Некоторые проблемные аспекты практического применения технологии лазерной микродиссекции для целей судебно-экспертного молекулярно-генетического анализа

П.Л. Иванов, С.Н. Леонов, Е.Ю. Земскова

В результате проведения на реальных экспертных объектах экспериментов с использованием технологии лазерной микродиссекции (LCM) для целей молекулярно-генетического судебно-экспертного анализа выявлен ряд проблемных аспектов применения LCM в практической экспертной деятельности. В настоящей работе изучены некоторые из этих проблем, связанные с характеристиками анализируемых клеток и их физическим состоянием в объекте исследования. Полученные данные дают основания полагать, что неудачи при генотипировании отдельных клеток, полученных с помощью LCM, могут объясняться отсутствием в них пригодного для анализа генетического материала. Другой главной причиной неудач может являться снижение доступности генетического материала для ПЦР вследствие того, что клетки, подвергшиеся длительному воздействию факторов внешней среды, часто оказываются устойчивыми к термическому разрушению. Для преодоления этого затруднения разработана высокоэффективная система ПЦР-сопряженного лизиса, совмещающая преимущества протеиназного лизиса и использования ПЦР-совместимых детергентов.

Ключевые слова: лазерная микродиссекция, молекулярно-генетическая экспертиза, генотипирование ДНК в микропрепаратах и единичных клетках.

Certain topical aspects of the practical application of the laser microdissection technology for the purpose of forensic molecular-genetic analysis

P.L. Ivanov, S.N. Leonov, E. Iu. Zemskova

Experiments with the use of the laser capture microdissection (LCM) technology for the purpose of forensic molecular-genetic analysis carried out on real objects revealed a number of specific aspects of practical LCM application. Some of these problems have been investigated in the present work with special reference to the characteristics of the cells of interest and their physical properties in study objects. The data obtained give reason to conclude that a failure of genotyping of individual cells obtained by the LCM technique may be due to the lack of genetic material suitable for analysis. Another important cause is poor availability of the genetic material for PCR attributable to the resistance of cells subjected to the prolonged influence of environmental factors to thermal destruction. In order to obviate this difficulty, we developed a highly efficacious system with the use of PCR lysis reagents having the advantage of combination of proteolysis and the use of detergents compatible with PCR.

Keywords: laser microdissection, forensic molecular-genetic expertise, DNA genotyping in micropreparations and individual cells