К вопросу о «выделительстве» агглютиногенов изосерологической системы AB0

Несколько лет тому назад М. А. Бронникова, а также П. Н. Косяков и 3. И. Ровнова экспериментальным путем доказали, что в слюне некоторых, так называемых невыделителей агглютиногенов изосерологи- ческой системы АВО могут быть выявлены слабо выраженные групповые факторы А и В. Кроме того, М. А. Бронникова установила, что обнаружение указанных агглютиногенов в таких случаях возможно лишь изосыворотками β и α, но не гетероиммунными гемагглютинирую- щими сыворотками анти-В и анти-А, и предложила именовать людей, выделениям которых присущи такие свойства, «слабыми выделителями» групповых веществ. Позднее М. М. Петрачков подтвердил эти данные.

Поскольку из работ М. М. Петрачкова и ряда зарубежных авторов известно, что к так называемым невыделителям относится 16—29% на селения, важность детального изучения серологической характеристики выделений таких лиц для судебномедицинской практики является очевидной.

Особый интерес представляет вопрос о сопряженности «выделитель- ства» агглютиногенов системы АВО, тем более что в литературных источниках по этому поводу имеются разноречивые данные. Так, Формаджио (Formaggio) и Юнгвирт (Jngwirth) утверждают, что в слюне «невыделителей» всех групп агглютиноген О(Н) не выявляется. Макнейл (McNeil), Трентельман (Trentelman) и др., наоборот, указывают, что отдельные образцы слюны групп А и В связывают агглютинин аити-О(Н) при отсутствии реакции с сыворотками анти-В или анти-А. В отношении слюны группы АВ известно (Формаджио, Л. О. Барсегянц), что при исследовании слюны «выделителей» этой группы может иметь место неравномерность «выделительства» агглютиногенов А и В.

Исходя из сказанного, мы попытались проследить сопряженность «выделительства» агглютиногенов изосерологической системы АВ0, уделив наибольшее внимание «слабым выделителям» агглютиногенов.

Материалом для исследования служила слюна 223 человек, у которых одновременно была взята и кровь.

Групповую принадлежность определяли путем исследования крови в жидком состоянии, двойным методом (по агглютиногенам и агглютининам), в пробирках с применением центрифугирования и последующей проверкой результатов под микроскопом. Тридцать четыре человека относились к группе 0(1), 58 — к группе А(11), 65 —к группе В(Ш) и 66 — к группе AB(IV).

Жидкую слюну центрифугировали, выливали на стерильную проверенную марлю, не оказывавшую воздействия на титр сывороток р, а и анти-О(Н) при реакции абсорбции агглютининов, и высушивали при комнатной температуре. Исследовали пятна слюны давностью 1—4 дня. Всего было произведено 609 реакций абсорбции.

Для выявления агглютиногенов А, В и 0(H) применяли сыворотки α, β и анти-О(Н); каждая из перечисленных сывороток в процессе всех опытов принадлежала к одной и той же серии¹. Поскольку сыворотка анти-О(Н), имевшаяся в нашем распоряжении, была изготовлена путем иммунизации коз спиртовой дизентерийной вакциной Григорьева—Шига, нужно считать, что она содержала не агглютинин анти-О, а агглютинин лнти-Н; эта сыворотка являлась специфичной в течение 5 минут и более.

Исследование слюны 223 человек для выяснения степени «выделительства» агглютиногенов.

Степень «выделительства» агглютиногенов определяли реакцией абсорбции агглютининов в количественной модификации. Из измельченных пятен слюны групп А, В и АВ изготовляли по две навески в 25 мг, а из пятен слюны группы 0 — по три навески: две — по 25 мг и одну — в 50 мг. К навескам в 25 мг добавляли сыворотки β и α (по отдельности) в объеме 0,15 мл; к навеске в 50 мг — 0,3 мл сыворотки анти-0(Н). Титр сывороток β и α был равен 1:32, титр сыворотки анти-0(Н) — 1:16. Каждый опыт сопровождался таким же исследованием контрольных участков марли без слюны. Абсорбция длилась от 18 до 20 часов при температуре +4°. Абсорбированные сыворотки отсасывали от материала и центрифугировали. Затем исходные и абсорбированные сыворотки α и β титровали в кратных разведениях на фарфоровой тарелке соответствующими отмытыми стандартными эритроцитами групп А и В, а сыворотки анти-О(Н) в смежных разведениях (в 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, 16 раз) —эритроцитами группы О. Наблюдение агглютинации вели в течение 5 минут с лупой при ярком электрическом свете.

