Отравления псилоцибинсодержащими грибами

КОСТЫРКО
Татьяна Анатольевна

ОТРАВЛЕНИЯ ПСИЛОЦИБИНСОДЕРЖАЩИМИ ГРИБАМИ

(клинико-экспериментальное исследование)

14.00.20 - токсикология
14.00.24 - судебная медицина

Автореферат
диссертации на соискание ученой
степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург
1998

Работа выполнена в Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им. акад. И.П. Павлова и в Институте токсикологии МЗ РФ.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Р.В. Бабаханян

доктор медицинских наук, профессор А.Н. Петров

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор С.И. Локтионов

доктор медицинских наук, профессор В.Д. Исаков

Ведущее учреждение

Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время стремительный рост наркомании во многих странах мира превращается в серьёзную социальную проблему. Одним из распространённых видов наркотических средств растительного происхождения являются псилоцибинсодержащие грибы, широкое использование которых привело к увеличению количества судебно-медицинских, наркологических и судебно-химических экспертиз, связанных с фактом их употребления.

В Федеральной целевой программе "Комплексные меры противодействия злоупотреблению наркотиками и их незаконному обороту за 1995-1997 годы", принятой Правительством РФ 3 июня 1995 года, подчёркивается, что стабильно увеличивается количество лиц, употребляющих наркотики. Социологические исследования показывают, что их число в настоящее время составляет более 1,5 млн. человек, причём к 2000 году прогнозируется двукратное увеличение количества таких лиц.

Особую обеспокоенность вызывает распространённость наркомании среди молодёжи. Почти 2/3 потребителей наркотиков – лица в возрасте до 30 лет; расширяется детская и подростковая наркомания (С.А. Роганов, 1997).

10 декабря 1997 года Государственной Думой РФ был принят Федеральный закон "О наркотических средствах и психотропных веществах" (Российская газета, 1998), который устанавливает правовые основы государственной политики в сфере оборота наркотических средств, психотропных веществ и в области противодействия их незаконного оборота в целях охраны здоровья граждан, государственной и общественной безопасности.

В настоящее время в России и за рубежом всё чаще используются грибы, способные продуцировать галлюциногены - псилоцибин и псилоцин. Для северо-западного региона РФ эти грибы стали одними из самых распространенных наркотических средств растительного происхождения, используемых для достижения наркотического эффекта.

В последние годы изъятия псилоцибинсодержащих грибов из нелегального оборота в Санкт-Петербурге и Ленинградской области составляют 42% от общего числа изъятий наркотических средств растительного происхождения. Учитывая особую опасность псилоцибина и псилоцина, которые отнесены Единой конвенцией ООН по наркотическим и психотропным веществам к наркотическим средствам, а также тот факт, что псилоцибинсодержащие грибы уже с середины 80-х годов отнесены к наркотикам в ряде скандинавских стран, экспертно-криминалистическое Управление ГУВД Санкт-Петербурга и Ленинградской области, в связи с увеличением случаев их употребления, обратилось в Постоянный комитет по контролю наркотиков РФ с предложением о включении данных грибов в список наркотических средств и с декабря 1994 года грибы, содержащие псилоцибин и (или) псилоцин, были отнесены к наркотикам (Б.В. Фёдоров с соавт., 1997).

Следует отметить, что немногочисленные экспериментальные и клинические исследования в области изучения отравлений различными видами псилоцибин-продуцирующих грибов показали, что для данного вида отравлений характерно значительное поражение центральной нервной системы, выражающееся в различного рода нарушениях ее функционального состояния (Г. Могош, 1984; Г.И. Каплан, Б.Дж. Сэдок, 1994; L.R. Goldfrank et al., 1994 и др.). Под действием галлюциногенных грибов резко повышается внушаемость, сильно изменяется ощущение самого себя, иногда достигающее степени деперсонализации. После приема этих грибов нередко отмечается повышенная агрессивность, внушаемость, возможность получения случайных травм и совершения суицидных попыток, что несомненно, приводит к отрицательным социальным последствиям.

Помимо различного рода нарушений состояния ЦНС, в клинической практике отравлений псилоцибинсодержащими грибами описаны и различные функциональные нарушения внутренних органов, в частности почек (E. Raff et al., 1992).

Широкое распространение псилоцибинсодержащих грибов в природе, а так же возможность культивирования, привели к тому, что в последнее время регистрируется достаточно большое количество острых несмертельных отравлений этими грибами. По многим из случаев их применения возникает необходимость проведения судебно-медицинских экспертиз по определению факта употребления псилоцибинсодержащих грибов, тяжести причиненного вреда здоровью, а также проведение судебно-химической и наркологической экспертизы.

