Обнаружение крови микрохроматографией

Установление наличия крови в следах спектральным и микрокристаллическим методами имеет свои недостатки. Поэтому продолжается изыскание более эффективных и простых методов. К ним можно отнести хроматографию на бумаге (Д.Д. Джалалов, 1971; 1974), которая позволяет устанавливать наличие крови на загрязненных предметах-носителях, в старых загнивших пятнах, измененных воздействием факторов внешней среды. Кроме того, большое значение имеет возможность обнаружения наличия крови в минимальном количестве материала без предварительного его экстрагирования.

Апробация методов показала, что более удобным и отвечающим требованиям является горизонтальная хроматография на рефлексирующей алюминиевой фольге со слоем силикагеля (силуфол UV-254) и использованием растворителя, состоящего из бутанола и аммиака в отношении 10 : 10.

Методика и материал

Камерой для хроматографирования служила чашка Петри. На дно чашки наливали верхний слой растворителя, нижний слой наливали в два стеклянных сосуда, которые ставили к стенкам чашки друг против друга. Высота сосудов должна быть на 0,5 см ниже высоты камеры.

Вырезали прямоугольный участок фольги со слоем силикагеля площадью 3x6 см, на котором простым карандашом различали 6 полос шириной по 0,5 см. (Если количество объектов меньше 6, то вырезают участок шириной меньше 3 см.)

Оба края участка на ширине 10 мм загибали в сторону без силикагеля на 90°. Поверхность одного загнутого края полностью очищали от силикагеля, у противоположного края, на линию старта, наносили объект исследования (кусочек корочки или вырезки из пятна) размером 100X100 мкм. (Объекты меньшей величины наносили на стартовую линию на кончике швейной иглы, используя лупу.)

Фольгу с объектами исследования осторожно помещали в камеру загнутыми краями вниз. Растворитель быстро поднимался по тому краю, где имелся слой силикагеля.

В чашке Петри на алюминиевой фольге со слоем силикагеля — пять объектов исследования с определенной величиной Rf. Одна полоса без объекта (контрольная).

Хроматографирование продолжали (10—15 мин) до приближения линии растворителя к противоположному краю фольги, где кончается слой силикагеля.

Хроматограмму вынимали, высушивали и последовательно обрабатывали 0,1% раствором основного бензидина в хлороформе и 3% раствором перекиси водорода. Для этого в другую чашку Петри наливали 3—5 мл первого раствора и в таком же положении помещали Хроматограмму. Когда раствор проходил 5—6 мм за линию старта, хроматограмму вынимали я ставили на стол. Через 1—2 мин таким же образом хроматограмму помещали во второй раствор в чашку Петри.

При этом на белом фоне силикагеля у исходной линии каждой полосы проявлялась зона пигмента крови интенсивно синего цвета с определенной величиной Rt (см. рисунок). Для того чтобы сохранить хроматограмму как вещественное доказательство, ее вынимали из чашки Петри (с раствором перекиси водорода) и сразу же помещали в чашку Петри с 10 мл дистиллированной воды, прокрывали крышкой и оставляли на 3—4 ч. Под воздействием воды зона пигмента освобождалась от балластных веществ. Хроматограмму вынимали и высушивали при комнатной температуре. На белесоватом фоне полоски силикагеля оставалась стойкая зона пигмента крови желтовато-красного цвета.

Результаты исследования

Исследовали 20 высохших корочек крови со сроком хранения 3-—15 лет, 20 пятен крови на фильтровальной бумаге и хлопчатобумажной ткани и 10 пятен крови на камне, асфальте, бетоне, шифере, кафеле, фарфоре, стекле, дереве, железе и алюминии с давностью хранения от 1 нед до 2 мес.

В результате исследования во всех случаях на хроматограммах у исходной линии получили зоны удлиненной формы, синего цвета различной интенсивности. На хроматограммах корочек крови со сроком хранения до 5 лет зона пигмента крови была интенсивно синего цвета, а со сроком хранения более 5 лет интенсивность окрашивания была менее выражена, иногда бледно-синего цвета. На наш взгляд, такое свойство обусловлено плохой растворимостью красящего вещества крови в растворителе бутанол—аммиак (1:1).

Следует отметить, что интенсивность окрашивания зоны пигмента крови на хроматограммах корочек и вырезок из пятен крови, расположенных на фильтровальной бумаге, также была неодинаковая (при одинаковых сроках хранения). Это можно объяснить тем, что количество пигмента в корочках было больше, чем в пятнах.

Выводы

1. Предложен микрохроматографический метод обнаружения крови в следах, с помощью которого можно устанавливать наличие крови как в следах небольшой давности, так и со сроком хранения от 3 до 15 лет.
2. Раствор 0,1% основного бензидина в хлороформе можно использовать для проявления хроматограмм с пятнами крови на рефлексирующей алюминиевой фольге со слоем силикагеля (силуфол UV-254).
3. Образующаяся на хроматограмме зона красящего вещества крови не растворима в воде.
4. Хроматограммы могут быть сохранены как документы, подтверждающие результаты исследования.