Об установлении сывороточного свойства gm (а) в пятнах крови и некоторых органах и жидкостях человеческого тела

В 1956 г. почти одновременно в Польше, Швеции и США было открыто свойство, присущее белковой фракции сыворотки крови — гамма-глобулину—и названное «тормозным». Для его установления необходима агглютинирующая система, которая состоит из стандартной сыворотки, содержащей антитела, именуемые анти-Gm (а), и взвеси эритроцитов крови человека ORho-положительной группы, насыщенных неполными антителами (агглютиноидами) анти-D. Такие эритроциты названы «сенсибилизированными».

«Сенсибилизированные» эритроциты агглютинируются стандартной сывороткой анти-Gm (а). Такая сыворотка вначале была обнаружена у лиц, страдающих ревматическим артритом, в связи с чем исследователи связывали возникновение этих антител с указанным заболеванием.

Если в описанную агглютинирующую систему добавить обычную сыворотку крови некоторых людей, то агглютинация «сенсибилизированных» эритроцитов не происходит. Введенная сыворотка как бы тормозит, предотвращает реакцию агглютинации. Добавляемая обычная сыворотка других людей не влияет на ход реакции.

Неопровержимые доказательства связи «тормозного» свойства с гамма-глобулином были получены в опытах, проведенных непосредственно с чистым гаммаглобулином, выделенным с помощью электрофореза. Оказалось, что такой чистый гамма-глобулин, полученный из сыворотки крови, обладающей «тормозным» свойством, также способен предотвращать агглютинацию «сенсибилизированных» эритроцитов. Вследствие непосредственной связи этого сывороточного свойства с гамма-глобулином, оно было названо Gm.

В зависимости от наличия или отсутствия «тормозного» свойства сыворотка крови людей подразделяется на 2 разновидности: Gm (а+) и Gm (а—). У различных народов стран Европы свойство Gm (а) выявлено от 30 до 65%. У негров, индейцев, жителей Малайского архипелага и Индокитайского полуострова Gm (а) определяется в 98—100%.

Мы исследовали 1000 образцов сывороток крови, взятых в основном от лиц в возрасте 20—30 лет, в подавляющем большинстве русской национальности. Сыворотка крови 417 человек относилась к разновидности Gm (а + ), сыворотка крови 583 человек — к разновидности Gm (а—), что составляет соответственно 41,7 и 58,3%.

В литературе нет упоминаний о какой-либо зависимости между разновидностями Gm (а) и известными изосерологическими системами, не обнаружено также различий в распределении Gm (а + ) и Gm (а—) по половому признаку. Кроме свойства Gm (а), в сыворотке крови выявлены другие сывороточные «тормозные» свойства, которые названы Gm (b), Gm (х), Gm-like. Для всех этих «тормозных» субстанций имеются соответствующие стандартные сыворотки. Учитывая сложные соотношения в системе сывороточных «тормозных» свойств, некоторые авторы проводят аналогию с подгруппами Rh.

Собственная разновидность Gm развивается у детей в первый год после рождения. Грудные дети обладают разновидностью Gm матери, что свидетельствует о проникновении Gm через плацентарный барьер. В литературе сообщается о наследственных свойствах разновидностей Gm. За рубежом эти свойства постепенно находят практическое применение в делах о спорном отцовстве, материнстве и замене детей. Дети, родители которых имеют разновидность Gm (а—), всегда наследуют такую же разновидность. У родителей с Gm (а + ) дети чаще всего также имеют Gm (а+) и редко Gm (а—). Если кровь одного из родителей Gm (а + ), а другого Gm (а—), у детей кровь может быть и Gm (а+) и Gm (а—).

Работами Фюнфхаузена (Ftinfhausen) и Заган (Sagan) установлена возможность определения Gm (а) и Gm (х) в пятнах крови давностью до 2—5 недель.

Целью настоящего исследования была проверка имеющихся в литературе данных о возможности определения разновидностей Gm (а) в пятнах крови, а также установление Gm (а) в тканях и жидкостях человеческого тела.

