Изготовление сыворотки анти-В иммунизацией баранов слюной человека и изучение свойств этих сывороток для использования в судебно-медицинских целях

Групповые субстанции А и В, содержащиеся в слюне, являются антигенами (Lehrs, 1930). В 1957 г. М.В. Мишакова изготовила сыворотки анти-А и анти-В иммунизацией кроликов слюной, причем иммунные агглютинины испытуемых сывороток (в противоположность антиэритроцитарным) абсорбировались антигенами А и В слюны выделителей в той же степени, что и изоагглютинины а и Экспертное применение этих сывороток показало, что они менее, чем изосыворотки, подвержены влиянию загрязненных предметов-носителей. Для их абсорбции требовалось небольшое количество крови.

Сыворотка анти-В, изготовленная иммунизацией баранов эритроцитами человека группы В, обладает более высоким авидитетом к антигену В крови, чем одноименная кроличья сыворотка и изосыворотка а к антигену слюны и спермы — почти таким же, как изосыворотка (Н.А. Соловьева, 1961, 1962, 1964, 1968).

Совершенствовать иммунные сыворотки можно путем выбора животного для иммунизации с учетом антигенной дифференцировки его организма и использования для иммунизации крови, слюны и спермы.

Цель настоящего исследования — изготовление сывороток анти-В иммунизацией баранов слюной человека. Мы полагали, что изготовленные сыворотки будут более активны к антигену В слюны, чем антиэритроцитарные.

Материал и метод. Иммунизировано 4 барана русской романовской породы в возрасте от 10 месяцев до 1,5 лет. Цикл иммунизации состоял из 10 инъекций с интервалами в 1—2 дня. Внутривенные инъекции комбинировали с внутримышечными. Антигеном служила центрифугированная кипяченая слюна выделителей группы В. На 7-й день после окончания иммунизации у животных брали кровь и исследовали сыворотки. Для получения специфичной сыворотки требовалось от 1 до 3 абсорбций с общим количеством эритроцитарной массы от 1/4 до 3/8 объема сыворотки.

Сыворотка предназначена для метода агглютинации на плоскости.

В параллельных опытах изучали бараньи сыворотки анти-В (испытуемые и антиэритроцитарные) и изогемагглютинирующие — р.

Авидитет изготовленных сывороток изучали в реакции абсорбции с пятнами крови (13—17 образцов), слюны (9—13 образцов) и мочи (10 образцов). Сыворотки применяли в титре 1:32. Две сыворотки проверили с пятнами крови и слюны по методу Э.В. Орла (неопубликованные данные).

Исследовали влияние на сыворотки 6 образцов марли и 30 образцов бельевых, плательных, костюмных и пальтовых тканей, 13 из которых были экспертными.

Результаты. Из 4 иммунных неабсорбированных бараньих сывороток изготовили 17 специфичных сывороток анти-В, отвечающих требованиям, предъявляемым к диагностическим серологическим реагентам для судебно-медицинских целей.

6 образцов марли и 24 образца тканей не оказывали влияния на изготовленные сыворотки в реакции абсорбции, 5 образцов тканей снижали титр сыворотки на одну ступень и 1 образец ткани — на две ступени. Следует отметить, что экспертные образцы оказывали на испытуемую сыворотку так же, как и на антиэритроцитарную, меньшее влияние (снижали титр на 1—2 ступени), чем на изосыворотку р (снижение на 1—4 ступени).

Исследование пятен крови. Пятна крови группы В снижали титр испытуемых сывороток на 5—6, а образцы группы A1B — на 4 ступени поглощения. Побочного связывания агглютинина анти-В антигенами пятен крови групп 0 и A1 не отмечено. Таким образом, изготовленные сыворотки имели почти такой же авидитет к антигену крови, как и антиэритроцитарные (4—6, 5—6 ступеней поглощения).

Исследование пятен слюны. Агглютинин анти-В испытуемых сывороток полностью абсорбировался антигеном В пятен слюны выделителей групп В и АВ (6 ступеней поглощения). Пятна слюны невыделителей тех же групп или совсем не снижали титра сывороток, или ослабляли его на одну ступень.

Изучение двух сывороток в реакции абсорбции агглютининов по методу Э.В. Орла показало, что полное специфическое связывание агглютинина анти-В пятном слюны группы Bse наблюдалось при титре сыворотки от 1:2 до 1:128, в то время, как слюна группы Bse либо совсем не снижала титра (1:128) сыворотки, либо снижала его (при титре 1:2—1:64) на одну ступень.

Испытуемые сыворотки более активны к антигену слюны, чем антиэритроцитарные сыворотки анти-В. Они выявляли антиген В в пятнах слюны, разведенной до высушивания в 200 и 400 раз, а сыворотки, изготовленные иммунизацией баранов эритроцитами, — в пятнах слюны, разведенной в 100 и 200 раз. Неспецифическое связывание антитела анти-В пятнами слюны групп OSe и A1Se отсутствовало.

Исследование пятен мочи. Пятна мочи выделителей групп В и АВ обычно снижали титр испытуемых сывороток на 2—4 ступени. Только один образец группы BSe дал полное специфическое связывание агглютинина анти-В (6 ступеней поглощения). Пятна мочи невыделителей группы В или совсем не абсорбировали антитело анти-В, или связывали его в незначительной степени, снижая исходный титр сыворотки на одну ступень. Таким образом, дифференциация выделителя от невыделителя по моче оказалась в большинстве случаев такой же нечеткой, как и при использовании антиэритроцитарной сыворотки анти-В.

Обсуждение. Иммунизацией баранов слюной получены сыворотки анти-В с высоким авидитетом к антигену В крови и слюны. С помощью этих сывороток можно четко дифференцировать выделителя от невыделителя по слюне в пределах групп В и АВ. При исследовании пятен мочи такая дифференциация не всегда возможна ввиду меньшей активности изготовленных сывороток к антигену В мочи. Следует помнить, что вещественные доказательства, загрязненные мочой, в большинстве случаев будут меньше влиять на испытуемые сыворотки, чем на изогемагглютинирующую сыворотку р. Положительным свойством изготовленных сывороток является также то, что они, как и антиэритроцитарные, менее подвержены влиянию предмета-носителя, чем изосыворотка р.

Сопоставление наших данных с результатами, полученными М.В. Мишаковой с сыворотками анти-В кроликов, иммунизированных слюной, показывает, что между бараньими и кроличьими сыворотками нет существенных качественных различий. Однако в производственном отношении использование баранов более целесообразно.

Изложенные данные позволяют сделать вывод о том, что изготовленные сыворотки пригодны для определения антигена В в пятнах крови и слюны.