К «выделителям» групп А и В относили тех людей, слюна которых снижала титр соответствующих сывороток на 5 ступеней поглощения и более (под ступенью поглощения подразумевается одно разведение абсорбированной сыворотки, в котором отсутствует агглютинация, при наличии ее в том же разведении исходной сыворотки). Ослабление титра сывороток β и α на 3—4 ступени поглощения принимали за «выде- лительство умеренной силы», а снижение титра на 1—2 ступени за «слабое выделительство» групповых веществ.

Таблица 1

Степень «выделительства» агглютиногенов

Ввиду того что сыворотку анти-О(Н) титровали в смежных разведениях, «выделители» и «выделители умеренной силы» не разделялись.

Что касается группы АВ, то за «выделителей» считали тех лиц г слюна которых снижала титр хотя бы одной сыворотки (β или а) на 5 ступеней и более.

Слюна большинства люден, подвергавшаяся: исследованию, содержала хорошо выраженные агглютиногены; у значительно меньшего чиста лиц агглютиногены были выражены чрезвычайно слабо или совсем не выявлялись; в довольно редких случаях наблюдалась степень «выделительства», как бы промежуточная между двумя вышеуказанными категориями (табл. 1).

Слюна «выделителей» агглютиногенов

Слюна «выделителей» и «выделителей умеренной силы» груп- пы 0(1) снижала титр сыворотки анти-О(Н) на 5—11 ступеней поглощения и лишь 2 раза имело место полное связывание агглютинина анти-О(Н). Наибольшее число образцов слюны (19 из 27) проявили абсорбционную способность, которая при развернутом титровании выразилась в 7—9 ступенях поглощения.

Агглютиноген А слюны «выделителей» группы А (II) во всех 42 случаях полностью абсорбировал агглютинин α из сыворотки с титром 1:32 (6 ступеней поглощения) при кратных разведениях сыворотки.

Полное связывание агглютинина β (6 ступеней поглощения) агглю- тиногеном В слюны группы В (III) произошло в 44 случаях из 48; 4 образца слюны снизили титр сыворотки β на 5 ступеней поглощения.

В слюне группы АВ (IV) наблюдалась либо одинаковая степень связывания агглютиногенами А и В соответствующих агглютининов (30 образцов), либо различная абсорбционная способность этих агглютиногенов: более сильное связывание (на 1—3 ступени поглощения); агглютинина β в 9 образцах слюны и агглютинина а (на 1—2 ступени) в 14 образцах.

Слюна «выделителей умеренной силы»

Степень «выделительства», которая не могла считаться ни сильной, ни слабой, была обозначена как умеренная.

В нашем материале число лиц, отнесенных к этой категории, оказалось весьма малым: 3 человека группы А, 6 — группы В и 3 — группы АВ.

Слюна «слабых выделителей» и так называемых невыделителей

Образцы слюны групп А, В и АВ, которые при титровании сывороток в кратных разведениях в процессе учета результатов реакции абсорбции агглютининов либо не снижали титр соответствующих сывороток, либо ослабляли его на 1—2 ступени поглощения, а также образцы слюны группы О, в которых агглютиноген О(Н) ранее не был обнаружен, повторно исследовали при помощи реакции абсорбции с применением сывороток (β, а и анти-О(Н) в низком титре (1:14, 1 : 1 6 или 1:20) и использованием развернутого, титрования исходных и абсорбированных сывороток. В тех же условиях делали контрольные опыты с чистой марлей. К навескам в 50 мг материала добавляли сыворотки в объеме 0,3 мл. Абсорбцию осуществляли при температуре +4° в течение 18—20 часов. Реакцию агглютинации при титровании исходных и абсорбированных сывороток проводили на плоскости соответствующими отмытыми стандартными эритроцитами групп О, А и В.