Работу проводили в Берлинском институте судебной медицины, возглавляемом проф. Прокопом (Prokop). Предоставленную нам проф. Прокопом и доктором Фюнфхаузеном стандартную сыворотку анти-Gm (а) серии Slabina с первоначальным титром 1 : 512 брали в разведении 1:5.

Методика исследования пятен крови

Двадцать миллиграммов материала с пятнами крови экстрагировали 0,2 мл стерильного физиологического, раствора в холодильнике при 4—5° в течение 24 часов. Полученные вытяжки имели коричневый цвет. Приготовляли взвесь «сенсибилизированных» эритроцитов ORho-поло- жительной группы. Эритроциты крови указанной группы, взятые после осаждения фибрина, 4 раза отмывали физиологическим раствором с помощью центрифуги для полного удаления сыворотки взятой крови, что предотвращает влияние этой сыворотки на результаты исследования. Затем вводили 0,15 мл осадка эритроцитов в 1 мл физиологического раствора, в который предварительно добавляли 0,2—0,3 мл сыворотки анти-резус.

Применяемая стандартная сыворотка анти-резус должна содержать неполные антитела анти-D, возможно сочетание анти-D с агглютинои- дами анти-С и анти-Е. Титр сыворотки анти-резус, вводимой для «сенсибилизации» эритроцитов, значения не имеет. Насыщение эритроцитов агглютиноидами происходило в термостате при 37° в течение 1½ часов.

Затем эритроциты вновь при помощи центрифуги 3 раза отмывали физиологическим раствором. К осадку отмытых эритроцитов, насыщенных неполными антителами анти-D, добавляли 2,5 мл стерильного физиологического раствора. Следует заметить, что при исследованиях сывороточного свойства Gm (а) необходимо применять свежеприготовленную взвесь «сенсибилизированных» эритроцитов.

Разновидности Gm (а) в пятнах крови устанавливали на плексигласовых пластинках в виде предметных стекол, разделенных на 16 «дорожек». Каждая «дорожка» шириной 3 мм была отделена от соседних гребнями высотой 1,2 мм. Рядом лежащие «дорожки» одновременно не использовали, чтобы предотвратить возможность смешения реагентов с двух соседних «дорожек».

На один конец «дорожки» капиллярной трубочкой помещали, микрокаплю испытуемой неразведенной вытяжки, на другой конец — микрокаплю стандартной сыворотки анти-Gm (а). Затем смешивали стеклянной палочкой, через несколько минут из капельницы закапывали взвесь «сенсибилизированных» эритроцитов и снова все смешивали.

Пластинки помещали в чашки Петри, на дно которых закладывали фильтровальную бумагу, смоченную водой, и ставили на 1—1½ часа в холодильник при 4—5°. При учете реакции пластинку с «дорожками» вместе с чашкой Петри приподнимали одним краем почти вертикально, а затем опускали горизонтально, при этом на «дорожках» отчетливо выявлялась реакция. Агглютинация эритроцитов, обычно хорошо определяемая невооруженным глазом в виде глыбок и пленок склеившихся эритроцитов, указывает на отсутствие в вытяжке «тормозной» субстанции Gm (а) и, следовательно, на принадлежность сыворотки крови в пятне к разновидности Gm (а—). Отсутствие агглютинации эритроцитов свидетельствует о наличии в испытуемой вытяжке «тормозной» субстанции Gm (а) и принадлежности сыворотки крови в пятне к разновидности Gm (а + ) (см. рисунок).

Следует заметить, что при определении разновидности обычной жидкой сыворотки используют ту же методику, только вместо вытяжек берут сыворотку, отделенную от форменных элементов. Учитывая, что в некоторых случаях неразведенная сыворотка человека с Gm (а—) показывает положительную реакцию, хотя и незначительном силы, исследуемую сыворотку с целью избежания неспецифической реакции разводят в в 3—5 раз физиологическим раствором.

