Определение фенотипов системы Gc в пятнах крови

Имеющиеся в литературе данные о возможности определения фенотипов системы Gc в пятнах крови ограничены и противоречивы.

В 1963 г. Vogt определяла фенотипы Gc в пятнах давностью 10 дней на стекле, в более старых пятнах диагностика была затруднительна, а при давности 24 дня вообще не удавалась. Определение фенотипов Gc в пятнах на шерсти, полотне, бумаге, древесине и т. п. автор считает невозможным.

Nerstrom и Jensen (1963) четко выявляли фенотипы Gc в пятнах цельной крови давностью до 3 часов на текстильном материале. Преципитация ослаблялась на 2-й день, а на 3-й день фенотипы не устанавливались. На фильтровальной бумаге надежное определение в пятнах крови возможно только в пределах 2 дней и лишь для фенотипов Gc 1 — 1 и Gc 2—2. В пятнах сыворотки на фильтровальной бумаге (хранившихся при комнатной температуре) фенотипы Gc определялись в течение 1—2 месяцев.

Brzecka и Mikulewicz (1966) установили фенотипы Gc в пятнах крови давностью 7 дней, нанесенных на хлопчатобумажную ткань и стекло.

Suzuki (1969), усовершенствовав методику, показал возможность определения фенотипов Gc в пятнах крови давностью 6—8 месяцев.

Мы изготовили 51 пятно крови взрослых людей с известными фенотипами Gc; из них 16 — на марле, 8 — на газете, по 7 — на стекле (чашки Петри), древесине, плотной шерстяной материи и 6 — на шелковой ткани. Пятна высушивали в течение суток при комнатной температуре, образцы завертывали в бумагу и хранили при комнатной температуре. Исследовали иммуноэлектрофорезом в агаре на 3, 17, 34, 44, 61, 97, 171, 210 и 340-й день. Применяли поливалентную иммунную сыворотку кролика, изготовленную в Научно-исследовательском институте судебной медицины, моноспецифическую козью сыворотку анти-Gc производства Behring Werke и моноспецифическую лошадиную сыворотку анти-Gc того же производства. Моноспецифические сыворотки разводили физиологическим раствором в 2 раза.

Из пятен вырезали кусочки размером 1X5 или 1,5X4 см, тщательно размельчали и экстрагировали приблизительно 24 часа физиологическим раствором как при комнатной температуре, так и в холодильнике (изменения температуры на результаты реакции не повлияли).

Добавляли физиологический раствор до полного смачивания предмета-носителя и получения 2—3 капель экстракта. Вытяжку отсасывали, центрифугировали 10—15 мин. при 3000 об/мин и исследовали над-осадочную жидкость. Фенотипы определяли по методике Schlesinger и соавт. (1963). На 3 и 17-й дни пятна исследовали только поливалентной сывороткой кролика, а в последующие дни применяли как поливалентную иммунную сыворотку кролика, так и моноспецифическую сыворотку анти-Gc.

На 170, 210 и 340-й день фенотипы определяли лошадиной моноспецифической сывороткой, диагностические возможности которой уступали козьей моноспецифической сыворотке.

На 3-й день во всех пятнах крови определили фенотипы. Начиная с 17-го дня, количество образцов сократили в целях экономии сыворотки. Из 36 пятен крови, исследованных на 17-й день поливалентной иммунной сывороткой, в 29 определили фенотипы. Те пятна, в которых определить фенотип не удалось, повторно не исследовали. Однако при исследовании тех пятен, в которых на 17-й день фенотип определить не удалось, в более поздние сроки с моноспецифической сывороткой получили положительные результаты. Например, в одном из таких пятен фенотип определили на 34, 171 и 210-й день. Возможно, что отрицательные результаты объясняются малым количеством белка в вытяжке или технической ошибкой.

На 44, 61, 97-й дни исследовали по И—13 пятен крови на различных предметах-носителях, во всех случаях был установлен фенотип. На 170-й день из 13 пятен фенотип определили в 9 случаях, на 210-й — в 7, а на 340-й день из 10 пятен — в 8.

Результаты определения фенотипов системы Gc в пятнах крови представлены в таблице.

Как видно из таблицы, определение фенотипов моноспецифической сывороткой более эффективно, чем поливалентной сывороткой.

Выявление фенотипов системы Gc в пятнах крови

Примечание. Среднеарифметический процент для поливалентной сыворотки высчитан без учета пятен давностью 3 и 17 дней.

Это можно объяснить тем, что при использовании поливалентной иммунной сыворотки кролика на иммунофореграмме появляется плоский, не имеющий четких границ, широкий преципитат различной силы, расположенный между стартом и областью альбумина, частично или полностью закрывающий преципитаты в области а-и р-глобулинов. Появление его, вероятно, объясняется протеолизом.

Применение моноспецифической сыворотки, содержащей антитела к белковым фракциям — аг-макроглобулину и Gc, обеспечивает диагностику фенотипов Gc, так как на иммунофореграмме отсутствует описанный выше нетипичный преципитат.

В ряде случаев при исследовании вытяжки из одного и того же пятна моноспецифической сывороткой диагностировать фенотип не удавалось, в то время как поливалентной иммунной сывороткой диагностика осуществлялась легко. Это можно объяснить более высоким титром Gc-антител в поливалентной иммунной сыворотке кролика.

Определение фенотипов лучше начинать с моноспецифической сывороткой, а при отрицательном результате использовать поливалентную сыворотку или параллельно исследовать одно и то же пятно сыворотками двух видов.

В ряде случаев преципитаты Gc были ослаблены и более плоские, чем при исследовании нормальных сывороток человека, что объясняется, по-видимому, меньшей концентрацией белка в экстракте. Однако, учитывая совокупность признаков, характерных для Gc-преципитатов (начало и конец преципитатов, радиус дуги и расположение ее по отношению к аг-макроглобулину), удается правильно установить фенотип Gc в пятнах крови, нанесенных как на всасывающую, так и на не-всасывающую поверхность предмета-носителя и имеющих давность до 11 месяцев. Кроме того, не обнаружили различий в сохраняемости фенотипов на различных предметах-носителях. Растворимость сывороточного белка Gc в различных растворителях, влияние температуры, влажности, ультрафиолетовых лучей, химических реагентов на сохранение Gc в пятнах крови и возможности его определения являются предметом дальнейшего изучения.

Выводы

1. Белок Gc сохраняется в пятнах крови как на всасывающих, так и на невсасывающих материалах давностью до 11 месяцев.
2. Возможность определения фенотипов в пятнах зависит не только от их давности, но и от особенностей примененной сыворотки анти-Gc, а также от концентрации белка в вытяжке из пятна. Моноспецифическая сыворотка анти-Gc более эффективна, чем поливалентная.
3. Фенотипы Gc в пятнах крови давностью до 3 месяцев определялись моноспецифической сывороткой анти-Gc в 100%, а при давности до 7—11 месяцев — в 50—80% случаев.
4. В случае получения отрицательного результата при определении типов Gc в пятнах крови моноспецифической анти-Gc сывороткой целесообразно применить поливалентную сыворотку анти-Gc.