В практике клинической токсикологии, наркологии и психиатрии разработаны некоторые критерии распознавания отравлений псилоцибинсодержащими грибами, установлены механизмы их токсического действия на организм человека, а также известны последствия их применения, особенно на психическую деятельность. Однако до настоящего времени не разработаны критерии судебно-медицинской диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами, в частности, нет сведений о морфофункциональных изменениях внутренних органов, отсутствуют химические методы определения основного наркотического алкалоида псилоцибинсодержащих грибов - псилоцибина в крови, что вызывает определенные трудности при проведении судебно-медицинской экспертизы в случаях отравлений этими грибами. Всё изложенное свидетельствует об актуальности проблемы отравлений псилоцибинсодержащими грибами как для судебных медиков при производстве экспертиз по поводу отравлений этими грибами, так и для врачей-клиницистов при диагностике и лечении таких отравлений. Этим обоснована целесообразность и необходимость проведения настоящего исследования, определены его цели и задачи.

Цель исследования

Цель работы заключается в разработке критериев судебно-медицинской диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

Задачи исследования

Основными задачами исследования являлись:

1. Установление обстоятельств, частоты, динамики и характерных особенностей клинической картины острых несмертельных отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

2. Изучение влияния псилоцибин-продуцирующих грибов на поведение экспериментальных животных.

3. Изучение гистологических и количественных гистохимических изменений внутренних органов экспериментальных животных при моделировании отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

4. Разработка и оценка методики количественного определения основного химического агента псилоцибин-продуцирующих грибов - псилоцибина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в крови экспериментальных животных при моделировании отравлений этими грибами.

5. Разработка практических рекомендаций для судебно-медицинских экспертов по совершенствованию диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

Научная новизна

Научная новизна результатов проведённых исследований заключается в следующем:

- установлены обстоятельства, частота, динамика и клиническая картина в случаях острых несмертельных отравлений псилоцибинсодержащими грибами по данным архивного материала НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе за 1992-1997 гг.;

- изучено влияние псилоцибин-продуцирующих грибов на спонтанное и агрессивное поведение экспериментальных животных;

- выявлены характер морфологических изменений внутренних органов экспериментальных животных и особенности динамики ферментативных процессов в коре головного мозга, печени и почках при моделировании отравлений псилоцибинсодержащими грибами;

- впервые разработан вариант количественного определения псилоцибина в крови экспериментальных животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- разработаны практические рекомендации по совершенствованию судебно-медицинской диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

Практическая ценность

На основании проведённых исследований разработаны практические рекомендации по совершенствованию диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами. Выявлены особенности спонтанного и агрессивного поведения экспериментальных животных в условиях моделирования отравления псилоцибин-продуцирующими грибами. Изучена динамика и особенности клинической картины острых несмертельных отравлений этими грибами, установлены гистологические и количественные гистохимические изменения внутренних органов экспериментальных животных при отравлении псилоцибинсодержащими грибами. Установлена возможность определения основного наркотического алкалоида псилоцибинсодержащих грибов — псилоцибина в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Результаты исследования внедрены в практику работы Института токсикологии МЗ РФ, Ленинградского областного бюро судебно-медицинской экспертизы, а так же в учебный процесс кафедр судебной медицины и правоведения Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова и Военно-медицинской академии.

Положения, выносимые на защиту

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Судебно-медицинские критерии диагностики отравлений псилоцибин-продуцирующими грибами.

2. Особенности и степень морфофункциональных изменений внутренних органов экспериментальных животных при моделировании отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

3. Способ диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии по определению псилоцибина в плазме крови.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на межвузовском учебно-методическом семинаре "Актуальные вопросы судебной медицины и криминалистики" (1996), на международном семинаре "Пробоподготовка и исследования токсических веществ в биологических пробах инструментальными методами анализа" (1996), на 532 (1998) пленарном заседании Санкт-Петербургского общества судебных медиков, на межвузовской научной студенческой конференции, посвящённой 200-летию Военно-медицинской академии (1998), на XVIII Международном Конгрессе Европейской Ассоциации клинических токсикологов (ЕАРССТ) (Цюрих, Швейцария, 1998) и на межкафедральном совещании кафедры судебной медицины и правоведения Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова (1998).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 11 статей, 1 учебно-методическое пособие, 1 монография.

Структура и объём диссертации

Работа состоит из следующих разделов: введения, шести глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста. Текст иллюстрирован 14 таблицами и 42 рисунками. Указатель литературы

включает 41 отечественных и 74 иностранных источника.

