Выявление агглютиногенов A и B в жидкой и сухой крови гетероиммунными гемагглютинирующими бараньими сыворотками анти-A и анти-B

Задачей настоящей работы являлось сравнительное изучение способности гетероиммунных бараньих и кроличьих сывороток анти-А и анти-В и изогемагглютинирующих сывороток а и (3 выявлять агглютиногены А и В в жидкой и сухой крови.

Бараньи сыворотки анти-А и анти-В мы изготовили в сывороточном отделе Института судебной медицины.

Исследование жидкой крови

Кровь получали на Московской городской станции переливания крови. Групповую принадлежность 200 образцов крови определяли 3 парами сывороток: гетероиммунными бараньими и кроличьими сыворотками анти-А и анти-В и изогемагглютинирующими сыворотками а и р.

С гетероиммунными сыворотками реакцию агглютинации осуществляли на белой тарелке. Учет вели невооруженным глазом и с помощью 7-кратной лупы при ярком электрическом освещении. С изосыворотками работали пробирочным методом, группу крови определяли по агглютиногенам и агглютининам (по Шиффу). Реакцию агглютинации наблюдали невооруженным глазом и с помощью микроскопа.

После определения групповой. принадлежности устанавливали агглютинационную способность (агглютинабильность) эритроцитов каждого образца крови.

Агглютинабильность эритроцитов группы А (II). К группе А относилось 67 образцов крови. Бараньи сыворотки анти-А, взятые для исследования, имели титр 1:32 и 1:64. Эритроциты 44 образцов крови группы А исследовали бараньими сыворотками анти-А с титром 1:32, а эритроциты 23 образцов — сыворотками с титром 1:64. Агглютина- бильность эритроцитов в первом случае была равна 1:16 (2 образца) и 1:32 (42 образца), во втором — 1:32 и 1:64 (соответственно 4 и19 образцов).

Эритроциты тех же 67 доноров исследовали кроличьими сыворотками анти-А с титром 1:64—1:256. Эритроциты 28 образцов проверяли сыворотками с титром 1:64, 25—с титром 1:128 и 14 — с титром 1:256. Агглютинационная способность эритроцитов в первом случае была равна 1:32 (1 образец) и 1:64 (27 образцов), во втором — 1:64 и 1:128 (соответственно 3 и 22 образца) и в третьем — 1:256 (14 образцов).

Изогемагглютинирующие сыворотки а имели титр 1:32—1:128. Эритроциты 28 образцов крови были испытаны сыворотками а с титром 1:32, 30 образцов — с титром 1:64 и 9 — с титром 1 : 128. Агглютинабильность эритроцитов в первом случае была равна 1:8, 1:16 и 1:32 (соответственно 1, 10 и 17 образцов), во втором — 1:32 и 1:64 (соответственно 5 и 25 образцов), в третьем — 1:128 (9 образцов).

Агглютинабильность эритроцитов группы В (III). К группе В от носилось 55 образцов крови. Эритроциты были испытаны бараньими сыворотками анти-В с титром 1:32 и 1:64 (соответственно 28 и 27 образцов). В первом случае агглютинационная способность эритроцитов всех образцов оказалась равной 1:32, во втором — 1:32 и 1:64 (соответственно 1 и 26 образцов).

При применении кроличьих сывороток анти-В с титром 1:32 и 1:64 агглютинабильностъ эритроцитов была равна 1:32 (29 образцов из 30), 1:16 (1 образец) и 1:64 у всех 25 образцов крови.

При использовании изосывороток р с титром 1:64 агглютинационная способность эритроцитов оказалась равной 1:8, 1:16, 1:32 и 1:64 (соответственно 2, 4, 5 и 26 образцов); при исследовании сыворотка: ми р с титром 1 : 128 агглютинабильность эритроцитов была равна 1:64 и 1:128 (соответственно 6 и 12 образцов).

Агглютинабильность эритроцитов группы AB (IV). К группе АВ относились образцы крови 58 доноров. При исследовании 52 образцов крови бараньими сыворотками анти-А с титром 1:32 агглютинационная способность эритроцитов была равна 1:16 и 1:32 (соответственно 3 и 49 образцов), а при применении сыворотки с титром 1 : 64 агглютинабильность эритроцитов оказалась равной 1:64 у всех 6 образцов.

Гетероиммунные кроличьи сыворотки анти-А имели титр 1 :64 —1:256. Эритроциты 12 образцов крови были испытаны сывороткой анти-А с титром 1:64, 40 образцов — сыворотками с титром 1: 128 и6 — сывороткой анти-А с титром 1:256. Агглютинационная способность в первом случае оказалась равной 1:32 и 1:64 (соответственно 3 и 9 образцов), во втором — 1:16, 1:32, 1:64 и 1:128 (соответственно 1, 2, 3 и 34 об разца), в третьем — 1:256 у всех 6 об разцов крови.

При использовании изогемагглютинирующих сывороток а с титром 1:32 агглютинабильность эритроцитов была равна 1:8, 1:16 и 1:32 (соответственно 3, 2 и 5 образцов); при титре сывороток 1:64 она оказалась равной 1:8, 1:16, 1:32 и 1:64 (соответственно 3, 12, 1 и 32 образца).

