О стабильности образцов крови, иммобилизованных на FTA-картах при их длительном хранении

Д.б.н. И.В. КОРНИЕНКО^1,2, эксп. Т.Г. ФАЛЕЕВА^1,2,3, эксп. С.С. БАЧУРИН^4,5, к.х.н. Д.А. ГУДКОВ⁶, Е.А. ГУРУЛЁВА¹, д.б.н., проф. П.Л. ИВАНОВ⁷

¹Филиал №2 111-го Главного государственного центра судебно-медицинских и криминальных экспертиз Минобороны России, Ростов-на-Дону, Россия, 344000; 2лаборатория «Идентификация объектов биологического происхождения» Южного федерального университета, Ростов-на-Дону, Россия, 344090; 3кафедра судебной медицины с курсом правоведения Ростовского государственного медицинского университета, Ростов-на-Дону, Россия, 344022; ⁴НИИ физической и органической химии Южного федерального университета, Ростов-на-Дону, Россия, 344090; ⁵кафедра фармацевтической химии и фармакогнозии Ростовского государственного медицинского университета, Ростов-на-Дону, Россия, 344022; ⁶ООО «ИнтерЛабСервис» Департамента маркетинга, Москва, Россия, 115035; ⁷ФГБУ «Российский центр судебно-медицинской экспертизы» Минздрава России, Москва, Россия, 125284

The evaluation of stability of blood stains immobilized on the FTA cards during their prolonged storage

I.V. KORNIENKO, T.G. FALEEVA, S.S. BACHURIN, D.A. GUDKOV, E.A. GURULEVA, P.L. IVANOV

Branch №2 of the 111th Main State Centre of Forensic Medical and Criminalistic Expertise, Russian Ministry of Defense, Rostov-on-Don, Russia, 344000; Southern Federal University, Rostov-on-Don, Russia, 344090; Rostov State Medical University, Rostov-on-Don, Russia, 344022; Marketing Department, InterLabServis Ltd., Moscow, Russia, 115035; Federal State Budgetary Institution «Russian Centre of Forensic Medical Expertise», Russian Ministry of Health, Moscow, Russia, 125284

Исследовали образцы высушенной крови на FTA-картах после 15-летнего хранения при комнатной температуре. Препараты ДНК получали по протоколу, рекомендованному производителем путем отмывки FTA-реагентом и параллельно путем тотальной экстракции с применением роботизированных станций. Препараты сравнивали по количественному содержанию амплификационно активной ДНК и эффективности типирования STR-локусов хромосомной ДНК. Из 50 FTA-карт с образцами крови, которые хранились при комнатной температуре 15 лет и были обработаны FTA-реагентом, полный генетический профиль удалось получить только в 41 (82%) случае. В 9 (18%) случаях получили неполные генетические профили, в которых наблюдалось отсутствие ПЦР-продуктов, выпадение истинных и включение ложных аллелей. Предположительно причиной подобных неудовлетворительных результатов стало остаточное присутствие ингибиторов активности ДНК-полимеразы, обусловленное неполнотой очистки. При тотальном экстрагировании ДНК с применением роботизированных станций это осложнение было преодолено, из всех 15-летних образцов на FTA-картах удалось получить приемлемый генетический профиль. Тем не менее даже в этих препаратах матричная активность высокомолекулярных STR-локусов оказалась сниженной. Это наблюдение заставляет считать обоснованным сомнение в том, что препараты крови, иммобилизованные на FTA-картах, при их длительном хранении при комнатной температуре не вполне застрахованы от деградации.

Ключевые слова: FTA-карты, стабильность ДНК, типирование ДНК, автоматизированная экстракция ДНК.

We have studied the samples of dry blood immobilized on the FTA cards following a 15-year period of their storage at room temperature. The DNA preparations were obtained based on the protocol recommended by the manufacturer including washing up with the FTA reactant and in parallel by means of complete extraction with the use of robotic stations. The preparations were compared in terms of the content of amplificationally active DNA and the effectiveness of typing STR-loci of chromosomal DNA. The complete genetic profile was derived only from 41 (82%) of the 50 FTA cards with immobilized blood samples available for the investigation that had been treated with the FTA reactant and stored during 15 years at room temperature. In 9 (18%) cases, incomplete genetic profiles were obtained that were characterized by the absence of PCR-products, as well as missing of true alleles and the presence of pseudoalleles. Such poor results are supposed to be attributable to the occurrence of the residual inhibitors of DNA-polymerase activity due to the incomplete purification of the samples. This disadvantage was overcome by the application of robotic stations for the total DNA extraction. This approach made it possible to obtain the acceptable genetic profiles for each blood samples stored at the FTA cards during 15 years. Nevertheless, even these preparations exhibited the reduced matrix activity of high molecular weight SRT-loci. This observation suggests that long-term storage of dry blood samples on FTA cards at room temperature does not guarantee the absence of degradation of their DNA.

Key words: FTA cards, DNA stability, DNA typing, automated extraction of DNA.