О внедрении системы HLA в судебно-медицинскую практику

Заключения по поводу спорного отцовства, материнства и замены детей являются групповыми, а не индивидуальными. В результате удается лишь относительно редко исключать предполагаемого отца и никогда нельзя утверждать отцовство (материнство) конкретного лица. Процент исключения ложно указанных отцовств целиком зависит от частоты распределения антигенов и числа исследуемых экспертом систем. Система лейкоцитарных антигенов (HLA) является сложной, полиморфной, она весьма перспективна для использования в судебно-медицинских целях, однако соответствующих сообщений мы не нашли.

В 1968 г. ВОЗ официально приняла комбинацию антигенов HLA как самостоятельную систему. С тех пор количество известных антигенов увеличивалось и на 1975 г. составляло 51. Антиген обозначается HLA с добавлением букв А, В, С и D в зависимости от локусов.

В настоящее время установлено, что субстрат системы HLA заложен в VI паре гомологичной аутосомной хромосомы. В каждом локусе находится комплекс генов, контролирующих обособленные Антигены. В одной хромосоме представлено по одной специфичности из каждого локуса, а в соответствующей хромосомной паре — по две. Таким образом, каждый человек получает от родителей по одному аллелю от каждого локуса, т. е. по одному гаплотипу, идентичному материнскому и отцовскому. Ранее было известно два локуса «La», или I (сейчас он носит название «А»), и «Four», или II (сейчас его называют «В»), Обнаружены еще два локуса: III — «С» и IV — «D» (Dausset, 1970; Walford, 1969).

Установлено, что антигены HLA обнаруживаются практически во всех тканях и органах и располагаются неравномерно на поверхности мембран ядросодержащих клеток, больше всего их содержится в лейкоцитах, тромбоцитах, селезенке, легких, печени и др. (Kourilsky и соавт., 1967; Berah и соавт., 1970). Большинство исследователей отмечают отсутствие связи ее с другими изосерологическими и сывороточными системами. По биохимической структуре HLA-гликопротеид с молекулярным весом до 60 000 (Sanderson и соавт., 1971). Антигены системы HLA формируются в эмбриональном периоде и хорошо уже определяются с 3—5-месячного возраста плода (Seiger и соавт., 1969; Pellegrino и соавт., 1970). В основе метода определения HLA лежит реакция между лейкоцитами или тромбоцитами и иммунными сыворотками анти-HLA.

Разработаны 3 основные методики: реакция лейкоагглютинации, лимфоцитотоксическая и реакция связывания комплемента, которые можно использовать в микро- и макромодификациях. Мы пользуемся микро-лимфоцитотоксической реакцией Тарасаки в модификации Dausset. Преимуществами этого метода являются высокая воспроизводимость результатов и экономное расходование сывороток. На одно титрование расходуется 0,001 мл сыворотки, таким образом, расходуя 1 мл ее, можно протипировать до 1000 человек. Набором иммунных сывороток анти-HLA (по 1 мл каждой) можно провести свыше 300 экспертиз спорного отцовства. Эта методика требует также относительно малого количества крови, из которой выделяются лимфоциты. Так, у взрослых достаточно взять 5—6 мл, а у детей — всего 1—3 мл.

Отступя от классической методики получения лимфоцитов, мы не дефибринировали кровь детей, а помещали ее в раствор гепарина со средой № 199 в соотношении 1:10. Использовали набор иммунных сывороток анти-HLA, изготовленных и проверенных в отношении титра и специфичности в лаборатории Минеева (Болгария). Этот набор выявлял 26 антигенов. Из антигенов HLA, относящихся к локусу I мы определяли: HLA — A _{1, 2, 3, 9, 11, 28, 29, 23, 24, 25, 32} и к локусу II — HLA — В 5, 7. 8, 12. 13, 14. 18. 27, ω15, ω16, ω17, ω21. ω22. ω35, ω40 ¹

В целях изучения распределения HLA исследовали свыше 300 жителей Одессы и Одесской области украинской национальности обоего пола, преимущественно доноров станции переливания крови. Проведенный анализ показал: а) наиболее распространены антигены HLA— А2, ω25, 1, з и HLA —В₇, ωз5, 12; б) наиболее распространен гаплотип А₂, В₂.

Наряду с общепризнанными методами в 37 экспертизах использовали и определение HLA. Выяснили, что там, где нет исключения отцовства,, ребенок унаследует антигены матери и отца по гаплотипам. Наблюдение 1. Мать —HLA —A I, II/HLA —В 8, ω17. Предполагаемый отец —HLA — Аω24,    ω25/HLA —В 5, ω16. Ребенок -HLA-A_{1 ω25}/HLA-В 8, ω16. Ребенок от матери унаследовал гаплотип А₁/В₈, а от предполагаемого отца —Аω25/Вω16. Наблюдение 2. Мать —HLA —А 2, 3/HLA —В 5, _ш40. Предполагаемый отец— HLA — А₂„гз/НЬА В 27, ω35. Ребенок —HLA — A₂ω23/HLA —В₅, ω35. От матери ребенок унаследовал HLA —A₂/HLA — В 5, от отца — Аω23/Вω35.

Из 37 проведенных экспертиз в 34 случаях система HLA подтвердила предполагаемую возможность отцовства по системам ABO, MN, P₁, Rh, Нр. В 2 экспертизах было обосновано исключение отцовства по системам AB0 и HLA и в 1 экспертизе — только по системе HLA.

Исследование серологических систем дало следующие результаты: истица — 0αβ,MN,P + ,Rh + ,Hp 2:1; ответчик — 0αβ,N,P—,Rh—,Нр 2:1; ребенок — Oαβ, MN,P—,Rh + ,Hp 2:1. Эти результаты не исключали ответчика в отношении ребенка, однако, применив исследование HLA, удалось категорически исключить его отцовство:истица—HLA—A 1,2/HLA — В 5, 17; ответчик — HLA — А2, _W24/HLA — в 5, _w35; ребенок— HLA — A₁3/HLA — B_w17, _w18.

Это исследование показало, что ребенок не имеет антигенов, которые он мог бы унаследовать от ответчика, и последний не мог являться отцом ребенка.

Полученные результаты показали, что система HLA вполне пригодна для экспертиз спорного отцовства, материнства и замены детей. Кроме того, она в принципе может быть полезна не только по вышеуказанным делам, но и в случаях детоубийства, идентификации неизвестных трупов (если кровь можно взять в первые сутки после смерти и имеются предполагаемые близкие родственники), а также при розыске и установлении близких родственников конкретного человека.

¹ ω — антигены, нуждающиеся в уточнении и дальнейшей проверке.