Гетероиммунные бараньи сыворотки анти-В имели титр 1:64—1:128. Эритроциты 30 образцов крови проверены сыворотками, имеющими титр 1:64, и 28 образцов — сыворотками с титром 1:128. В первом случае агглютинабильность эритроцитов была равна 1:32 и 1:64 (соответственно 5 и 25 образцов), во втором — 1:64 и 1:128 (соответственно 3 и 25 образцов).

При использовании кроличьей сыворотки анти-В с титром 1:32 агглютинационная способность эритроцитов оказалась равной 1:32 у всех 10 образцов, а при исследовании 48 об разцов крови сыворотками анти-В, имеющими титр 1 : 64, она оказалась равной 1:32 и 1:64 (соответственно 4 и 44 образца).

Изосыворотки β имели титр 1:64. Агглютинабильность эритроцитов была равна 1:16, 1:32, 1:64 (соответственно 1, 12 и 45 образцов).

Результаты, полученные при исследовании жидкой крови, показали, что агглютинабильность эритроцитов зависит не только от степени выраженности агглютиногена крови, но и от титра сыворотки, взятой для исследования.

Исследование сухой крови

Исследовано 200 образцов сухой крови гетероиммунными бараньими и кроличьими сыворотками анти-А и анти-В и изогемагглютинирующи- ми сыворотками а и β.

После определения групповой принадлежности и агглютинабильности эритроцитов жидкую кровь выливали на чашки Петри и высушивали при комнатной температуре. Сухую кровь хранили в пакетах в темном месте. Агглютиногены сухой крови определяли методом абсорбции агглютининов в количественной модификации.

Выявление агглютиногена А в сухой крови группы А(II) . Агглютиноген А 67 образцов сухой крови группы А выявляли в реакции абсорбции агглютининов с гетероиммунными бараньими и кроличьими сыворотками анти-А (по 3 серии каждой) и изогемагглютинирующими сыворотками а 4 серий.

Из табл. 1 видно, что частная специфическая активность бараньих сывороток анти-А с одними образцами была одинакова или выше, чем у кроличьих сывороток анти-А и изогемагглютинирующих сывороток а, с другими — ниже.

В 2 образцах крови агглютиноген А не выявлен бараньей сывороткой анти-А. С этими образцами была поставлена дополнительно реакция абсорбции агглютининов, причем сыворотка была взята с титром 1 : 16 и титрование ее проводили в смежных разведениях. Агглютиноген А определили в обоих образцах (6 ступеней поглощения).

Выявление агглютиногена В в сухой крови группы В(III). Агглютиноген В в 55 образцах сухой крови группы В определяли в реакции абсорбции агглютининов с гетероиммунными бараньими (3 серии) и кроличьими (4- серии) сыворотками анти-В и изосыворотками β (4-серии).

Исследования показали, что наиболее высокой степенью общей ичастной специфической активности в отношении образцов крови группы В обладали гетероиммунные бараньи сыворотки анти-В (табл. 2).

Выявление агглютиногенов А и В в сухой крови группы AB (IV). Агглютиногены А и В в 58 образцах сухой крови группы АВ выявляли бараньими и кроличьими сыворотками анти-А и анти-В и изосыворотками а и р . Испытано по 4 серии каждой сыворотки. Результаты исследований представлены в табл. 3.

Низкое специфическое связывание (1—2 ступени поглощения) наблюдалось с образцами крови со слабо выраженным агглютиногеном А. Во всех этих случаях ставили дополнительно реакцию абсорбции агглютининов с теми же сыворотками, только взятыми с титром 1:16. Титрование исходных и абсорбированных сывороток производили в смежных разведениях. Во всех образцах агглютиноген А был открыт.

Таблица 3

Результаты сравнительного исследования сухой крови группы AB (IV)

Проведенные исследования показали, что гетероиммунные бараньи сыворотки анти-А в одних образцах крови группы АВ выявляют агглютиноген А так же, как изогемагглютинирующие сыворотки а и гетероиммунные кроличьи сыворотки анти-А в других — хуже.

Общая и частная специфическая активность гетероиммунных бараньих сывороток анти-В всегда была выше общей и частной специфической активности кроличьих сывороток анти-В и изогемагглютинирующих сывороток р.

Иммунные бараньи и кроличьи сыворотки анти-А и анти-В и изогемагглютинирующие сыворотки аир испытаны в реакции абсорбции агглютининов с 20 образцами. сухой крови группы 0(I). Ни в одном случае побочного связывания не отмечено.

Выводы

1. Агглютинабильность эритроцитов зависит не только от степени выраженности агглютиногена крови, но и от титра сыворотки, взятой для исследования.
2. Частная специфическая активность гетероиммунных гемагглюти- нирующих бараньих сывороток анти-А с одними образцами сухой крови одинакова или выше таковой иммунных кроличьих сывороток анти-А и изогемагглютинирующих сывороток а, с другими — ниже.
3. Общая и частная специфическая активность гетероиммунных бараньих сывороток анти-В выше общей и частной специфической активности кроличьих сывороток анти-В и изогемагглютинирующих сывороток р.
4. Побочного связывания агглютининов α, β, анти-А и анти-В с 20 образцами сухой крови группы 0 не отмечено.