Новые возможности при работе с пятнами крови на вещественных доказательствах

Наиболее значительную часть работы экспертов–биологов составляют экспертизы, связанные с изучением крови (более 60 %). В связи с этим большое значение приобретают методики, направленные на определение наличия крови в следах различного характера. В нашем отделении основным методом установления наличия крови в следах является классический метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Отрицательный результат поисков по итогам 2008 года составляет более 20 %. Основные трудности возникают при установлении наличия крови и её вида в работе со старыми следами, загрязнёнными объектами, следами, подвергавшимися уничтожению, микрообъектами. Видовая специфичность белков до последнего времени устанавливалась реакцией кольцепреципитации, что давало достаточно большой процент отрицательных результатов.

В 2006 году экспертами отделения были впервые опробованы тесты немецкой фирмы Seratec «Hem Direct» на гемоглобин крови человека. Тесты были использованы при работе с микрообъектами на орудиях преступлений. Метод основан на подтверждении наличия гемоглобина (Нв) человека в исследуемой пробе путём иммунохимической реакции. Механизм работы теста основан на образовании комплекса антитело–антиген–антитело (Sandwich– комплекс) на мембранах тестовых полосок. Образуются структуры из меченных антител и антигенов, которые движутся по адсорбенту к иммобилизованным моноклональным антителам. В результате их взаимодействия образуется окрашенный комплекс в виде красной линии на определённом листе тест-полоски.

За последние 2 года тест широко применялся экспертами отделения. Так, в 2008г. тест использован в 211 исследованиях, в которых кольцепреципитация была не эффективна, причём положительный результат составил 59 %.

В 2009г. тест был применён в 360 случаях с положительным результатом в 67 % случаях. Собственные наблюдения позволили отметить ряд преимуществ метода, которые подтверждают данные печатных публикаций:

• а) возможность одномоментно устанавливать наличие и вид крови;
• б) простота в исполнении и наглядность в оценке результатов;
• в) высокая активность (тест способен определить гемоглобин (Hb в концентрации от 40 ng/ml до 500 µg/ml) и чёткая специфичность. Тест не реагирует на Hb собаки, кролика, кошки, коровы, свиньи, дикого кабана, лошади, курицы, овцы, мула, козы, оленя, т.е. наиболее часто встречающихся животных. Положительно реагирует тест на кровь приматов и хорьков;
• г) быстрота получения результатов, его можно использовать непосредственно на месте преступления;
• д) длительная сохранность полученных результатов и возможность прилагать их в качестве иллюстративного материала. Однако, для получения достоверных результатов при использовании теста необходимо строго следовать инструкции по применению, которая прилагается к упаковке. Экстрагировать пятна в зависимости от их характера (свежие или старые следы) и использовать для экстрагирования прилагающийся буферный раствор или буферные системы с нейтральным рН. Использовать разведение пробы до исчезновения вызываемой Hb окраски (это соответствует разведению свежей крови порядка 10–3/10–4).

Значение рН образца должно быть близко к нейтральному. При рН<5 может наблюдаться ложноположительный результат, при рН>9 чувствительность теста падает, а при рН > 12 тест не функционирует.

Необходимо соблюдать температурный режим и не использовать тесты по истечении срока годности и с повреждённой упаковкой.

Кроме того, учитывая, что образцы, содержащие человеческую кровь и все материалы, входящие в контакт с ними, могут быть источниками инфекции необходимо соблюдать меры безопасности (избегать контакта с кожей, использовать перчатки и лабораторную спецодежду, правильно хранить и утилизировать материал).

Использование тестовых полосок Seratec «Hem Direct» в реальных экспертизах позволило решить ряд сложных задач. Так, в окрестностях одного из сёл Хабаровского края была найдена металлическая бочка, из которой были извлечены фрагменты черепа, волосы, фрагменты практически истлевшей детской одежды. По одной из версий это могли быть останки бесследно пропавшей 10 лет назад 8–летней девочки.

Перед экспертом был поставлен вопрос о наличии крови человека и её групповой принадлежности на объектах.

Использование тестовых полосок позволило установить наличие крови человека на фрагментах одежды и в дальнейшем определить её групповую принадлежность.

Таким образом, опыт применения тестов в экспертной практике биологического отделения подтвердил его высокую эффективность. В силу строгой специфичности и высокой чувствительности значительно повышаются экспертные возможности при поисках крови, особенно при исследовании старых и замытых следов, а также при работе с микрообъектами биологического происхождения.