Выявление группового антигена A1 в смешанных с кровью пятнах слюны и спермы методами иммуноэлектрофореза

Необходимость дифференцирования групповых антигенов системы АВО в выделениях и крови возникает перед экспертом почти в каждой экспертизе, связанной с половыми преступлениями. Методы абсорбции-элюции для этой цели непригодны. Они специфичны и высокочувствительны, но по общепринятой методике не позволяют дифференцировать антигены в смешанных следах выделений и крови. Методы иммуноэлектрофореза для решения указанных задач в судебной медицине еще нс применяются, поскольку необходимы реагенты. преципитирующие групповые вещества.

Ранее нами было установлено, что для выявления антигена А, в выделениях методом встречного иммуноэлектрофореза может быть использован 1% солевой экстракт из белковых желез виноградной улитки Helix pomatia (антн-А_НР). Этот реагент специфично выявляет антиген А₁ в выделениях лиц, относящихся к категории выделителей, и не реагирует с вытяжками из пятен крови.

Целью настоящей работы было изучение возможности выявления методами иммуноэлектрофореза антигена A₁ в пятнах слюны и спермы, смешанных с кровью, с помощью 1% экстракта анти-А_НР.

Исследовали вытяжки из пятен слюны и спермы A₁Se и A₁BSe. смешанных с кровью групп А, В, 0 или АВ. Пятна экстрагировали дистиллированной водой в течение 2—72 ч при комнатной температуре. В качестве опорных сред применяли 1,5 % агаровый и 2 % агарозный гели, приготовленные на мединал-вероналовом буфере (pH 8,6, ионная сила 0,1).

Использовали следующие методы электрофореза:

• 1) встречный иммуноэлектрофорез;
• 2) ракетный иммуноэлектрофорез (при использовании этого метода на поверхность геля наносили анти-А_нр и выдерживали блок геля во влажной камере при комнатной температуре в течение 20 ч, затем в геле вырезали лунки и вносили туда испытуемые вытяжки);
• 3)    метод иммуноэлектрофореза по Grabar (после проведения электрофореза вытяжек в геле вырезали канавки параллельно разделенным белковым зонам и заполняли их анти-А_нр; диффузию антигена A₁ и антн-А_НР проводили во влажных камерах в термостате при 37°С в течение 48—72 ч);
• 4)    модифицированный нами метод параллельного иммуноэлектрофореза [1]. Суть данной модификации заключается в следующем: в геле вырезают 3 лунки (одну для вытяжек из пятен, две для анти-А_нр). Одна из лунок для антн-А_нр располагается на той же линии, перпендикулярной к оси катод — анод, что и лунка с вытяжкой, другая смещена на 1 см в сторону анода и на 0,4 см в сторону от оси катод — анод. Во все лунки вносят соответствующие реагирующие компоненты и проводят электрофорез. Затем пластинки с гелем помещают во влажные камеры и на 72 ч оставляют в термостате при 37°С.

После иммуноэлектрофореза (встречного и ракетного) и по завершении диффузии (при параллельном иммуноэлектрофорезе и иммуноэлектрофорезе по Grabar) блоки геля отмывали от непрореагировавших белков 0,9 % раствором хлорида натрия, высушивали и окрашивали амидо черным 10Б. Избыток красителя с геля отмывали 7 % раствором уксусной кислоты.

Проведено 157 исследований образцов спермы (18) и 314 исследований образцов слюны (12), смешанных с кровью. Образование преципитатов имело место в 147 исследованиях спермы и 294 исследованиях слюны (см. таблицу).

Как видно из таблицы, примесь крови несколько затрудняет выявление антигена А₁ спермы в смешанных следах.

Примесь крови влияет и на возможность выявления антигена А₁ слюны. Однако установлена определенная закономерность. Так. независимо от группы крови антиген A₁ слюны в смешанных следах был выявлен практически во всех случаях при использовании методов встречного и ракетного иммуноэлектрофореза. Методами параллельного иммуноэлектрофореза и иммуноэлектрофореза по Grabar в образцах слюны, к которым была добавлена кровь групп В и 0, антиген A₁ был выявлен соответственно в 80 и 84 % случаев. Причиной этого, по-видимому, мог быть α-агглютинин, присутствующий в крови этих групп. Соединяясь с антигеном А₁ слюны, он образует растворимый комплекс А₁-α. Размеры комплекса больше, чем каждого из составляющих компонентов, поэтому ему труднее перемещаться в геле в процессе иммуноэлектрофореза и особенно при простой диффузии. При параллельном иммуноэлектрофорезе и иммуноэлектрофорезе по Grabar перемещение антигена и антитела навстречу друг другу происходит исключительно за счет простой диффузии. В случае эквимолярного соответствия антигена и антитела в вытяжке присутствуют только комплексы А₁-α, которые либо вообще не перемещаются, либо перемещаются только на небольшое расстояние. Это, по-видимому, и является одной из основных причин отрицательных результатов при использовании методов параллельного иммуноэлектрофореза и иммуноэлектрофореза по Grabar. Положительный результат реакции с этими же пятнами при использовании методов встречного и ракетного иммуноэлектрофореза можно объяснить диссоциацией части комплексов под влиянием электрического поля. Не исключено, что под влиянием электрического поля часть комплексов А₁-α все же перемещается.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют, что в смешанных следах примесь крови независимо от ее групповой принадлежности не препятствует специфичному выявлению антигена A₁ слюны и спермы групп A₁Se и A₁BSe методами иммуноэлектрофореза с помощью анти-А_НР. Это может быть использовано для дифференцирования антигена A₁ этих выделений от антигена А₁ крови.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кудрина Т.А. // Лаб. дело. — 1982. — №7. — С. 44—46.