В 7 образцах слюны группы 0 агглютиноген О(Н) выявлен не был (5 образцов слюны не снизили титра сыворотки анти-О(Н), а 2 образца ослабили его на одну ступень поглощения). Незначительное (одна ступень.) неспецифическое связывание агглютинина а отмечено один раз.

В образцах слюны г р у п п ы А, в которых агглютиноген А не был обнаружен при учете результатов .реакции абсорбции агглютининов титрованием сывороток в кратных разведениях, во всех 13 случаях была определена групповая принадлежность слюны при развернутом титровании абсорбированных и исходных сывороток. Следовательно, лица, у которых взяты указанные образцы слюны, относились к категории «слабых выделителей» (табл. 2).

Таблица 2

Слюна группы А(Н)

Примечание. Цифры обозначают степень абсорбции в ступенях поглощения.

Слюна 11 человек группы В при реакции абсорбции с титрованием сывороток в кратных разведениях не снизила титр сывороток (3 и а или ослабила титр сыворотки р на 1—2 ступени поглощения. Применение развернутого титрования сывороток привело к выявлению агглютиногена В в 5 из 11 случаев. Эти 5 человек могут считаться «слабыми выделителями» агглютиногена В. Иногда наблюдалось снижение титра сыворотки анти-О(Н) и а несколько большее, чем ослабление тигра сыворотки р (табл. 3).

Таблица 3

Слюна группы В (III)

Обозначения те же, что и в табл. 2

При реакции абсорбции со слюной группы АВ в случае применения титрования сывороток в кратных разведениях наличие агглютиногенов А и В в 10 образцах доказать не удалось, так как снижение титра сывороток α и β либо отсутствовало, либо выражалось в 1—2 ступенях поглощения. Нужно отметить, что титр сыворотки α был ослаблен чаще, чем титр сыворотки β. Использование развернутого титрования дало возможность выявить агглютиногены А и В в одном случае из 10. В 6 образцах слюны группы АВ обнаружен только агглютиноген А, в одном образце — агглютиногены А и О(Н), а в 2 образцах присутствие агглютиногенов А и В осталось недоказанным.

Таким образом, один человек группы АВ мог быть отнесен к категории «слабых выделителей» групповых веществ, а при исследовании слюны у 7 человек этой группы получены результаты, которые могут вести к ошибочным выводам.— диагностированию группы А(II) вместо группы АВ (IV). Необходимо отметить, что связывание слюной группы АВ агглютинина анти-О(Н) иногда было несколько большим, чем абсорбция агглютинина β (табл. 4).

С целью выяснения вопроса о том, влияет ли специфическая активность сывороток β, α и анти-О(Н) на обнаружение соответствующих агглютиногенов при учете результатов реакции абсорбции агглютининов путем развернутого титрования исходных и абсорбированных сывороток, были проведены дополнительные опыты с одной сывороткой анти-О(Н) и с двумя парами сывороток β и а иных серий, чем при основных исследованиях.

Результаты опытов с сыворотками разных серий свидетельствуют о том, что специфическая активность сывороток в известной мере отражается на степени снижения их титра слюной в пятнах; иногда имеют место даже принципиальные различия: тот или иной агглютиноген обнаруживается одной сывороткой и не выявляется достаточно достоверно другой.

