Определение групп Нр и Gc жидкой крови посредством вертикального электрофореза в одном блоке полиакриламидного геля

Метод вертикального электрофореза в полиакриламидном геле позволяет устанавливать сывороточные группы Нр и Gc в жидкой крови человека (Н.Н. Старостин, 1974, 1975). Krupe (1969) и др. указали на возможность одновременного определения этих двух систем в одном блоке из полиакриламида.

Мы исследовали сыворотки крови доноров обоего пола русской и украинской национальности. Использовали ранее опубликованную методику— модификацию вертикального электрофореза в полиакриламидном геле для определения группоспецифического компонента (Gc) с аналогичным насыщением сыворотки раствором гемоглобина и применением аппаратуры.

Применяя 4% полиакриламидный гель в непосредственной близости от старта, обнаруживали, как правило (но не всегда), две фракции 9 и 6 (здесь и далее цифровые обозначения условны) , обладающие постоянной скоростью передвижения (см. рисунок), что устанавливается при контрольной окраске белков раствором бензидина. Фракция 6 может совпадать с одной из фракций Нр 2—1 или 2—2, это приводит к известному увеличению их интенсивности. При окраске амидо черным в зоне разделения белков с Нр 1—1 устанавливали две непостоянные и слабо проявляющиеся фракции 3 и За и наиболее мощную и быстро мигрирующую фракцию 1. Спектр белков Нр 2—2 характеризуется комплексом наиболее медленно передвигающихся фракций. Нр 2—1 свойственна группа фракций, обладающих наибольшей скоростью миграции,, из них одна, наиболее близко расположенная к аноду, так же, как и аналогичная фракция в Нр 1—1, совпадает с фракцией трансферрина (Тf). Совпадение фракций Нр 1 — 1 и Нр 2—1 с Tf может не наблюдаться при известном увеличении длины электрофоретического разделения, при этом из зоны гаптоглобина выделяется фракция Tf, имеющая несколько большую и непостоянную скорость передвижения. Что касается резкого увеличения интенсивности основной фракции 1 в Нр 1 — 1, то это может происходить не только за счет слияния ее с фракцией Tf, но и вследствие наибольшего уровня белка, присущего данной разновидности группы гаптоглобина.

В зоне, непосредственно примыкающей к альбумину со стороны катода, обнаруживали также три наиболее распространенных белковых спектра, относящихся к компоненту Gc. Различают Gc 2—2, Gc 2—1, Gcl—1 (см. рисунок). Для Gc 2—2 характерна одна наиболее мощная и медленно мигрирующая фракция II; для Gc 1 — 1 — наиболее быстро передвигающаяся фракция III. Группе Gc 2—1 свойственны фракции II и III, совпадающие с уровнем миграции фракций II (Gc 2—2) и III (Gc 1—1). Три разновидности группоспецифического компонента могут иметь более быстро мигрирующие, но не постоянно встречающиеся фракции: Ila, IlIa, IV и IVa, интенсивность которых менее выражена.

Провели 750 исследований образцов сывороток крови от доноров. Группы Нр и Gc определяли не позже 1—2 дней после взятия крови, сыворотку хранили в холодильнике.

Фенотип Gc 1—1 определили у 340 (46,6%), Gc 2—1—у 325 (42,1%), Gc 2—2 — у 85 доноров (11,3%) против ожидаемых соответственно 336, 9, 331,2, 81,9.

Фенотип Нр 1—1 обнаружили у 116 (14,9%), Нр 2—1—у 367 (49,4%)) и Нр 2—2 — у 267 (35,7%) доноров против ожидаемых соответственно 119,6, 359,7, 270,7.

Принимая во внимание генетическую модель наследования Gc 1, Gc 2, а также Нр 1 и Нр 2, определили частоты аллелей для разновидностей группоспецифического компонента: Gc¹ = 0,6765, Gc² = 0,3235 при X² =1,137, Р<0,80, но Р>0,70; для разновидностей гаптоглобина: Нр¹ = 0,3960, при Нр² = 0,6040, при Х² = 0,6460 и Р>0,90, но Р>0,80.

Эффективность судебно-биологических экспертиз спорного отцовства для населения Крыма составила по системе Gc 16,65%, по Нр — 18,55% (при одномоментном определении 35,2%).

Выводы

1. Предложенная модификация метода вертикального электрофореза в полиакриламидном геле позволяет одновременно определять в одном блоке разновидности не только гаптоглобина, но и группоспецифического компонента.
2. Получены достоверные результаты распределения групп Нр и Gc среди части населения Крымской области, показана возможная эффективность использования этих сывороточных систем при производстве судебно-биологических экспертиз спорного отцовства.
3. Одновременное определение в одном блоке разновидностей Нр и Gc крови человека значительно сокращает время, затрачиваемое на исследование.