Морфологическое изучение изолированных клеток (К определению органно-тканевой принадлежности наложений на орудиях травмы)

В последние годы уделяется большое внимание экспертизе клеточных наложений на орудиях травмы (А.П. Загрядская, 1961—1970; С. Буров и П. Медведев, 1969; Е.И. Гречихин, 1969, и др.). Доказана возможность цитологического исследования наложений спустя длительное время после их образования (А.П. Загрядская, 1965; Л.С. Федоровцева, 1965, 1966; О. Jelacic, 1964; W. Maresch, 1961), предложены методики извлечения клеток с предмета-носителя и приготовления препаратов (В.И. Бучинский и Ф.Л. Бычкова, 1964; М.В. Кисин и С.И. Любинская, 1965; Н.Г. Шалаев, 1965).

Однако основной раздел исследования — микроскопическое установление органно-тканевой принадлежности клеток — остается неразработанным. Руководства по гистологии и цитологии почти не содержат сведений, которые можно использовать как критерии для идентификации клеток. Опыт судебного гистолога для этой цели недостаточен, так как основан на оценке клеток в плоскостных срезах.

В состав любого органа входят различные ткани. В органах, основная функция которых осуществляется эпителиальной тканью, присутствуют соединительная, гладкомышечная, нервная ткань, кровь и лимфа. То же относится и к органам, в которых основной является мышечная или нервная ткань. Поэтому на орудиях могут находиться как специфические, так и неспецифические клеточные элементы. Для установления органной принадлежности имеют значение специфические элементы. Однако во многих органах (легкие, кожа, почки и др.) специфические клетки принадлежат к одной ткани — эпителиальной, в силу чего они имеют сходные цитологические черты.

Мы поставили в работе две задачи: изучить морфологические признаки изолированных клеток и мельчайших частиц ткани и оценить их как критерии для установления органно-тканевой принадлежности клеток. Использовали методику отпечатков, так как клеточные наложения на поверхности травмирующего предмета по способу образования можно рассматривать как своеобразные отпечатки поврежденной поверхности органа.

Материал и методика

На предметные стекла делали отпечатки поверхности разреза легких, печени, почек, а также отпечатки покровов целомических полостей тела 9 трупов лиц обоего пола, умерших от различных причин (травма, инфаркт миокарда, асфиксия, отравление дихлорэтаном) в возрасте 20—56 лет и подвергшихся судебно-медицинскому вскрытию через 2—16 часов после смерти.

Препараты для микроскопического исследования готовили из высушенных и хранившихся в комнатных условиях (от 2 дней до 3 месяцев) отпечатков, которые смывали 0,5% раствором уксусной кислоты по методике, разработанной С.И. Любинской (1964) для клеток крови на вещественных доказательствах. Контролем служили препараты, приготовленные из самих отпечатков, а для исключения патологических изменений — гистологические препараты.

Препараты фиксировали метиловым спиртом: отпечатки — 15 мин., смывы (после высушивания в термостате при 37°) — 3—5 мин; затем окрашивали (на стеклах) гематоксилином Майера и эозином и азур-эозиновой смесью. Продолжительность окрашивания гематоксилином отпечатков 10 мин., смывов 15 мин., азур-эозином — 20—30 мин. Материал для гистологических препаратов фиксировали 10% раствором нейтрального формалина, срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином.

При исследовании пользовались микроскопами МБИ-6, МББ-1 и «Микрофот». Клеточные элементы измеряли с помощью окуляр- и объект-микрометра (Е. Leitz и С. Zeiss).

Исследовали более 400 препаратов.

Результаты исследования

В препаратах, изготовленных из смывов отпечатков поверхности разреза легких¹ с наибольшим постоянством обнаруживали альвеолярные макрофаги и плоские эпителиальные клетки. В наших исследованиях эти клетки были найдены в 8 наблюдениях.

Вид альвеолярных макрофагов типичен (см. рисунок, а на вклейке), хотя величина клеток колеблется от 8 до 50 мк, а ядер — от 4 до 12 мк. В одних наблюдениях клетки довольно одинаковы по величине — 25—35 мк, в других — размеры клеток колеблются больше и встречается много крупных экземпляров. Форма клеток большей частью круглая, реже овальная. Протоплазма при окраске гематоксилин-эозином розовая, мелкозернистая с тем или иным количеством бурых включений, при окраске азур-эозином — серовато-голубоватая, зернистость заметна лучше. Степень зрелости клеток и интенсивность окрашивания в одном и том же препарате различны. Ядра макрофагов круглые или овальные, имеют изредка форму диска, располагаются эксцентрично и часто так близко к оболочке, что представляются выбухающими. Большинство клеток содержит 1—3 ядра, меньшая часть — 4—6 ядер. Иногда попадаются дегенеративно измененные макрофаги с интенсивно закрашенным ядром и плохо различимыми глыбками хроматина. Наряду со зрелыми макрофагами почти всегда встречаются мезенхимальные клетки, разнообразные по величине (12—40 мк), стадиям развития и форме (неправильно округлая или несколько вытянутая). Встречаются также клетки с короткими закругленными отростками. Контуры всех этих клеточных форм менее отчетливые, нежели у макрофагов, протоплазма зернистая, эозином окрашивается в бледно-розовый, азур-эозином — в серовато-голубоватый цвет. В ней изредка встречаются вакуоли и бурые включения. Ядра округло-овальные, светлее и крупнее, чем у макрофагов (при таком же размере клетки), с ядрышком в центре.

