Определение пола по высохшим пятнам крови

Открытие различий в строении клеточного ядра мужских и женских клеток позволило с большой достоверностью отличить любую мужскую ткань (слизистую, мышечную, кожу и др. ) от женской по наличию в последней отчетливо выраженных половоспецифических образований.

Впервые этот феномен продемонстрировали в 1949 г. Barr и Bertram, описавшие так называемый половой хроматин, постоянно присутствующий в клеточных ядрах кошки и не обнаруживаемый у кота.

Это общее положение распространяется и на кровь, половая принадлежность которой, как показали Davidson и Smith, а вслед за ними и ряд отечественных и зарубежных ученых, устанавливается по особенностям строения ядра лейкоцитов.

Рис. 1. Сегментоядерные лейкоциты свежей крови. Образования типа А.
Микрофотография, МБИ-6. Об. 90 ок. 10.

Рис. 2. То же. Образования типа В.

В обычно приготовленных и окрашенных мазках крови, взятых у женщин, на ядрах лейкоцитов можно отметить особые выросты в виде «барабанной палочки» или «узелка». Образования первого типа, обозначаемые буквой А (рис. 1), встречаются в сегментоядерных лейкоцитах около внутреннего края одного из ядерных сегментов, их величина 1, 5—2 мк. Они имеют форму барабанной палочки с булавовидным утолщением на свободном конце, соединены с внутренним краем ядра и отстоят от последнего в среднем на 2 мк. Образования второго типа, обозначаемые буквой В (рис. 2), отличаются от первых утолщением и укорочением соединительной «ниточки» до полного отсутствия последней. Тельце образования часто имеет вид бугорка на сегменте ядра размером 1, 5—2 мк.

Сравнительное изучение мужских и женских лейкоцитов вызвало необходимость учитывать еще одну форму образований — тип С (рис. 3), свойственную мужской и женской крови, представляющую собой многочисленные выросты в форме мелких палочек, крючков и ниточек, выступающих от внутреннего края сегментов. Образования этой группы иногда имеют незначительные булавовидные утолщения.

Большинство исследователей считает необходимым для точной диагностики пола просматривать 500 лейкоцитов. Среди них встречается в среднем 15, 2 образования типа А, 19, 2 — типа В, 17, 2 — типа С у женщин и 37, 2 — у мужчин, что делает эту форму характерной для мужской крови.

Установление пола человека по крови может иметь немаловажное значение в судебномедицинской практике. Однако серьезным препятствием на пути практического применения этого метода для идентификации пола является полное отсутствие каких бы то ни было приемов эффективной обработки обезвоженных лейкоцитов, позволяющей детально исследовать их ядерные структуры, особенно при длительных сроках хранения крови.

Рис. 3. Сегментоядерный лейкоцит свежей крови. Образования типа С.
Микрофотография, МБИ-6. Об. 90, ок 10.

Первое сообщение об этом сделали А. Коссаковский и Р. Гжелак, утверждавшие, что им удавалось установить пол индивидуума по пятнам крови давностью не более 24—48 часов. Определить пол по пятнам на льняной ткани и дереве авторам не удалось. В случаях (независимо от субстрата, на котором находилось пятно), когда эритроциты полностью гемолизированы (что свидетельствует о высыхании пятна крови), определить половую принадлежность крови оказалось невозможным из-за уменьшения размеров лейкоцитов и сжатия ядерного хроматина в один конгломерат.

Из этого практически следует вывод, что основной преградой на пути разработки методики определения пола по высохшим пятнам крови оказалось уплотнение ядер лейкоцитов. Обработка пятен растворами хлористого натрия и глюкозы не приводила к восстановлению первоначальных конфигураций и размеров ядер лейкоцитов.

По нашему мнению, ключевым вопросом в разработке методики является изыскание веществ, способных «восстанавливать» ядра лейкоцитов. Исходя из современного представления о строении и физиологических функциях лейкоцитов, мы испытали ряд «регенераторов»: растворы хлористого натрия и глюкозы в разных концентрациях, плазму крови и уксусную кислоту.

