К возможности применения в судебномедицинской практике реакции преципитации в твердой среде

В иностранной литературе за последние годы опубликован ряд работ, в которых предлагаются новые методы установления вида белка. В частности, Мюллер (Muller) и др. рекомендуют использовать реакцию преципитации в твердой среде. Эта реакция получила распространение в микробиологии, иммунологии и в некоторых других отраслях медицины. Отдельные судебные медики за рубежом пользуются данной методикой. Некоторые авторы указывают на большую специфичность и чувствительность данной реакции по сравнению с реакцией преципитации в жидкой среде.

В качестве твердой среды для проведения реакции используются: смола акации, желатина, агар.

Мы изучали реакцию преципитации в агаре и выясняли возможность применения ее в судебномедицинской практике.

Методика проведения исследований ¹

Одну весовую часть агара растворяют в 30 частях дистиллированной воды, преципитируют в горячем состоянии 0,5% раствором кристаллического хлористого кальция (5 г хлористого кальция на 1 л агара) и тут же фильтруют через толстый слой рыхлой ваты. Оставляют до затвердения, нарезают на куски и промывают в проточной воде в течение 72 часов, снова расплавляют, добавляют на 1 л агара 1,6% поваренной соли и разливают для стерилизации.

Для проведения реакции агар выливают слоем в 1—1,5 м на отекло. После застывания в агаре трубочкой проделывают отверстия. Диаметр отверстий, расстояния между ними, их количество определяются условиями опыта. По нашим наблюдениям, наиболее удобный диаметр от 0,5 до 0,2 см при расстоянии между отверстиями 0,5—0,3 см. При меньших количествах сыворотки и айтигена отверстия могут быть меньше. Одно отверстие обычно располагают в середине, остальные — вокруг него. В отверстия в зависимости от их размера помещают по 1—2 капли сыворотки или антигена. Для получения четких результатов необходимо одинаковое количество сыворотки и антигена.

Чтобы сделать отверстия на одинаковых расстояниях, делают соответствующую разметку на бумаге, подкладывают ее под стекло и по разметке проделывают в агаре отверстия. В зависимости от особенностей исследования в центральное отверстие можно помещать сыворотку, а в периферические — антиген или наоборот. После этого стекло помещают во влажную камеру при +37°. Антиген и сыворотки, диффундируя по агару, взаимодействуют, и при встрече одноименного антигена и сыворотки образуется преципитат, видимый на глаз. Учет результатов производится через 2 ч аса, а при нечетких результатах — через 24 часа.

Применялись сыворотки, изготовляемые Научно-исследовательским институтом судебной медицины Министерства здравоохранения СССР.

Результаты опытов.

Реакция оказалась менее чувствительной, чем в жидкой среде. Так, в жидкой среде давали устойчивый положительный результат сыворотки с титром 1:10 000, а в твердой среде—с титром 1:5000.

Подтвердилась специфичность реакции в твердой среде, т.е. ни разу не появился преципитат при взаимодействии сыворотки с несоответствующим антигеном. Мутность антигена не влияла на результат реакции.

В ряде опытов, особенно при небольших разведениях антигена, наблюдалось несколько линий преципитата (2—3). Это явление обычно объясняют неоднородностью структуры антигенов и некоторыми особенностями преципитирующих сывороток (особенности их получения).

Помещая в расположенные рядом отверстия сыворотки на белок человека, свиньи и рогатого скота, мы получали между ними полосу преципитации. Таким образом, следует иметь в виду, что при взаимодействии между отдельными преципитирующими сыворотками могут возникать преципитаты, однако эти полосы преципитации располагаются между углублениями, где находятся сыворотки и не мешают наблюдению за образованием преципитата при взаимодействии сывороток с антигеном. На это явление следует обратить особое внимание с тем, чтобы не допустить ошибки.

В указанных выше условиях реакция преципитации была нами произведена наряду с реакцией в жидкой среде на материале конкретных экспертиз. Во всех случаях были получены четкие и убедительные результаты. В этих опытах в среднее углубление вносилась сыворотка, а в углубления, расположенные вокруг, — вытяжки из пятен (приготовленные на физиологическом растворе хлористого натрия и разведенные до содержания в них белка 1 : 1000) и из контрольных участков, а также соответствующий антиген и физиологический раствор.

Проведенные исследования выявили особенности реакции преципитации в твердой среде и позволили установить ее преимущества и недостатки. Основным недостатком является несколько меньшая чувствительность реакции.

Положительные стороны реакции следующие.

1. Можно проводить реакцию с мутными вытяжками.
2. При малом количестве вытяжки (одна капля), если в ней содержится достаточно белка, реакцию можно одновременно произвести со многими сыворотками (в центральное углубление помещается вытяжка, а в окружающие — преципитирующие сыворотки на белки различных животных, т.е. одна капля вытяжки испытывается сразу несколькими сыворотками).
3. Для исследования нескольких объектов и их контролей достаточно 1—2 капель сывороток.
4. Пластинки с агаром после промывания в проточной воде можно высушить и сохранять длительное время как вещественное доказательство.
5. Реакция открывает возможности более глубокого изучения особенностей и состава антигенов и сывороток, что может иметь значение для производства последних.

Проделанные опыты дают основание считать целесообразным применение реакции преципитации в твердой среде, когда имеется мини мальное количество вытяжки, содержащей достаточное количество белка, или сыворотки, либо когда реакция в жидкой среде не может быть поставлена ввиду мутности вытяжек.

¹ Реакция проводилась по методике, разработанной А. Гусевым и В.С. Цветковым.