Определение в вытяжках из пятен крови
«тормозного» сывороточного свойства
Gm (а) при плексигласовой пластинке с
«дорожками»
Слева — агглютинация
«сенсибилизированных» эритроцитов,
сыворотка крови в пятне принадлежит
к разновидности Gm (а—);
справа — агглютинации нет,
сыворотка относится
к разновидности Gm (а + ).
Увеличение Х6.

Первоначально исследовали пятна из крови трупа, нанесенной на сложенную в несколько слоев марлю и высушенной при комнатной температуре. Кровь брали от 6 трупов, вскрытых на 2—3-й день после смерти. Сыворотку крови от каждого трупа определяли на принадлежность к разновидности Gm (а); кровь от 4 трупов относилась к Gm (а + ), от 2 — к Gm (а — ). Марлю с пятнами хранили при комнатной температуре в шкафу 10 дней и ежедневно подвергали исследованиям по установлению субстанции Gm (а). Во всех вытяжках легко определялась разновидность Gm (а); давность пятен на силе реакции не отражалась.

Затем были проверены пятна крови 5 доноров, имевшие давность 7 месяцев и хранившиеся в сухой комнате при нормальной температуре в шкафу. Т|ри донора имели Gm (а + ), 2 — Gm (а—). Из каждого образца крови приготовляли пятна на газетной и оберточной бумаге, брючном сукне, картоне. Во всех этих пятнах удалось без труда установить принадлежность сыворотки крови к разновидности Gm (а).

Для установления концентрации субстанции Gm (а) в вытяжках из пятен крови, в том числе хранившихся 7 месяцев, провели кратное разведение вытяжек физиологическим раствором. Разновидность Gm (а) отчетливо определялась при разведении вытяжек до 1:4—1:8, а в некоторых случаях — и 1 : 16. В вытяжках из старых пятен крови, нанесенных на картон, разновидность Gm (а) удавалось установить лишь при разведении вытяжек 1 : 2, что объясняется плохим пропитыванием предмета-носителя кровью.

Как и следовало ожидать, при использовании навески материала пятна 20 мг, но при увеличении или уменьшении количества физиологического раствора, применяемого для экстрагирования, в первом случае концентрация Gm (а) в вытяжке уменьшалась, во втором — возрастала.

В ходе работы был сделан вывод, что наилучшим соотношением исследуемого материала пятна и физиологического раствора, применяемых при экстрагировании, являются 20 мг материала и 0,2 мл физиологического раствора, так как при этом материал пятна хорошо смачивается физиологическим раствором, количества вытяжки вполне достаточно для определения разновидности Gm (а). Вытяжки из пятен крови средней интенсивности получаются достаточно насыщенными. Однако эти соотношения в зависимости от степени пропитывания материала предмета-носителя кровью и размеров пятна могут быть изменены. При всех экспериментах ставили контроль предметов-носителей.

Установление субстанции Gm(а) в органах и жидкостях человеческого тела. Исследовали кусочки органов от 16 трупов людей; крозь 6 трупов относилась к Gm (а+) и 10 — к Gm(а—). Причиной смерти были скоропостижно протекавшие заболевания, механическая травма, асфиксия. Исследовали головной мозг, печень, селезенку, почки, легкие, мышцы,-Мелкие кусочки органов 24 часа промывали в проточной воде, измельчали и растирали в ступке, в которую добавляли равный объем стерильного физиологического раствора и экстрагировали в холодильнике при 4—5° 24 часа, после чего массу, имеющую консистенцию кашицы, центрифугировали, а вытяжку испытывали на пластинках с «дорожками» на наличие в ней «тормозного» свойства. Вытяжки брали неразведенные и в кратных разведениях от 1:2 до 1 : 32.

Субстанция Gm (а) хорошо определялась в легких, почках, селезенке, печени людей с разновидностью крови Gm (а + ). В легких ее устанавливали при разведении вытяжек до 1:8, в остальных перечисленных органах — при разведении до 1 :4 и в мышцах — лишь в нераз- веденных вытяжках. В ткани головного мозга «тормозное» свойство не выявлено.