Плоские эпителиальные клетки (см. рисунок, б на вклейке) неправильно округлой полигональной формы размером от 20 до 70 мк. Протоплазма интенсивно окрашивается эозином и представляется относительно однородной. При окраске азур-эозином она голубовато-синеватая, в ней выявляется исчерченность, создающая впечатление сетчатости. Ядра клеток круглые и овальные (8—12 мк), расположены центрально или несколько эксцентрично, красятся с различной интенсивностью, в некоторых едва виден хроматин.

Гораздо реже обнаруживали малые альвеолярные клетки и клетки эпителия бронхов.

Малые альвеолярные клетки (встретились в 5 наблюдениях) обычно неправильно округлой формы, некоторые имеют края в виде срезанных граней. Многие клетки сохраняют кубическую форму, размер их колеблется от 8 до 25 мк, единичные экземпляры достигают 37 мк. Протоплазма бледно-розовая, «пенистого» вида, при окраске азур-эозином— серовато-голубоватая, мелкозернистая. Ядра круглые, диаметром б—8 мк, располагаются главным образом центрально, в них различимы темные глыбки хроматина, которые лучше выявляются на светло-фиолетовом фоне при окраске азур-эозином.

Клетки покровного эпителия слизистой оболочки бронхов (см. рисунок, в на вклейке) наблюдали в 4 случаях. Будучи изолированными, многие из них сохраняют характерную коническую форму (с узкой светлой апикальной и широкой темной базальной частью) и мерцательные реснички. Длина клеток от 20 до 60 мк. При длине клетки 45—60 мк базальная часть равна 9—10 мк, при длине 35—37 мк — не превышает 6 мк. Ядро (10—12 мк) располагается в широкой части клетки вблизи ее сужения, имеет овально-вытянутую форму. Помимо описанных, встречаются более мелкие клетки с интенсивно и равномерно окрашенным ядром и цитоплазмой; апикальная часть у них отсутствует или сморщена и имеет вид жгутика; незаметны и мерцательные реснички. Такие клетки производят впечатление высохших. Изредка попадаются комплексы эпителиальных клеток (до 8). Из-за кучного расположения клетки и их реснички контурируются недостаточно хорошо.

В препаратах смывов отпечатков поверхности разреза печени (специфическими являются печеночные клетки и покровный эпителий желчных протоков) постоянно обнаруживали печеночные клетки (см. рисунок, г на вклейке), изолированные или в комплексах (по 2—3, иногда до 8 клеток). Длина клеток 18—40 мк, чаще 25—35 мк. Одни из них хорошо очерчены, контуры других «шероховатые», «размытые». Форма клеток разнообразна: чаще неправильно округлая или неправильно многоугольная, реже — квадратная или круглая. Такой полиморфизм характерен и для клеточных комплексов. Протоплазма многих клеток с базофильным оттенком, грубозернистого вида и единичными мелкими вакуолями (крупные вакуоли обнаруживаются редко). Ядра круглые или несколько овальные, размером 7—10 мк, расположены центрально или эксцентрично. Встречаются двухъядерные клетки. Интенсивность окраски ядер различна, глыбки хроматина почти всегда различимы.

В одном случае печеночные клетки были резко изменены, имели неправильную форму, размеры до 40 мк, овальное ядро и густо окрашенную цитоплазму с оттенком базофилии. Отдельные клетки были деформированы — неправильно вытянутой и звездчатой формы, базофильная протоплазма содержала бурную зернистость.

Клетки эпителия желчных протоков встречали в случаях, когда отпечатки были сделаны специально в области разреза крупных протоков.

Они имеют вид высоких неправильно призматических или неправильно цилиндрических клеток, апикальные отделы которых содержат бурую зернистость и кое-где имеют намек на кутикулу. Ядра округлые, интенсивно окрашены, располагаются в базальных отделах клеток. В комплексах таких клеток определяются крупные пустоты, и тогда клетки напоминают бокаловидные.

В препаратах, изготовленных из смывов отпечатков поверхности разреза почек, почечный эпителий (кубический, плоский и цилиндрический) имелся в небольшом количестве и не в каждом препарате.

Клетки кубического эпителия (см. рисунок, д на вклейке) имеют неправильно прямоугольную форму и расплывчатые контуры. Размер их 23—26 мк. Цитоплазма светлая с пустотами. Ядра большей частью круглые, иногда овальные, размером 8—11 мк, располагаются несколько эксцентрично, окрашиваются бледно, глыбки хроматина различимы.

