Разработка и валидация методики определения этилглюкуронида и этилсульфата как маркеров прижизненного употребления этилового спирта

Эксп. Н.Н. ЕРОЩЕНКО^1,2, к.фарм.н. С.С. БАРСЕГЯН³, эксп. А.Н. КИРЮШИН^2,3, к.б.н. Н.О. ТУАЕВА², к.т.н. А.Е. НОСЫРЕВ^2,3, зав. отд. В.Е. САЛОМАТИН⁴

¹ Центральная химико-токсикологическая лаборатория (зав. — к.т.н. А.Е. Носырев) Первого Московского государственного медицинского университета им. И.М. Сеченова Минздрава России, Москва, Россия, 119991;
² лаборатория аналитической токсикологии (зав. — к.т.н. А.Е. Носырев) Федерального медицинского исследовательского центра психиатрии и наркологии им. В.П. Сербского Минздрава России, Москва, Россия, 119002,
³ Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента здравоохранения Москвы (нач. — д.м.н. С.В. Шигеев), Москва, Россия, 115516;
⁴ ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» (дир. — д.м.н. А.В. Ковалев) Минздрава России, Москва, Россия, 125284

Цель исследования — разработка и валидация быстрой воспроизводимой методики определения этилглюкуронида и этилсульфата, позволяющей сохранять и транспортировать объекты исследования без потери веществ путем нанесения образцов на бумагу. Разработана валидированная методика обнаружения и количественного определения этилглюкуронида и этилсульфата в трупной крови и моче методом тандемной масс-спектрометрии низкого разрешения с применением в качестве внутреннего стандарта дейтерированных производных данных веществ. Установлены нижний предел количественного определения — 50 нг/мл в крови и 100 нг/мл в моче для обоих веществ, точность и прецизионность с коэффициентом вариации не более 15%, влияние матрицы с коэффициентом вариации не более 15%. Изучена стабильность веществ в крови при хранении в течение 2 нед в высушенном виде на бумажном носителе (коэффициент вариации не более 6,4%). Проведено сравнительное исследование этилглюкуронида и этилсульфата в образцах трупной крови и мочи, содержащих от 0 до 5,2‰ этилового спирта. Предложен способ транспортировки биологических жидкостей и изолирования веществ с применением бумажных носителей Whatman 903. Показана возможность применения этилглюкуронида и этилсульфата в качестве маркеров прижизненного употребления этилового спирта при исследовании гнилостно измененных объектов крови.

Ключевые слова: этилглюкуронид и этилсульфат, этиловый спирт, ВЭЖХ/МС.

The development and validation of the method for the identification of ethyl glucuronide and ethyl sulfate as the markers of the consumption of ethyl alcohol during one’s lifetime

N.N. EROSHCHENKO^{1, 2}, S.S. BARSEGYAN³, A.N. KIRYUSHIN^{2, 3}, N.O. TUAEVA², A.E. NOSYREV^{2, 3}, V.E. SALOMATIN⁴

¹ Central Chemical-Toxicological Laboratory, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of the Russia, Moscow, Russia, 119991;
² Laboratory of Analytical Toxicology, V.P Serbsky Federal Medical Research Centre of Psychiatry and Narcology, Ministry of Health of the Russia, Moscow, Russia, 119002;
³ Bureau of Forensic Medical Expertise, Moscow Health Department, Moscow, Russia, 115516;
⁴ Russian Centre of Forensic Medical Expertise, Ministry of Health of the Russia, Moscow, Russia, 125284

The objective of the present study was the development and validation of the rapid reproducible method for the identification of ethyl glucuronide and ethyl sulfate allowing to store and transport the study specimens without the loss of the substances of interest by placing the samples on the paper. We have developed the validated technique for the detection and quantitative determination of ethyl glucuronide and ethyl sulfate in the cadaveric blood and urine by means of low-resolution tandem mass-spectroscopy with the use of deuterated derivatives of these substances as the internal standards. The low threshold for quantitative determination of both above substances is 50 ng/ml for the blood and 100 ng/ml for the urine. The method is characterized by the accuracy and precision with the coefficient of variation below 15% and the influence of the matrix with the coefficient of variation below 15%. The evaluation of stability of the two analytes in blood when stored in the dry condition on the paper carrier during 2 weeks showed that the coefficient of variation did not exceed 6.4%. The comparative study of ethyl glucuronide and ethyl sulfate in the samples of cadaveric blood and urine containing from 0 to 5.2% of ethyl alcohol was carried out. The methods for the transportation of the biological fluids and for the extraction of ethyl glucuronide and ethyl sulfate placed on the paper carrier (Whatman 903) have been proposed. The possibility has been demonstrated to use ethyl glucuronide and ethyl sulfate as the markers of the consumption of ethyl alcohol during one’s lifetime for the purpose of investigation of the putrifactive changes of the blood components.

Keywords: ethyl glucuronide, ethyl sulfate, ethyl alcohol, high performance liquid chromatography, mass-spectroscopy.

DOI: 10.17116/sudmed201861442