В вытяжках из органов трупов с разновидностью крови Gm (а—) субстанция Gm (а) не была обнаружена. Лишь в некоторых случаях неразведенные вытяжки из селезенки, мышц и печени обладали нерезко выраженным «тормозным» свойством, которое мы расцениваем как неспецифическую реакцию, подобно наблюдающейся при исследовании неразведенной сывороткой крови от человека с Gm (а—), когда реакция в некоторых случаях также является положительной.

Полученные данные служат основанием для предварительного вывода о том, что белковые компоненты, имеющиеся в клетках органов и тканей, также могут быть подразделены на разновидности Gm. Отнести «тормозные» свойства вытяжек из этих органов за счет крови, оставшейся в капиллярах ткани, было бы неправильно, так как в этом случае в вытяжке из головного мозга, обладающего густой сетью кровеносных сосудов, должно было бы выявляться «тормозное» свойство. Кроме того, в последних порциях воды, примененной для промывания кусочков, при микроскопическом исследовании осадка, полученного после центрифугирования, эритроцитов не обнаружено.

Одновременно проведены единичные опыты с некоторыми жидкостями человеческого тела. Эти эксперименты не дают оснований для каких-либо обобщений, их можно рассматривать лишь как ориентировочные. При исследовании мочи, которую разводили физиологическим раствором (1:4, 1:6, 1:10) и дистиллированной водой (1:4, 1:6, 1:10, 1:20), «тормозные» свойства обнаружить не удалось. Моча взята от 8 трупов: 2 с Gm (а + ) и 6 с Gm (а—).

От одного трупа, сыворотку крови которого определяли как Gm (а + У, исследовали спинномозговую жидкость; субстанция Gm (а) установлена лишь в неразведенном ликворе. В спинномозговой жидкости 4 трупов с разновидностью крови Gm (а—) «тормозное» сывороточное свойство Gm (а) не обнаружено.

Исследовали также жидкость из гнилостных подкожных пузырей 2 разложившихся трупов с группой Gm (а + ) и Gm (а—) как неразведенную, так и при разведении в 2, 4, 8, 16, 32, 64 раза. Жидкость от первого трупа обладала «тормозным» свойством до разведения 1 :32, в жидкости же от второго трупа ни в одном из разведений субстанция Gm (а) не обнаружена.

Определение разновидностей Gm (а) в пятнах крови можно использовать в практической судебномедицинской экспертизе, особенно для дифференцирования подозреваемых с одинаковой группой системы АВО. При этом требуется очень немного материала пятна, чем эти исследования выгодно отличаются от методик установления других факторов крови в пятнах.

Обнадеживающим фактом является успешное определение разновидностей Gm (а) в пятнах крови с большими сроками хранения. Установление субстанции Gm (а) в органах грудной и брюшной полостей окажется полезным при исследовании расчлененных трупов.

Не исключено, что свойство Gm (а) может быть выявлено в сперме и других выделениях; в этом направлении предстоят дальнейшие исследования.

Выводы

Согласно сведениям, имеющимся в литературе и совпадающим с результатами наших исследований, в сыворотке крови людей может содержаться особое «тормозное» свойство, присущее белковой фракции крови — гамма-глобулину — и названное сывороточным свойством Gm. В зависимости от наличия или отсутствия свойства Gm (а) сыворотка крови людей подразделяется на две разновидности: Gm (а + ) и Gm (а—).

В исследованных нами образцах сыворотки крови от 1000 жителей Советского Союза, преимущественно русской национальности, разновидность Gm (а + ) встретилась в 41,7%, разновидность Gm (а—) — в 58,3%.

Свойство Gm (а) успешно обнаруживается в пятнах крови, даже с большими сроками хранения.

На нашем материале это «тормозное» сывороточное свойство найдено в легких, почках, селезенке и печени трупов людей, имевших разновидность Gm (а + ). В мышцах Gm (а) устанавливается менее отчетливо, в головном мозгу не выявлено.

Определение разновидностей Gm (а) при исследовании пятен крови и расчлененных трупов может способствовать более точному разрешению поставленных перед экспертизой вопросов.