Объекты и методы исследования

Для решения поставленных задач нами проведено изучение 82 медицинских карт стационарных больных, находившихся на лечении по поводу острых несмертельных отравлений грибами в НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе. Изучение историй болезни проводилось по специальным картам, в которых отмечались пол, возраст, дата и время поступления в стационар, профессия, диагноз заключительный клинический, цель отравления, путь введения грибов, количество принятых грибов, жалобы, объективные клинические симптомы, срок пребывания в стационаре, проведенное лечение, результаты лабораторных методов исследования.

Для проведения экспериментальных исследований при моделировании отравления использовались псилоцибинсодержащие грибы вида Psilocybe semilanceata, собранные на территории Ленинградской области.

Материалом для создания экспериментальной модели интоксикации

псилоцибинсодержащими грибами, а также для выяснения морфологических и гистохимических изменений во внутренних органах при отравлении

этими грибами послужили 350 белых беспородных крыс обоего пола массой от 150 до 300 грамм.

Всего выполнено 1158 морфологических исследований, 869 количественных гистохимических, 156 количественных химических исследований растительного сырья и 85 количественных химических исследований плазмы крови экспериментальных животных, затравленных взвесью псилоцибинсодержащих грибов с целью определения основного наркотического алкалоида этих грибов - псилоцибина.

Полученные числовые показатели подвергались статистической

обработке.

Результаты исследования

Статистическая разработка архивного материала НИИ скорой помощи им. И.И. Джанелидзе показала, что за анализируемое время отмечается общая тенденция увеличения случаев отравлений псилоцибинсодержащими грибами. Так, если в 1992 году на лечении по поводу острых несмертельных отравлений этими грибами находилось 2, то в 1997 году их количество достигло 23 пострадавших.

В 73,1% изучаемых случаев грибы употреблялись с целью наркотического опьянения и только в 3 (3,6%) случаях с целью совершения суицидальной попытки, в остальных наблюдениях цель приёма осталась неизвестной. Из 82 пострадавших было 68 (82,9%) лиц мужского пола и 14 (17,1%) женского. Соотношение между лицами мужского и женского пола составило 5:1.

Следует отметить, что 72% потерпевших составляли возрастную группу от 11 до 20 лет и 20,7% - возрастную группу от 21 до 30 лет, то есть наибольшее число острых отравлений приходилось на молодой и наиболее социально активный возраст.

Анализ профессиональной принадлежности потерпевших выявил, что 24,3% из них являлись неработающими, 13,4% — учащимися профессионально-технических училищ и средних учебных заведений, 9,7% - рабочими, 6,0% - студентами, 1,2% - инженерно-техническими работниками. В остальных проанализированных случаях данные отсутствовали.

В большинстве случаев псилоцибинсодержащие грибы употреблялись перорально в сыром или высушенном виде, в единичных случаях вводились внутривенно в виде отвара. Количество принятых грибов составляло от 3-4 до 50 штук. В одном случае по анамнестическим данным количество принятых внутрь грибов составило 125 штук.

Наиболее часто потерпевшие доставлялись в стационар в вечернее и ночное время суток. Большинство случаев отравлений грибами происходило в четверг и в воскресенье. Отравления псилоцибинсодержащими грибами имели сезонный характер. Во всех изучаемых случаях отравления происходили в летне-осенний период.

При поступлении в стационар пострадавшие предъявляли жалобы на галлюцинации - 36 (43,9%) наблюдений, слабость - 16 (19,5%) случаев, тревожность — 16 (19,5%) случаев. В 10 (12,2%) случаев потерпевшие находились в состоянии психомоторного возбуждения, в 8 случаях (9,7%) - у них отмечалось спутанное сознание. У 12 (14,6%) потерпевших отмечалась тошнота, а у 6 (7,3%) — рвота. В единичных случаях потерпевшие предъявляли жалобы на сухость во рту, сердцебиение, озноб, горечь во рту, потоотделение, боли в животе, нарушение зрения, нарушение речи.

Из объективной клинической симптоматики в 36 (43,9%) случаев отмечался мидриаз, в 2 (2,4%) - миоз. В 36 (43,9%) случаев отмечалась тахикардия, в 25 (30,4%) - жесткое дыхание, в 17 (20,7%) — приглушенность тонов сердца, в 10 (12,2%) — повышение артериального давления. Изменения наружных кожных покровов проявлялись их сухостью – в 9 (15,2%) случаев, в 2 (2,4%) - отмечалась гиперемия лица.

