Опыт установления фенотипов гаптоглобина в объектах биологического происхождения в экспертизе вещественных доказательств

Определение гаптоглобина (Hp) в жидкой крови и в пятнах является одним из основных методов исследования. Информация, получаемая при выявлении HP на вещественных доказательствах, позволяет дифференцировать кровь людей, проходящих по делу, и установить, кому из них могут принадлежать следы на различных предметах. Выявление может быть проведено как методом электрофореза, так и методом изоэлектрофокусирования.

Гаптоглобином (Нр) называют фракцию сыворотки крови, способную связывать гемоглобин (Hb) крови. Он находится в области 2-макроглобулина и перемещается вместе с ней. Нр был открыт в 1938 году M. Polonovski и Н. Jayle. Два основных генных комплекса характеризуют эту систему и обеспечивают 3 группы — Нр 1–1, Нр 2–2 и Нр 2–1, кроме редко встречающихся. У каждого человека имеется одна из трех основных групп (Туманов A.Y Сыворочные системы крови. — М.: Медицина, 1978 г.).

Комплекс Нр передается по наследству по кодоминантному признаку и составляет 1,2% общего числа всех протеинов. Гаптоглобин находится в сыворотке крови и отсутствует во внесосудистых жидкостях. Он не был обнаружен в выделениях человеческого организма, в плодной жидкости, молоке, желчи, меконии. желудочном содержимом, в то же время выявлен в жидкости сердечной сорочки, а также в жидкостях, возникающих при патологических состояниях (асцитическая, плевральный эксудат, раневой канал, содержимое кожных пузырей при ожогах и т.д.). В моче Нр устанавливается при большом содержании белка в ней.

Несмотря на то. что начиная с 1959 г. в генном локусе системы Нр были с достоверностью открыты новые аллели (Нр 2–1 М; Нр 2–1 (транс); Нр 2–1 (Haw); Нр Са (Карлсберг); HpJ -1 (Джонсон), для практического использования этой системы в судебно-медицинских экспертизах спорного происхождения детей достаточно основных стандартных фенотипов (Нр 1–1; Нр 2–1; Нр 2–2). Благоприятная в плане информативности частота встречаемости основных аллелей Нр 1 и Нр2 среди населения Земного шара делает эту систему особенно ценной при использовании ее в судебно-медицинских экспертизах спорного отцовства. Вероятность исключения мужчины, не являющегося биологическим отцом ребенка и фигурирующего в процессе в качестве ответчика, при использовании только одной системы Нр составляет для европеоидных популяций 18%, негроидных и монголоидных поггудяций соответственно 18,73 и 15,96% (Томилин В.В., Гуртовая С.В. Журнал

«Судебно-медицинская экспертиза» №4, 1999 г., стр. 6–12).

Учитывая достаточную информативность системы Нр, наряду с системами, которые исследуются в биологическом отделении (АВО, MN, P, Rh, Gm), нами в 2001 году была освоена и внедрена в практику методика определения Нр в жидкой крови и в пятнах крови. За основу была взята методика, предложенная Свирским М.С., с модификациями согласно Информационном}7 письму Российского центра СМЭ MP РФ 2000 г. и нашим опытным разработкам.

Основой метода является различная электрофоретическая подвижность комплекса Нр-Нв, что позволяет отделить их друг от друга. Для выделения Нр используют активность комплекса Нр и Нв, причем исследуемую сыворотку предварительно насыщают Нв (гемоглобином) донора.

К сожалению, недостаточное материально-техническое оснащение биологического отделения не позволило использовать широко методику определения Нр в пятнах крови на вещественных доказательствах. Методика была освоена только на заведомых образцах крови, высушенных на марле. Для установления фенотипов Нр в пятнах крови использовался двухслойный полиакриламидный гель (ПААГ) с pH 9,2, в котором нижний слой содержит гель 8%, а верхний — 4,5 % концентрации.

Установление типов Нр в жидкой крови было применено нами в 10 экспертизах спорного отцовства.

Установление фенотипов гаптоглобина (Нр) в жидкой крови проводилось методом вертикального электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) 7% с pH 9,2 с использованием трисглицинового буфера рН 8,3–8,35. Использовался аппарат АВГЭ-2, источник питания ПЭФ-ЗУХЛ42.

Исследуемую сыворотку в количестве 15 мкл смешивали с 5 мкл 60% раствора сахарозы и 5 мкл раствора гемоглобина. В количестве 20 мкл исследуемую смесь вносили в карманы гелевых пластин. Вхождение образцов в гель велось в течение 15 минут при напряжении 100 В, дальнейший форез осуществлялся при напряжении 250 В, силе тока 20 мА в течение 3 часов.

После окончания электрофореза фореграмму окрашивали раствором бензидина в 10% уксусной кислоте с добавлением 8–10 капель пергидроля. Типирование фенотипов гаптоглобина проводилось через 20–30 минут по наличию фракций, окрашенных в сине-голубой цвет. В качестве контроля использовалась сыворотка образцов крови Нр2–1,Нр2–2,Н р 1–1.

В заключение хотелось бы отметить, что создание специализированного электрофоретического кабинета со специально подготовленными кадрами будет способствовать повышению эффективности и качества судебно-медицинских экспертиз вещественных доказательств.