К вопросу о выявлении антигенов системы AB0 в костных останках

В последние годы кости стали довольно частым объектом исследования в судебно-биологическом отделении, так как при скелетированных и расчлененных трупах могут отсутствовать другие материалы для изучения.

Исследования костных фрагментов в биологическом отделении бюро СМЭ г. Хабаровска проводятся в подавляющем большинстве случаев по направлениям экспертов-танатологов, медико-криминалистов, специалистов отделения идентификации неопознанных трупов.

Исследования костей на предмет определения групповой принадлежности по направлениям танатологического отделения за 1997-1999 г.г. распределились следующим образом:

Таблица 1.

Распределение исследования костных фрагментов по годам.

В 1996-1997 г.г. определение групповой принадлежности проводилось в 68 костных фрагментах из 129, что составило 52 % от числа доставленных на исследование. Остальные костные фрагменты не исследовались, так как в большинстве случаев в направлениях не ставилась задача определения групповой принадлежности (эти фрагменты собраны в архив), и кроме того, в этот период отделение испытывало трудности в обеспечении необходимым и реагентами.

В 1998-1999 гг. групповая принадлежность определялась в 106 костных фрагментах из 135, что составило 78,5 % исследований. Необходимость определения групповой принадлежности костных фрагментов возникла в связи с организацией отделения по идентификации неопознанных трупов и разработкой компьютерной программы "АСПИД" (автоматизированной системы предварительной идентификации). Это позволил о увеличить количество исследований по определению групповой принадлежности костных фрагментов на 26,5 % по сравнению с 1996-1997 г.г.

В 1999 г., по сравнению с 1996 г., на 20 % увеличилось количество костных фрагментов, доставленных на исследование в биологическое отделение. Такое положение объясняется большей изощренностью преступлений (при их совершении используются разные способы сокрытия и уничтожения трупов). Наличие и вид костной ткан и устанавливали в медико-криминалистическом отделении. За период с 1996 по 1999 гг. в биологическом отделении только в трех случаях определялась видовая принадлежность фрагментов, обнаруженных в земле при разработках огородных участков. В одном случае вид кости методом кольце преципитации с использованием трипсин а определить не удалось. Во втором случае в вытяжке из костного фрагмент а пробой Геллера был выявлен белок, но кольцо преципитации при контакте со всеми имеющимися в лаборатории видовым и сывороткам и не образовалось. Был сделан вывод о том, что костный фрагмент человеку не принадлежит. В третьем случае - выявлен бело к человека методом кольце преципитации через 5 минут наблюдения и установлена групповая принадлежность кости.

Основная работа по исследованию костей в биологическом отделении, связана с выявлением в материале группо-специфических антигенов системы АВО. Работа эта достаточно сложная. Костная ткань на 67 % состоит из неорганических веществ, в основном солей кальция, и только 33 % составляют органические вещества (жиры, белки: коллаген, эластин, ретикулин). То есть, небольшая концентрация антигенов в костях предполагает низкую их выявляемость. Часто кости поступают в загнившем или обгоревшем состоянии, что также снижает возможности по определению антигенов. И главный недостаток работы - отсутствие контролей костной ткани заведомо известных групп, что связано с исследованием трупов неопознанных лиц, невозможностью получить сведения о группе по какому-либо вспомогательному материалу.

Нами представлены наблюдения за выявлением антигенов системы АВ0 разным и рекомендуемым и методиками.

До 1997 г. лаборатория исследовала материал, приведенный в порошкообразное состояние, из которого готовили навески по 7 мг или бляшки на клею БФ-6. При такой методике было получено большое количество разноречивых результатов даже в контрольных фрагментах (известных в групповом отношении), либо антигены выявить не удавалось (см. таблицу 1).

С 1997 г. Республиканский центр судебно-медицинской экспертизы рекомендовал использовать вместо опилок объекты в виде мелких кусочков с фиксацией кипячением в дистиллированной воде.

Наиболее частые объекты исследования: фрагменты грудины, черепа, позвонков, фаланги пальцев. Присланные фрагменты тщательно отмывались проточной водой от наложений, помещались в дистиллированную воду (в зависимости от гнилостных изменений -до 2-х суток). В качестве фиксаторов антигенов использовали 10-минутное кипячение в дистиллированной воде, смесь Никифорова, этиловый спирт.

Для проведения реакции абсорбции-элюции использовали две серии изогемагглютинирующих сывороток альфа, бета в титре 1:128 - 1:256, гетероиммунные сыворотки и цоликлоны анти-А, анти-В и анти-Н в таком же титре. Время абсорбции 18-20 часов в условиях холодильника. От непрореагировавших антител объекты отмывались в 5-ти порциях охлажденного физиологического раствора, хорош о высушивались. Элюция антител осуществлялась в физиологический раствор в термостате при температуре 48-50

С 25-30 минут, либо в 2% раствор глицина 20 минут при той же температуре термостата. К элюатам добавляли 1% раствор со ответствующих тест-эритроцитов (иногда на альбумине). Элюаты с глицином после добавления эритроцитов оставляли на 30 минут в холодильнике. Затем производился учет результатов микроскопически.

В 73 опытах при исследовании одновременно нескольких кусочков компактного и губчатого вещества довольно отчетливо были выявлены антигены А, В и Н, что позволил о с большей долей уверенности высказаться о группе костных фрагментов. При использовании гетероиммунных сывороток и цоликлонов чаще были получены разноречивые результаты. При исследовании кусочков костей величиной от крошки до 0,3х 0,3 см отчетливее результаты получены при исследовании более крупных фрагментов (10 исследований).

Элюция во взвесь эритроцитов на альбумине и в глицин чаще дает неспецифическую агглютинацию ; наиболее часто в таком варианте наблюдался гемолиз эритроцитов. Положительные результаты получены при элюировании в физиологический раствор.

Только в 12 случаях из 60 при проведении количественной реакции абсорбции были получены 2-3 ступени поглощения изосывороток. Такой результат не дает достаточных оснований для вывода о наличии соответствующих антигенов.

Используя рекомендуемую методику для определения групповой принадлежности костных фрагментов по результатам исследований, проведенных в 1999 г., нами сделаны следующие выводы: для большей уверенности в результатах работы необходимо создать архив костных фрагментов с указанием срока давности изъятия с известным и группами по системе АВ0, для чего направлять из танатологического отделения вместе с образцами крови трупов неизвестных лиц фрагменты плоских или трубчатых костей. Для исследований использовать 3-4 участка компактного и губчатого вещества каждой кости размером не менее 0,2х0,3 см.

Если кости в хорошем состоянии, положительные результаты могут быть достигнуты при фиксации этиловым спиртом либо кипячением в дистиллированной воде.

Для абсорбции лучше использовать изогемагглютинирующие сыворотки альфа, бета в титре 1:128 - 1:256. Обязательно использовать две (по возможности три) серии изосывороток. Элюцию проводить в физиологический раствор с последующим контактом с 1% взвесью тест-эритроцитов на физиологическом растворе.

В дальнейшем нами будут продолжены исследования по выявлению антигенов в костях количественной реакцией абсорбции с использованием изосывороток с титром 1:32 в смежном титровании и увеличенным до 2-х суток сроком абсорбции.