Во всех случаях в стационаре проводилось химико-токсикологическое исследование крови и мочи у пострадавших на содержание этанола. При этом во всех наблюдениях результат анализа был отрицательный. В одном случае в моче были обнаружены производные бензодиазепина и в одном случае — пиразолона и атропиноподобные соединения.

Ни в одном из проанализированных случаев не проводилось химикотоксикологическое исследование биологических жидкостей организма на предмет определения основных химических агентов, содержащихся в грибах. Всем потерпевшим проводилась патогенетическая и симптоматическая дезинтоксикационная терапия, которая приводила к быстрому обратному развитию клинической симптоматики.

Срок лечения в стационаре составил от 1 до 2 суток. В 42,3% случаев потерпевшим был поставлен диагноз: "Острое отравление грибами с целью наркотического опьянения". В 28,0% случаев - "Отравление псилоцибинсодержащими грибами". Причем, следует отметить, что этот клинический диагноз ставился только начиная с 1995 года, что возможно связано с появлением публикаций о псилоцибинсодержащих грибах в отечественной научной и публицистической литературе. В 1992-1994 гг. таким потерпевшим ставились диагнозы: "Острое отравление грибами, содержащими LSD", "Передозировка галлюциногенов", "Отравление грибами. Делирий", "Острое отравление грибами. Галлю-цинаторно-параноидный синдром", "Отравление грибами психотомиметического действия" и др.

Таким образом, полученные данные показывают, что, начиная с 1992

года, отмечается увеличение случаев острых несмертельных отравлений псилоцибинсодержащими грибами. Чаще всего, грибы, продуцирующие наркотические алкалоиды псилоцибин и псилоцин, употребляются с целью наркотического опьянения, причём наибольшее число потерпевших составляют молодые люди в возрасте от 11 до 20 лет. Среди потерпевших значительно преобладают лица мужского пола. Наибольшее число случаев острых несмертельных отравлений грибами происходило в летне-осенний период. Пострадавшие наиболее часто предъявляли жалобы на галлюцинации, спутанное сознание, тревожность, тошноту, рвоту.

При первичном осмотре потерпевших определялся мидриаз, тахикардия, приглушённость тонов сердца, жесткое дыхание, повышение артериального давления. Клиническая картина в большинстве случаев была типичной для отравлений галлюциногенными препаратами и включала в себя как симптомы поражения ЦНС - галлюцинации, эйфорию и др., так и вегетативные расстройства - мидриаз, рвоту, тахикардию, гиперемию лица, потоотделение, неотчетливое зрение, озноб. Диагноз отравления ставился на основании анамнестических данных, характерных жалоб и объективной клинической симптоматики и не подтверждался химико-токсикологическим исследованием биологических жидкостей на предмет обнаружения наркотических алкалоидов - псилоцибина и псилоцина.

Возможно, разнообразие клинических диагнозов связано с отсутствием химико-токсикологического исследования биологических жидкостей на предмет обнаружения основного наркотического алкалоида псилоцибинсодержащих грибов - псилоцибина.

Проведённый анализ показал, что имеются трудности в диагностике острых несмертельных отравлений псилоцибинсодержащими грибами в частности, методически не разработано и не проводится химико-токсикологическое исследование биологических жидкостей по определению псилоцибина, что является отрицательным моментом при проведении судебно-медицинской диагностики отравлений этими грибами.

Исследования биологической активности грибов включали в себя определение средней эффективной дозы (ЕДзо), изучение влияния нарушение памяти, на спонтанное и агрессивное поведение животных и ректальную температуру.

Результаты проведённых исследований показали, что, введение экстракта псилоцибинсодержащих грибов экспериментальным животным не изменяет процессы формирования и сохранения памяти, не нарушает реакции на внешние и болевые раздражители, вызывает увеличение двигательной активности и появление спонтанной и индуцированной агрессивной реакции, выражавшейся в виде характерной "бойцовской стойки", которая появлялась через 10-15 мин после введения и сохранялась в течение 3-х часов наблюдения. При введении грибов в дозе 750 мг/кг спонтанная агрессивная реакция отмечалась у 50% экспериментальных животных, что дало основание считать ее средней эффективной дозой (ЕДзо).

На первом этапе экспериментальных исследований проводилось определение количественного содержания псилоцибина в образцах грибов вида Psilocybe semilanceata, которые использовались при моделировании отравлений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Содержание псилоцибина в них составило 1,4% от сухого веса.

Определению псилоцибина в плазме крови экспериментальных животных, затравленных различными дозами псилоцибинсодержащих грибов, предшествовала разработка методики количественного определения стандартного образца псилоцибина добавленного в плазму крови экспериментальных животных in vitro.

