодержащих веществ основного характера использовали осадочные реакции и хроматографию в тонком слое сорбента, исследовали кислые и основные вытяжки. В качестве осадительных применяли реактивы Драгендорфа, Вагнера, Марме, Майера [11]. Были получены отрицательные результаты. Хроматографию проводили в системах: I – этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17:2:1), II – этилацетат-ацетон-25% раствор аммиака в этаноле 1:1 (50:45:4). Проявители: I – модифицированный реактив Драгендорфа, II – смесь (1:1) 50% серной кислоты и этанола. На 1-й хроматограмме до проявления на участке с кислыми вытяжками визуально наблюдали образование вертикальной полосы (на расстоянии от 20 до 30 мм выше линии старта) и пятна на линии фронта растворителя, имеющие собственную окраску изумрудно-зеленого цвета. На участке с основными вытяжками полос, пятен не наблюдали. На 2-й хроматограмме также на участке с кислыми вытяжками наблюдали пятна на линии фронта растворителя того же цвета, которые при проявлении изменили цвет на оранжевый. В системах I и II исследовали бриллиантовый зеленый. Были получены аналогичные результаты. Для подтверждения присутствия в кислых вытяжках бриллиантового зеленого использовали реакции с разведенной соляной кислотой и раствором едкого натра [3]. С этой целью часть каждого кислого извлечения испаряли в фарфоровой чашке при комнатной температуре досуха, сухой остаток растворяли в 2 мл дистиллированной воды, раствор делили на 2 части. К одной части прибавляли по каплям разведенную соляную кислоту, наблюдали изменение изумрудно-зеленой окраски раствора на оранжевую; к другой части по каплям прибавляли раствор едкого натра, наблюдали выпадение бледно-зеленого осадка. Параллельно исследовали модельную смесь.

На экспертном материале и в модельной смеси получены аналогичные результаты.

Наблюдение 2. 16.03.92 из морга г. Киренска были доставлены кровь и внутренние органы от трупа гр-на К., 56 лет, который с суицидальной целью якобы выпил таблетки неизвестного состава. Кровь направлена для исследования на этанол, внутренние органы – на лекарственные препараты. При наружном осмотре были отмечены зеленоватая окраска слизистой оболочки желудка и его содержимого, а также посторонний неприятный запах, напоминающдий запах гниющей рыбы. Печень имела обычный внешний вид. В крови обнаружено 1,5‰ этанол, в желудке и печени – бриллиантовый зеленый и хлорхолинхлорид. Изолирование лекарственных препаратов проводили, как и в первом наблюдении, подкисленной водой по методу А.В.Васильевой [11]. Исследование кислых и основных вытяжек проводили аналогичным образом. В кислых вытяжках был обнаружен бриллиантовый зеленый. При исследовании основных вятежк использовали осадительные реактивы Драгендорфа, Вагнера, раствор йодида свинца в йодиде калия и тиосульфате натрия, раствор хлорцинк-йода [1]. Наблюдали образованиеобильных осадков. При хроматографировании в системе этилацетат-метанол-25% раствор аммиака (17:2:1) и проявлении реактивом Драгендорфа наблюдали пятна буро-оранжевого цвета с Rf 0 (на линии старта); Rf «свидетеля» хлорхолинхлорида 0. Изолирование хлорхолинхлорида проводили по методике, разработанной в Краснодарском краевом бюро судебно-медицинской экспертизы [9]. Полученную спиртовую вытяжку исследовали микрокристаллоскопическими реакциями в сочетании с хроматографией в тонком фиксированном слое целлюлозы в системе растворителей н-бутанол-ацетон-эфир-6 н. соляная кислота (5:1:2:2). Длина пути фронта растворителя 15 см. Проявитель – реактив Драгендорфа. В зоне локализации хлорхолинхлорида образовалась полоса буро-оранжевого цвета с Rf 0,60. Сорбент с места локализации хлорхолинхлорида выделяли и промывали 1% раствором аммиака. Собирали 3 мл элюата, который выпаривали досуха. В остатке подтверждали наличие хлорхолинхлорида микрокристаллоскопическими реакциями с раствором йодида свинца в йодиде калия и тиосульфате натрия, с раствором хлорцинкйода и реактивом Драгендорфа [1]. Были получены характерные микрокристаллы. Параллельно проводили опыт с модельной смесью. На экспертном материале и модельной смеси были получены аналогичные результаты.

ЛИТЕРАТУРА

1. Анохин В.Т., Зимнухов В.В., Низамиди В.Г. // Суд.-мед.эксперт. -1979. -№ 1. -С.51-53.
2. Вредные вещества в промышленности. -Л.,1963. -Ч.1. -С.635.
3. Государственная фармакопея СССР. 10-е изд. -М.,1968. -С.736.
4. Краткая химическая энциклорпедия.-М.,1961. -Т.1. -С.464.
5. Ластаева С.М. // Фармация. -1972. -№ 3. -С.80-81.
6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. -М.,1977.-Ч.2.-С.362.
7. Мельников Н.Н. Химия пестицидов. -М.,1968.-С.105.
8. Об определении производных барбитуровой кислоты при химико-токсикологических исследованиях: Метод. указания. -М.,1974.
9. Пилипас В.Ф., Зимнухов В.В. // Всероссийский съезд судебных медиков, 1: Тезисы докладов. -М.,1981.-С.211-213.
10. Чалмерс Л. Химические средства в быту и промышленности: Пер. с англ. -Л.,1969. -С.301-302.
11. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. -М.,1975.-С.125;166-167.
12. Энциклопедический словарь аптечного работника. -М.,1960.-С.84.