В заключение были осуществлены параллельные исследования абсорбционной способности слюны в жидком состоянии и в виде пятен на марле, взятой у одних и тех же лиц. Опыты с пятнами проводились сразу же после высыхания слюны. Для исследования жидкой слюны делали смежные разведения сывороток β, а и анти-О(Н) до предельного титра (1 : 16). К одной капле сыворотки в каждом разведении добавляли одну каплю отцентрифугированной слюны, к другой — одну каплю- физиологического раствора (контроль). Абсорбция длилась 1 час при комнатной температуре. С целью титрования абсорбированных сывороток жидкость из каждой пробирки переносили на тарелку и добавляли к ней соответствующие отмытые стандартные эритроциты. Наблюдение вели в течение 5 минут с лупой, при ярком электрическом свете. Исходные сыворотки титровали таким же способом. Пятна слюны исследовали методом абсорбции в количественной модификации с применением техники, изложенной выше.

Таблица 4

Слюна группы АВ

Обозначения те же, что в табл. 2. Знак (*) указывает, что в опытах наблюдалось снижение титра сыворотки а на одну ступень поглощения контрольным участком марли.

Показатели абсорбции при исследовании жидкой слюны обычно были незначительно выше, чем при опытах с пятнами слюны., но это различие не имело принципиального значения.

Выводы

1. По степени «выделительства» агглютиногенов изосерологической системы АВО, определяемого путем исследования слюны, различались четыре типа: а) «выделители» (большинство людей); б) «слабые выделители» (значительно меньшее число лиц); в) «выделители умеренной силы» (как бы промежуточный тип между двумя первыми); г) люди, в слюне которых наличие агглютиногенов остается недоказуемым; к этому типу в нашем материале относились лишь отдельные лица групп О, В и АВ.
   
   Два последних типа весьма малочисленны.
2. У «слабых выделителей» степень «выделительства» агглютиногенов А, В и О(Н), устанавливаемая по слюне, являлась неодинаковой: наиболее сильно «выделялся» агглютиноген А, в меньшей степени — агглютиноген В и почти совсем не «выделялся» агглютиноген 0(H) в слюне группы О.
3. В связи с различной степенью «выделительства» агглютиногенов А и В в слюне «слабых выделителей» группы АВ может обнаруживаться лишь один агглютиноген А, что создает ошибочное представление о группе (группа А вместо группы АВ).
4. Степень связывания агглютинина анти-О(Н) слюной «слабых выделителей» и слюной лиц, у которых наличие агглютиногенов А и В оказалось недоказуемым, обычно была меньшей, чем абсорбция агглютининов р и а и лишь в отдельных случаях являлась несколько большей.
   
   Таким образом, отмечается некоторая сопряженность «выделительства» агглютиногенов изосерологической системы АВО, что при дальнейшей разработке вопроса может оказаться важным для диагностики группы 0(1) в выделениях.
5. Агглютиногены в пятнах слюны «выделителей» и «выделителей умеренной силы» выявляются методом абсорбции агглютининов с титрованием сывороток в кратных разведениях, а в пятнах слюны «слабых выделителей» — тем же методом, но с применением развернутого титрования исходных и абсорбированных сывороток.
6. Степень специфической активности стандартных сывороток р, а и анти-О(Н) отражается на результатах выявления соответствующих агглютиногенов в слюне, что отмечено в нашем материале при исследовании слюны «слабых выделителей» и людей, у которых присутствие агглютиногенов изосерологической системы АВО являлось недоказуемым.
7. Показатели абсорбции агглютининов β, α и анти-О(Н) слюной «слабых выделителей» при исследовании жидкой слюны бывают обычно незначительно выше, чем при обнаружении соответствующих агглютиногенов в пятнах той же слюны.
8. Выводы о групповой принадлежности слюны «слабых выделителей» в следах на вещественных доказательствах при развернутом титровании сывороток можно делать лишь в отдельных случаях при условии, что в объекте исследования отчетливо выявляются агглютиногены А и В.
9. Вопрос об особенностях обнаружения групповых факторов в других выделениях «слабых выделителей» методом абсорбции с развернутым титрованием сывороток требует специальной разработки.

¹ Следует иметь в виду, что основные результаты исследований «выделительства» агглютиногенов, изложенные в данной работе, относятся именно к одной серии каждой сыворотки, причем как сыворотка а, так и сыворотка β представляла собой смесь сывороток различных людей (обычные стандартные сыворотки, заготовляемые в системе службы крови).