О возможности определения прижизненности повреждений по изменению содержания фракций белков скелетных мышц

Целью работы явилось изучение содержания фракций саркоплазматических белков скелетных мышц в области переломов и ран, причиненных в близкие сроки до и после наступления смерти, для выяснения возможности их дифференциальной диагностики.

Экспериментальные переломы костей конечностей 68 взрослых кроликов производили в области бедра ударом молотка за 5, 15, 30 и 60 мин до наступления смерти животных и через такие же сроки после нее. Каждому кролику причиняли одно повреждение. Причиной быстрой смерти животных являлась тупая травма головы с частичным разрушением головного мозга. Кроме того, изучили 116 экспериментальных прижизненных и 100 посмертных ран, которые причиняли в указанные выше сроки острым и тупым предметом на наружной поверхности бедра. 45 аналогичных механических повреждений, возникших в пределах 1 ч до (25) и после (20) наступления смерти, были исследованы на секционном материале. Кусочки мышц из области переломов, ушибленных и колото-резаных ран ¹ исследовали через 12 ч после смерти. Одновременно изучали контрольные (неповрежденные) симметричные участки мышечной ткани.

Саркоплазматические белки скелетных мышц исследовали по методике В.В. Кадыкова (1963). Кусочки мышечной ткани весом 1 г отмывали от крови, разрезали на мелкие части и растирали с песком. К гомогенату добавляли 1,5 мл фосфатного буфера рН 7,8, ионная сила 0,1. Белки извлекали в течение 2 ч. Затем пробирки с экстрактом центрифугировали 16 мин при 9000 об/мин. Надосадочную жидкость подвергали диализу в течение 48 ч при 0—1°. Выпадающий при этом осадок белка отделяли центрифугированием и надосадочную жидкость использовали для электрофореза. Предварительно отечественный (дальневосточный) агар-агар 4—5 сут отмывали дистиллированной водой. Электрофорез продолжался 15 ч при силе тока 6—7 мА/см и напряжении 3—4 В/см, после чего гель 4—5 мин окрашивали раствором амидо черным 10В, четырехкратно промывали 3% раствором уксусной кислоты и высушивали на стекле до образования тонкой прозрачной пленки. Оптическую плотность разных участков электрофореграммы определяли с помощью денситометра. Денситограммы разрезали на части соответственно белковым фракциям, взвешивали на торсионных весах и высчитывали процентное содержание фракций. Результаты исследований обрабатывали статистически.

На всех электрофореграммах скелетных мышц человека и кролика из области прижизненных и посмертных повреждений, а также контрольных участков ткани определялось 8 белковых фракций (см. рисунок). Процентное содержание белковых фракций неповрежденных скелетных мышц, взятых вдали от места травмы, мы принимали за норму.

Денситограмма и электрофореграмма
саркоплазматических белков скелетных
мышц человека (1—8-я фракции).

Содержание белковых фракций скелетных мышц людей и животных в области всех посмертных повреждений было таким же, как в контрольных участках ткани (Р>0,05).

В зоне прижизненных ран и переломов по сравнению с посмертными повреждениями и контрольными участками как на секционном, так и на экспериментальном материале отчетливо и закономерно отмечалось статистически значимое (Р от <0,001 до <0,01) увеличение процентного содержания первой фракции саркоплазматических белков скелетных мышц. Так, например, в зоне прижизненных переломов, причиненных даже за 5 мин до наступления смерти, первая фракция составила 8,26+0,84% белка, в то время как в контрольных участках на ее долю приходилось 3,11+0,46%.

Со стороны остальных белковых фракций столь существенных сдвигов не наблюдалось.

Судя по данным В.В. Кадыкова, В.А. Юрьева, М.Д. Принцева, А.В. Матросова (1965) и других авторов, первая фракция саркоплазматических белков скелетных мышц является миоальбумином или смесью альбумина сыворотки с миоальбумином. По мнению В.С. Касавиной (1959), быстрое увеличение количества миоальбумина в области травмы связано с переходом в поврежденные ткани жидкости с высоким содержанием белка. И.А. Ойвиным (1956) и другими исследователями установлено, что в первые же минуты воздействия повреждающего агента на ткань нарушается проницаемость капилляров и в ткани из сосудистого русла начинают выходить мелкодисперсные альбумины.

То обстоятельство, что в области повреждений, причиненных даже в ближайшее время до наступления смерти, по сравнению с контролем обнаруживается увеличение процентного содержания 1 фракции белков саркоплазмы скелетных мышц, может способствовать диагностике прижизненности повреждений.

¹ Приведены результаты исследования колото-резаных ран, проведенного М.Я. Зингерманом (1969).