Возможность дифференцирования крови плода и крови взрослого человека в пятнах

В 1866 г. профессор Юрьевского университета Корбер впервые отметил, что гемоглобин взрослого человека менее устойчив к действию щелочей, чем гемоглобин плода.

В дальнейшем изучением этого вопроса занимались Крюгер (1887), его ученик Вакуленко (1910), а также другие отечественные исследователи и ряд иностранных авторов.

В настоящее время предложено несколько методов, позволяющих отличать гемоглобин плода от гемоглобина взрослого человека. У плода имеется «плодный гемоглобин» и небольшое количество «гемоглобина взрослого». К 8 месяцам внеутробной жизни «плодный гемоглобин» почти полностью заменяется «гемоглобином взрослого». Гемоглобин, обладающий свойствами «плодного гемоглобина», может встречаться и у взрослых людей при некоторых патологических состояниях, в частности он содержится в крови при некоторых формах анемии (особенно при так называемой серповидной анемии).

В следственной и судебномедицинской практике в случаях детоубийства может возникнуть необходимость установить, кому принадлежит кровь в том или ином пятне — плоду или взрослому человеку. Для выяснения возможности решения данного вопроса в судебномедицинской практике нами были апробированы три метода.

Кровь из пуповины новорожденных и ретроплацентарную кровь исследовали в жидком и сухом виде (высушивали на чашках Петри); кроме того, из нее готовили пятна на марле. Пятна и кровь высушивали и хранили при комнатной температуре.

Непосредственное воздействие щелочи на жидкую кровь, вытяжки из пятен и растворы сухой крови

Жидкую кровь новорожденных и взрослых людей (всего 15 образцов) испытывали 0,1 N раствором NaOH. Пробу проводили на тарелках. К 2 каплям крови добавляли каплю щелочи; при этом гемоглобин всех образцов крови новорожденных не изменял своего цвета в течение 30—40 минут наблюдения, в то время как цвет гемоглобина взрослого человека через 1—2 минуты резко изменялся.

Исследование растворов сухой крови и вытяжек из пятен крови также производили на тарелках, причем к 3 каплям раствора или вытяжки добавляли каплю 0,2 N раствора NaOH. Для контроля тут же на тарелках к 3 каплям вытяжки или раствора крови добавляли каплю дистиллированной воды.

Мы использовали вытяжки и растворы крови с содержанием гемоглобина 0,7%, что устанавливалось фотометрически. Растворы и вытяжки крови готовили на дистиллированной воде.

Исследования показали, что при работе с растворами сухой крови гемоглобин новорожденных четко дифференцируется от гемоглобина взрослых людей при давности корочек крови в пределах 3—4 недель, а при работе с вытяжками из пятен крови — при давности пятен крови не более 8—10 дней. При большей давности результаты были менее четкими.

Спектральное исследование

Добавление щелочи к раствору крови взрослого человека приводит к очень быстрому исчезновению полос поглощения оксигемоглобина. Гемоглобин же плода под влиянием раствора щелочи изменяется медленно, и спектр оксигемоглобина сохраняется долго. При исследовании жидкой крови, вытяжек из недавно приготовленных пятен и сухой крови это различие между гемоглобином новорожденного и гемоглобином взрослого выявляется довольно четко. Однако при давности пятен крови примерно в одну неделю реакция уже не дает таких отчетливых результатов.

Метод К. Зингера, Чернова и Л. Зингера

Реактивы: 1) 112 N раствор NaOH или КОН; 2) 50% насыщенный раствор сернокислого аммония (на 800 мл сернокислого аммония добавляют 2 мл 10 N раствора НС1).

Примерно 10% раствор гемоглобина встряхивают в течение 5 минут с 1,2—1,8 объема дистиллированной воды и 0,4 объема толуола. После центрифугирования полученной смеси к 1,6 мл раствора щелочи добавляют 0,1 мл прозрачного раствора гемоглобина. Смесь встряхивают и точно через минуту добавляют 3,4 мл раствора сернокислого аммония, затем снова встряхивают и фильтруют через двойной слой фильтровальной бумаги. Гемоглобин взрослого человека под влиянием реактивоз осаждается и остается на фильтре, поэтому фильтрат бывает бесцветным. Гемоглобин плода более устойчив к воздействию щелочей, он целиком не осаждается и проходит в фильтрат, который имеет розово-красный цвет.

Маршан предлагает пользоваться этим методом и для работы с пятнами крови.

Данный метод был испытан нами для исследования как жидкой и сухой крови, так и пятен крови. При работе с жидкой кровью точно соблюдалась указанная методика; во всех случаях были получены отчетливые результаты.

При исследовании вытяжек из пятен и растворов сухой крови метод был несколько изменен. Вытяжки и растворы приготовляли на дистиллированной воде и после центрифугирования разводили до концентрации гемоглобина 0,7%. В реакцию вводили 1 мл этого раствора.

Результаты опытов с пятнами крови и сухой кровью, хранившимися в комнате в течение 4—5 месяцев, были отчетливыми и позволяли во всех случаях отличить кровь новорожденного от крови взрослого человека.

В литературе имеются указания, что при исследовании крови новорожденных положительный результат пробы Гоппе-Зейлера может быть получен в случае отсутствия в крови карбоксигемоглобина. Мы проверили эти наблюдения, а также возможность применения спектрального исследования, пробы с танином и пробы Вольфа на присутствие карбоксигемоглобина при работе с кровью новорожденных.

Щелочь (10%), применяемая при проведении пробы Гоппе-Зейлера, изменяет цвет гемоглобина крови новорожденных значительно медленнее, чем крови взрослых.

Спектральное исследование, а также проба с танином и проба Вольфа при проведении их с кровью новорожденных и с кровью взрослых не давали возможности выявить какие-либо существенные различия.

Следует отметить, что в литературе имеются указания и на другие, помимо приведенных выше, разновидности гемоглобина. Эти гемоглобины подвергаются всестороннему изучению, так как имеют определенное клиническое значение. Кроме того, есть указания о наследовании определенных свойств гемоглобина, что, возможно, будет иметь значение в случаях экспертизы при спорном отцовстве.

Выводы

1. По резистентности гемоглобина к щелочам можно определить, происходит ли кровь в пятне от младенца или взрослого человека. Для этой цели наиболее целесообразно использовать пробу К. Зингера, Чернова и Л. Зингера. При проведении этой пробы обязательны контрольные исследования образцов крови новорожденного в взрослого.
2. Проба со щелочью на тарелках (в указанных нами условиях) и спектральное исследование тоже дают отчетливые результаты при исследовании жидкой крови, а также пятен и корочек крови при сравнительно небольшой давности их образования. Пользуясь этими методами, необходимо производить контрольные опыты с кровью младенца и взрослого человека.
3. Проба со щелочами (Гоппе-Зейлера) на присутствие в крови новорожденных карбоксигемоглобина может давать нечеткие результаты; в связи с этим в некоторых случаях возможны ошибки.
4. Проба с танином и проба Вольфа на присутствие в крови карбоксигемоглобина практически дают одинаковые результаты как с кровью новорожденных, так и с кровью взрослых.