Методика цитологического исследования частиц тканей и органов при судебно-медицинской экспертизе вещественных доказательств

Около 20% судебно-цитологических исследований связано с определением регионального (органно-тканевого) происхождения и половой принадлежности высохших микрочастиц тканей и органов человека. Половую принадлежность приходится определять и при экспертизе расчлененного трупа.

Вместе с тем из высохших частиц не всегда удается приготовить гистологические препараты хорошего качества даже при высоком уровне микротехники (Kovacs, 1974). Использование приемов, принятых в цитологии (измельчение или раздавливание микрочастиц), позволяет получать хорошие препараты из нервной и эпителиальной тканей и паренхиматозных органов (С.Э. Глизер, 1967, 1972; Ishizu и соавт., 1974). Частицы мышечной и соединительной ткани поддаются обработке хуже. Кроме того, раздавленные частицы непрочно приклеиваются к стеклу и при дальнейшей обработке могут быть утеряны. Использование для прикрепления белок-глицерина несовместимо с выявлением Y-хроматина. Из твердых тканей (костной, хрящевой) цитологические препараты ранее не готовились.

Мы поставили задачу разработать методику получения равномерно тонких неотклеивающихся пленок из высохших микрочастиц любых тканей. Исследовали 72 кусочка: черепа, ребер, хряща грудинно-ключичного сочленения, коры головного мозга, кожи груди и головы, стенки тонкой кишки, взятые от 16 трупов в сроки до 1 сут после смерти. Частицы толщиной 1—3 мм от этих кусочков высушивали и хранили при комнатной температуре от 1 нед до 6 мес. Из свежих и высушенных частиц, которые фиксировали 10% формалином или декальцинирующим фиксатором (5 мл трихлоруксусной кислоты, 10 мл формалина, дистиллированной воды до 100 мл), готовили парафиновые и целлоидиновые срезы. Приготовили 150 гистологических препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином. Цитологические препараты также готовили из свежих и высушенных частиц, которые предварительно обрабатывали различными жидкостями. Частицы помещали на часовое стекло и под стереомикроскопом МБС-1 измельчали (препарировали). Микрочастицы переносили на предметные стекла и обрабатывали с целью получения тонких пленок. Высушенные препараты фиксировали метиловым спиртом, окрашивали азур-эозиновой смесью или флюорохромом (С.Н. Антонова, 1975).

Приготовили и исследовали 380 препаратов. Микрофотосъемку осуществляли на пластинки «Микро» с объективом 20 X и окуляром 10 X. Рисунки с негативов печатали при одинаковом увеличении.

Для решения поставленной задачи выясняли, какими веществами нужно обрабатывать частицы тканей и с помощью каких приемов можно постоянно получать тонкие (в 1—2 ряда клеток) препараты.

Известно, что воздействие на клетки в следах крови таких жидкостей, как дистиллированная вода, физиологический раствор, а также жидкостей, содержащих белки, малоэффективно и приводит к развитию микроорганизмов, снижающих качество препаратов (С.И. Любинская, 1969). Поэтому представлялось целесообразным, использовать другие жидкости, обладающие свойством восстанавливать объем частиц, отмывать их от гемоглобина, а также фиксировать и декальцинировать ткани. Испытали смесь, предложенную А.Н. Ратневским (1972), растворы 10, 25, 40% уксусной кислоты, 0,5 и 5% растворы трихлоруксусной кислоты, 10% нейтральный формалин, декальцинирующий фиксатор (Ромейс, 1953).

Для сравнения действия этих растворов и фиксаторов свежие и высушенные частицы тканей одинаковой величины заливали ими в пробирках. Через сроки от 4 ч до

4 сут частицы исследовали под стереомикроскопом, препарируя набором инструментов (рис. 1). Микрочастицы переносили на предметные стекла, измельчали или раздавливали. Полученные цитологические препараты сравнивали с гистологическими, оценивали степень сжатия тканевых структур (в первую очередь ядер клеток), толщину препаратов и пригодность их для исследования полового хроматина.

Выяснили, что жидкости, обладающие фиксирующим действием, непригодны для получения цитологических препаратов, так как в них ткани теряют эластичность и клейкость. По этой причине микрочастицы не поддаются раздавливанию до состояния тонкой пленки, измельчаются неравномерно (крошатся) и в процессе дальнейшей обработки часто отклеиваются. Препараты получаются неравномерной толщины, клетки и ядра в них более сжаты, чем на гистологических препаратах. Исследование полового хроматина на большей части препаратов невозможно.

Наилучшие результаты получили при воздействии на высушенные частицы растворами уксусной кислоты независимо от концентрации. Уксусная кислота растворяет гемоглобин, вызывает набухание межклеточного вещества, частицы восстанавливают объем и просветляются. Создаются благоприятные условия и для исследования под стереомикроскопом. Кроме того, объекты сохраняют эластичность и клейкость, хрящевая и костная ткани через 1—4 сут декальцинируются.

С целью приготовления равномерно тонких пленок, прочно приклеивающихся к предметному стеклу, мы апробировали следующий прием. Микрочастицы, обработанные раствором уксусной кислоты, раздавливали между двумя предметными стеклами и в таком виде оставляли в зажиме. После высыхания ткани разъединяли стекла скальпелем и получали два препарата. Эти препараты были значительно тоньше гистологических срезов, клеточные и тканевые элементы в них были крупнее и на большей части препарата располагались в 1—2 слоя клеток (рис. 2, на вклейке). X- и У- хроматин выявляли без дополнительной обработки, которая часто требовалась для выявления полового хроматина в гистологических срезах (гидролиз, трипсинизация).

Рис. 2. Препараты из высохших микрочастиц. а — гистологический срез кожи груди; б, в, г — цитологические препараты кожи груди, скелетной мышцы, кости ребра.

Предлагаемая методика технически проста и отличается от всех ранее применявшихся тем, что с ее помощью можно исследовать частицы (микрочастицы) любых тканей объектов, находящихся в любом состоянии. Полученные препараты, как правило, не требуют дополнительной обработки с целью удаления излишка белка, как гистологические препараты, и могут быть быстро приготовлены.

Разработанная методика расширяет также возможности экспертного исследования с целью решения вопросов о наличии частиц тканей животного или человека и о региональной принадлежности. Она позволяет получить информацию о морфологических особенностях микрочастиц тканей еще на этапе их обработки и препаровки под стереомикроскопом, что невозможно при использовании гистологической техники. Эта информация важна и для приготовления препаратов из тех частей объекта, которые более пригодны для диагностики пола.