Объектами исследований служили пятна крови на стеклах давностью от 1 до 60 дней, марле — от 15 до 100 дней, шерстяной, хлопчатобумажной и синтетической тканях — от 1 до 30 дней, сохранявшиеся при комнатной температуре. Разрабатываемый нами способ состоит из следующих приемов:     экстрагирование лейкоцитов из пятна, обработка «регенератором», отделение и концентрация лейкоцитов, приготовление препарата (фиксация и окраска).

Пятно со стекла смывали одним из перечисленных растворов в пробирку диаметром 0, 6 см с оттянутым концом, которую выдерживали в термостате при 37° в течение 1—8 часов, после чего центрифугировали 6—8 мин. при 1500 об/мин для концентрации лейкоцитов.

Пятна крови на марле и тканях вырезали вместе с предметом-носителем, заливали в пробирке одним из указанных растворов и выдерживали в термостате, как указано выше. Затем ткань извлекали из пробирки, а жидкость центрифугировали при тех же условиях.

Из осадка готовили препараты, которые фиксировали 96° метиловым спиртом и окрашивали по способу Романовского-Гимзы.

При высыхании крови в пятнах эритроциты и часть лейкоцитов полностью разрушаются, у остальных разрушается клеточная оболочка, но сохраняется приядерная плазма и ядро. Количество разрушенных лейкоцитов зависит от субстрата, на котором содержалось пятно: на гигроскопических поверхностях (марля, мягкие шерстяные ткани, бывшие в употреблении хлопчатобумажные ткани), где жидкая часть крови быстро впитывается, разрушается незначительное количество лейкоцитов, на невсасывающих субстратах (стекло, синтетические ткани и т. д.), где пятно крови обычно имеет вид пленки, число разрушенных лейкоцитов достигает 70%, по-видимому, за счет гнилостных процессов, которые возникают при замедленном подсыхании. Ядра всех лейкоцитов при подсыхании крови значительно уплотняются и уменьшаются.

Рис. 4. Ядра лейкоцитов из пятна крови З-месячкой давности. Образования типа А.
Микрофотография, МБИ-6. Об. 90, ок. 10

Рис. 5. То же. Образования типа В.

Рис. 6. Ядра лейкоцитов из пятна крови 5-летней давности. Образования типа А.
Микрофотография, МБИ-6. Об. 90, ок. 10

Из всех апробированных веществ лишь 0, 5% раствор уксусной кислоты приводил к восстановлению размеров и тонких структур ядер в такой степени, что можно было определить половую принадлежность крови.

Рис. 7. То же. Образования типа В.

Растворы глюкозы, хлористого натрия, а также плазмы крови оставляли ядра лейкоцитов по-прежнему сильно уплотненными, непригодными для выявления половых особенностей.

Минимальный диаметр пятен крови, при исследовании которых получены положительные результаты, 0, 5 см (приблизительно 0, 025 мл). Это количество крови обрабатывали 0, 5 мл раствора уксусной кислоты. Данное соотношение крови и регенератора является оптимальным в смысле наименьшей потери лейкоцитов при регенерации.

Морфологические структуры ядер полностью сохранялись и имели те же особенности, что и в свежей крови (рис. 4, 5, 6, 7). Регенерация их в высохшей крови оказалась возможной и при давности пятен до 5 лет, что было связано с экспертизами по конкретным делам.

Исследование проводится без применения какой-либо уникальной аппаратуры или дефицитных реактивов и в будущем при соответствующей обработке результатов может быть воспроизведено в любой судебномедицинской лаборатории.

Приведенные сроки регенерации не являются пределом. В настоящее время мы проверяем возможность регенерировать кровь при более длительных сроках, применительно к обычным условиям хранения вещественных доказательств.

Выводы

1. Разработан способ обработки пятен высохшей крови 0, 5% раствором уксусной кислоты с целью восстановления и извлечения ядер лейкоцитов.
2. Установлена возможность диагностики половых различий лейкоцитов в высохших пятнах крови давностью до 5 лет.