О судебно-медицинской экспертизе наличия семенной жидкости методом электрофореза

До последнего времени единственным доказательным методом семенного происхождения пятна является морфологический метод — обнаружение сперматозоидов. Однако при разрушении последних под влиянием внешней среды, а также при азооспермии этот метод становится неэффективным.

Теоретической предпосылкой к данной работе послужили появившиеся в зарубежной литературе сообщения о том, что методом электрофореза белки жидкой спермы можно разделять на 5—7 фракций (Gray и Huggins, 1942; Ross, Moore и Miller, 1942; Ekbom и Wetterdal, 1961, и др.). Указанные авторы, сравнивая подвижности белков жидкой спермы и сыворотки крови, считают, что они сходны, т. $. фракции белков спермы откладываются на уровне у-, (3-, глобулинов и альбуминов сыворотки крови. Иными словами, сыворотка крови служила им эталоном для сравнения. Подвергнув электрофоре граммы жидкой спермы количественной обработке, они обнаружили низкий процент или полное отсутствие альбуминов, что само по себе является ценным диагностическим признаком белков жидкой спермы. Gray и Huggins нашли, что 3-глобулин в жидкой сперме составляет 34, 3—44, 5% общего белка, глобулин — 19, 8—27, 8%, альбумин — 17, 7—22, 7%, глобулин — 11, 4—21%. Schneider, Nowakowski, Voigt (1954) считают, что содержание альбуминов в жидкой сперме «очень скудно». Ekbom, Wetterdal (1961) полагают, что альбумины в семенной плазме присутствуют в малых количествах или вообще отсутствуют. Наоборот, в сыворотке крови они преобладают над глобулинами и составляют 60, 9% (В.Е. Предке-Ленский , 1960).

В отечественной литературе указаний об использовании электрофореза для исследования жидкой спермы и ее пятен в судебномедицинских целях мы не встретили. По данным Patella (1957), исследованием пятен спермы занимались Caaba и Carta (1954), которые разделяли указанным методом белки «вытяжек из пятен спермы на материи»; методика исследования не сообщена.

Учитывая изложенное выше, на первом этапе работы методом электрофореза на бумаге мы получили электрофореграмму нормальной жидкой спермы, которую использовали в качестве эталона для сравнения с электрофореграммами вытяжек из пятен спермы в последующих исследованиях.

Всего мы изучили 31 образец жидкой нормальной спермы, 1 образец спермы при азооспермии и вытяжки из 21 пятна. Сперму получали от разных лиц. Каждый образец жидкой спермы и вытяжку из пятна исследовали многократно (всего 507 исследований; из них жидкой спермы 347, вытяжек из пятен 160). Одновременно исследовали изогемагглютинирующую сыворотку.

Объекты хранили при 4°. Содержание общего белка определяли рефрактометром РЭУ. В жидкой сперме определяли наличие сперматозоидов. Изменение электрофореграмм жидкой спермы в зависимости от сроков хранения изучали повторно, исследуя образцы через 3, 6, 24, 48, 72, 96, 120 часов и т. д. в течение 2 месяцев. Кроме этого, мы изучали электрофоретическое разделение белков вытяжек из пятен давностью от 1 до 9 недель. Для сравнения исследовали образец спермы при азоспермии. Пятна экстрагировали физиологическим раствором и дистиллированной водой.

Разделение белков проводили на аппарате для электрофореза «ЭМИ», на бумаге В-1 (Нидершлаг, ГДР). Работали на двух режимах: 1) сила тока 1—3 ма, напряжение 150—180 в, время 15—22 часа; 2) сила тока 6—4 ма, напряжение 350 в, время 3, 5 часа. После этого мы переходили на режим: сила тока 1—2 ма, напряжение 180 в, время 2, 5 часа.