Клетки плоского эпителия (см. рисунок, е на вклейке) полигонально-вытянутые, реже — полигонально-округлые. Многие из них с двумя ядрами, протоплазма зернистая, содержит мелкие и крупные вакуоли. Большинство клеток размером 35—40 мк (ядра 8—9 мк), на встречаются и более крупные — до 80 мк (ядро 20 мк).

Клетки цилиндрического эпителия (см. рисунок, ж на вклейке) характеризуются шлемовидной формой, достигают длины 37 мк и ширины 25 мк (ядро 10 мк). Протоплазма их слегка вакуолизирована. Эти клетки встречаются значительно реже кубических и плоских.

Азур-эозином наиболее интенсивно в серо-голубой цвет окрашиваются клетки цилиндрического эпителия, менее интенсивно — кубического и светлее всего — плоского эпителия. Ядра всех клеток светло-фиолетовые.

В препаратах смывов отпечатков целомических полостей тела (плевры, эпикарда, перикарда, брюшины) обнаруживали (не в каждом смыве) одиночные мезотелиальные клетки (см. рисунок, з, и на вклейке). Типичными являются большие клетки (70 мк), имеющие вид полигональных пластинок. Ядро в них овальное или круглое (10—12 мк) с различимым хроматином, окрашивается интенсивно и расположено более или менее центрально. Протоплазма светлая, сероватая, в некоторых клетках с обильными мелкими и крупными включениями интенсивно серо-голубоватого цвета, создающими впечатление сетчатости, наиболее выраженной вокруг ядра.

Помимо крупных клеток, встречали мезотелиальные клетки малых размеров (18—20 мк), а также ядра с обрывками цитоплазмы. Ядра мелких клеток по величине и окраске не отличаются от ядер крупных клеток, протоплазма имеет серо-голубоватый цвет и обилие мелких включений.

Наряду со специфическими клетками в препаратах из смывов отпечатков поверхности разреза легких, печени, почек находили и неспецифические клеточные элементы. Наиболее часто встречались клетки белой крови и клетки адвентициального типа. Эритроциты в процессе приготовления препаратов гемолизировались уксусной кислотой, и поэтому не препятствовали исследованию других клеток. Клетки белой крови обычно были представлены ядрами нейтрофилов и лимфоцитами.

Клетки адвентициального типа имели светлые ядра (10—15 мк); различимое ядрышко и глыбки хроматина и были окружены узким (5—8 мк) ободком протоплазмы. Обычно они располагались комплексами (см. рисунок, к на вклейке), тесно прилегая друг к другу, наслаиваясь и образуя фигуры неправильно удлиненной формы. Больше всего таких клеток было в препаратах почек. Попадались также ядра, вытянутые, интенсивно окрашенные или овальные, более светлые. У обоих или одного из полюсов таких ядер сохранялись вытянутые обрывки протоплазмы, которая изредка окружала ядро в виде узкой бахромчатой каймы. Клетки со светлым ядром были похожи на эндотелиальные, а с темным — на соединительнотканные.

Часто имелись «голые» ядра круглой или овальной формы с различной интенсивностью окраски. Определить их органно-тканевую принадлежность не представлялось возможным.

В отдельных случаях в препаратах печени находили плоские эпителиальные клетки полигонально-вытянутой или полигонально-округлой формы длиной 30—80 мк. Ядро в них овальное или круглое, располагается центрально или слегка эксцентрично, окрашивается умеренно, имеет различимые глыбки хроматина, а иногда — ядрышко. Протоплазма либо интенсивно розовая, гомогенная, либо бледно-розовая, слегка «пенистая». Эти клетки могут быть отнесены к мезотелиальному покрову и на поверхность разреза печени попали, по-видимому, с секционного ножа, на котором остались при разрезе серозных покровов. Результаты исследования клеток и микроскопических частиц других органов и тканей, а также оценка полученных данных будут представлены в следующем сообщении.

¹ Для легких специфическими клетками являются плоские эпителиальные (кроющие) клетки и малые альвеолярные секреторные) клетки, составляющие выстилку альвеол. а также альвеолярные макрофаги и клетки покровного эпителия слизистой оболочки бронхов.

К статье С.Н. Антоновой и Я.Л. Митяевой

Клетки легких, печени, почек и серозных оболочек после смыва высушенных отпечатков.

а — альвеолярные макрофаги легкого; б — плоский эпителий (кроющий) альвеол легкого; в — покровный эпителий слизистой бронхов; г — печеночные клетки с пигментом в цитоплазме; д — клетки кубического эпителия почки; е — гигантская двухъядерная клетка плоского эпителия почки; ж — цилиндрический эпителий почки (шлемовидные клетки); з — плоский эпителий (мезотелий) висцеральной плевры; и — плоский эпителий (мезотелий) эпикарда; к — адвентициальные клетки.