Снятие влияния предмета-носителя в реакции абсорбции-элюции при определении групповой принадлежности пятен крови

При определении групповой принадлежности в пятнах кров и на вещественных доказательствах нередко наблюдается связывание предметом-носителем стандартных сывороток. Это приводит к затруднению выявления антигенов системы АВ0 в результате неблагоприятного влияния на ход реакции различного рода загрязнений исследуемых предметов. Метод элюции абсорбированных антител во взвесь стандартных эритроцитов является более чувствительным вариантом учета, чем элюция в физиологический раствор. Однако наряду с более четким выявлением антигенов в исследуемых объектах, наблюдается и более выраженное влияние предметов-носителей на результаты реакции абсорбции-элюции.

В связи с этим, в случаях связывания стандартных сывороток контрольными участками предметов-носителей рекомендуется элюирование антител в физиологический раствор. Кроме того, для устранения влияния предмета-носителя в реакции абсорбции-элюции в методической литературе предлагается ряд дополнительных приемов:

1. сокращение срока абсорбции;
2. применение повторной реакции абсорбции-элюции, начиная с фазы абсорбции;
3. проведение повторного элюирования антител из одних и тех же объектов. К исследуемым объектам после первого учета результатов реакции вновь добавляют физиологический раствор или взвесь эритроцитов и повторяют реакцию, начиная с фазы элюции антител.
4. сокращение продолжительности первой элюциии использование различных по времени повторных элюции;
5. экстрагирование пятен и контрольных участков дистиллированной водой и приготовление из экстрактов пятен на марле;
6. проведение повторного отмывания исследуемых объектов после фазы элюции в физиологический раствор и применение повторной элюции во взвесь эритроцитов.

В таблице 1 представлены результаты исследований по снятию влияния контроля предмета-носителя, проведенных в биологическом отделении Хабаровского краевого бюро судебно-медицинской экспертизы. Исследования, проведенные на экспериментальном и экспертном материале, позволили нам выбрать некоторые наиболее приемлемые и результативные варианты из вышеперечисленных рекомендаций. Такие способы, как использование сывороток в большем объеме, с более высоким титром, а также сывороток другой серии не были оценены в связи с отсутствием в отделении достаточного количества реактивов.

Таблица 1.

Результаты, полученные при попытке снятия влияния контроля предмета-носителя в реакции абсорбции-элюции.

Применение повторной реакции абсорбции-элюции, начиная с фазы абсорбции, не всегда оправдано из-за увеличения сроков проведения реакции и самой экспертизы, особенно если экспертиза объемна. Кроме того, часто повторная абсорбция антител как с первоначальным, так и с более высоким титром, не снимает влияние предмета-носителя и приходится прибегать к другим способам его снятия.

Используя предварительное приготовление вытяжек из пятен кров и и контрольных участков предмета-носителя на дистиллированной воде, мы пришл и к выводу, что этот метод не снимает влияние предмета-носителя, а наоборот, усиливает его.

Проведение повторного элюирования антител из одних и тех же объектов применялось нам и неоднократно. В ряде случаев были достигнуты положительные результаты, но в остальных, составляющих большинство, и из пятен крови, и из контрольных участков вновь элюировали антитела, которые вызывал и агглютинацию соответствующих тест-эритроцитов.

Сокращение продолжительности первой элюции и использование повторных элюций требует от эксперта затраты большого количества времен и для того, чтобы подобрать нужный временной интервал для повторной элюции лишь для определенного вещественного доказательства. При условии сжатых сроков проведения экспертизы или ее объемности этот метод неприемлем.

Неплохо зарекомендовала себя методика проведения абсорбции в сокращенные срок и при различных температурных режимах. В таких случаях сокращенного времен и бывает достаточно для абсорбции антител антигенами пятна кров и и недостаточно для неспецифического связывания антител. Положительный результат достигается горазд о чаще, чем при использовании другим и методиками.

Довольно часто мы прибегаем и к увеличению числа отмываний материала пятна кров и и контрольного предмета-носителя после фазы абсорбции. При этом в значительном ряде случаев удаляется избыток несвязавшихся антител и снимается влияние контроля предмета-носителя.

Таким образом, в настоящее время в лаборатории биологического отделения для снятия влияния контроля предмета-носителя при определении групповой принадлежности кров и методом реакции абсорбции-элюции целесообразно использовать сокращение сроков абсорбции и применение повторных отмываний после фазы элюции в физиологический раствор.