Содержание балковых фракций в жидкой сперме и крови

Полоски бумаги брали размером 44×2,5—3 см, вырезки 44×19 см. На бумагу постоянно наносили 0, 01 мл стандартной изогемагглютинирующей сыворотки и 0, 02 мл жидкой спермы или вытяжки из пятна. При изучении электрофоретического разделения жидкой спермы в качестве эталона использовали изогемагглютинирующую сыворотку, а при изучении вытяжек из пятен — жидкую сперму и сыворотку крови. Применили веронал-динасовый буфер с pH 8, 6, ионной силой 0, 06, который, судя по качеству электрофореграмм, не уступал так называемым специальным буферам, предложенным другими авторами, которые мы проверили в ходе работы. После выключения аппарата электрофореграмм на 20 мин. помещали в сушильный шкаф при 105°, для фиксации окрашивали кислотным сине-черным красителем и отмывали 2—4% раствором уксусной кислоты в течение 6—7 часов. Электрофореграммы жидкой спермы, вытяжек из семенных пятен и сыворотки крови изучали визуально; кроме того, исследовали количественно белковые фракции методом фотоэлектроколориметрирования (фотоколориметр ФЭК-М) и строили графики содержания белковых фракций.

На основании проведенных исследований установлено, что жидкая сперма разных лиц разделяется на 3—6 фракций (рис. 1, 2). Получены удовлетворительные результаты исследования с жидкой спермой и пятнами давностью 2 месяца. На рис. 1 даже визуально выявляется различие в интенсивности окрашивания фракций альбуминов сыворотки крови и жидкой спермы. При количественном исследовании 35 электрофореграмм получены средние данные процентного содержания белковых фракций жидкой спермы, резко отличающиеся от крови (в таблице средние данные содержания белковых фракций сыворотки крови приведены по В.Е. Предтеченскому, 1960).

Таким образом, результаты наших исследований согласуются с данными других авторов (см. выше). Электрофореграммы жидкой нормальной спермы разных лиц по количеству и расположению фракций одинаковы (см. рис. 2).

Исследованием жидкой спермы при азооспермии визуально установлено, что ее электрофореграмма отличается от нормальной двумя дополнительными фракциями, движущимися к аноду. К катоду движутся 4 фракции, сходные с фракциями нормальной спермы. Они составляют на уровне у-глобулинов 42,4%, 33,6%, щ- и у-глобулинов 13%, альбуминов 11%.

Пятна исследовали следующим образом. 50 мг пятна измельчали ножницами, помещали в пробирку, экстрагировали 0, 3 мл физиологического раствора в течение 5—7 суток и исследовали вытяжку. Сухое вещество спермы в пятне определяли взвешиванием. Установили, что чувствительность метода 15—20 мг сухой спермы в пятне. Содержание

общего белка в вытяжках определяли также рефрактометрически. Вытяжки из пятен удовлетворительно разделялись только при содержании в них 2, 62% общего белка, что соответствует показанию шкалы отсчета рефрактометра РЛУ 1, 34. При содержании общего белка в вытяжке менее 2, 62% электрофореграмма была нечеткой.

Электрофореграммы жидкой спермы и вытяжек из пятен по количеству и расположению фракций весьма сходны (см. рис. 2). Количественным исследованием белковых фракций 25 электрофореграмм установлены средние данные процентного соотношения белковых фракций вытяжек из пятен спермы: фракция, располагающаяся на уровне ?-глобулинов, — 18, 66%, р-глобулинов — 65, 94%, ?- и ?-глобулинов— 5, 46% и альбуминов — 10%. При сопоставлении цифровых данных содержания белковых фракций в жидкой сперме с вытяжками из пятен видно, что электрофореграммы их обладают очень большим доказательственным сходством. По нашему мнению, это важно для электрофоретической диагностики пятен спермы. Вместе с тем электрофореграммы этих объектов резко отличаются от электрофореграмм сыворотки крови (см. таблицу).

В настоящей статье описан метод, характеризующий электрофоретическую картину спермы в чистом виде, без примесей. В дальнейшем будут проведены эксперименты с целью дифференцирования пятен спермы от других выделений.

Выводы

1. Методом электрофореза на бумаге белки спермы разделяются на 3—6 фракций.
2. Содержание альбуминов в сперме меньше, чем в сыворотке крови.
3. Результаты электрофоретического исследования вытяжек из пятен спермы давностью до 9 недель аналогичны данным, полученным при электрофорезе жидкой спермы.
4. Получение характерных для спермы электрофореграмм при исследовании ее пятен свидетельствует о целесообразности дальнейшей разработки указанного метода с целью применения его для установления наличия спермы в следах на вещественных доказательствах.

Рис. 1. Форе граммы спермы г-н Б. (1, 2), П. (3, 4) и С. (5) и сыворотки крови (6).

Рис. 2. Форе граммы спермы (1—3), вытяжек из пятен спермы (4—6) и сыворотки крови (7).