На втором этапе проводилось определение псилоцибина в плазме крови экспериментальных животных, затравленных псилоцибинсодержащими грибами в дозах 250, 500, 1000 мг/кг. Для обеспечения достоверности результатов проводилось трехкратное исследование каждой пробы плазмы. В качестве контроля использовалась плазма крови крыс интактных лабораторных животных. Идентификацию индивидуальности хроматографического пика псилоцибина в плазме крови экспериментальных животных проводили по времени удерживания и спектральным характеристикам сравнения со стандартным образцом.

В итоге проведенных исследований была разработана методика количественного определения псилоцибина в плазме крови с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Такая методика может широко использоваться в судебно-медицинской практике для доказательства факта употребления псилоцибинсодержащих грибов, а также в клинической токсикологии при диагностике острых несмертельных отравлений этими грибами.

Оценка морфологических и количественных гистохимических изменений внутренних органов экспериментальных животных при моделировании отравлений псилоцибинсодержащими грибами проводилась после однократной затравки экспериментальных животных взвесью грибов в дозе 1500 мг/кг в течение 3 дней.

При микроскопическом исследовании срезов головного мозга отмечалось выраженное полнокровие сосудов под паутинной оболочкой и в ткани мозга, а также явления гидратации мозга. Помимо этого отмечались дистрофические изменения невроцитов, при этом ряд из них принимал закругленную форму, в некоторых ядро было светлым и имело нечеткие контуры. В ряде невроцитов ядра были пикнотичны и слегка гиперхромны, а также отмечались явления хроматолиза, что особенно было выражено в зоне аммонова рога.

Микроскопические изменения миокарда состояли в резко выраженном венозно-капиллярном полнокровии с формированием в просветах капилляров эритроцитарных тромбов в виде "монетных столбиков". Помимо этого, в миокарде обнаруживались дистрофические изменения в виде диспротеиноза, который проявлялся неразличимостью поперечной исчерченности фибриллярных структур, а также неравномерностью окраски и смазанностью контуров между отдельными кардиомиоцитами.

Микроскопическая картина срезов ткани легкого была достаточно однотипна и проявлялась в панацинарном, а местами и центроацинарном эмфизематозном расширении некоторых групп альвеол в пределах ацинуса. Альвеолярные перегородки в них были истончены. На фоне умеренного полнокровия сосудов межальвеолярных перегородок имели место очаговые внутриальвеолярные кровоизлияния и кровоизлияния в разволокненной строме. Постоянным признаком, отмеченным во всех случаях, был распространенный спазм мелких бронхов, выражающийся звездчатостью просветов, а также фестончатостью контуров слизистой оболочки и сокращением гладкомышечных волокон стенки. Морфологические изменения печени носили характер резко выраженного полнокровия, в виде переполнения центральных вен и внутридольковых синусоидов.

В части случаев отмечалась зернистая дистрофия гепатоцитов и наличие вакуолей в их цитоплазме. Это сопровождалось дискомплексацией печеночных пластин, что наиболее четко выявлялось в центральных отделах долек. Наблюдалась мозаичность характера жировой дистрофии гепатоцитов в виде пылевидных и мелкокапельных жировых включений, а также имелось расширение пространств Диссе.

Отличительной особенностью микроскопических изменений почек была мозаичность диспротеиноза, что придавало просветам некоторых проксимальных и дистальных канальцев звездчатую форму. В эпителии проксимальных канальцев отмечалась зернистая и вакуольная дистрофия. Жировая дистрофия чаще всего определялась в эпителии проксимальных канальцев в виде характерных мелких и пылевидных включений располагающихся субнуклеарно. В некоторых случаях в гломерулярном аппарате выявлялась пролиферация мезангиальных клеток и увеличение в объеме мезангиального матрикса. При этом отмечалось расширение капсул некоторых клубочков, в которых определялся серозный экссудат.

В ткани надпочечников выявлялись выраженные сосудистые изменения в виде резкого полнокровия мозгового слоя и расширения просветов

капилляров. При гистологическом исследовании стенки желудка и тонкой

кишки отмечались признаки очаговой перестройки желёз в виде энтерелизации и лимфогистиоцитарной инфильтрации слизистой оболочки, а также явления выраженного полнокровия сосудов слизистой оболочки.

Таким образом, при обзорном гистологическом исследовании органов экспериментальных животных в условиях моделирования отравлений псилоцибинсодержащими грибами выявлялись наибольшие изменения в ткани головного мозга, печени и почек, которые проявлялись в виде выраженных гемомикроциркуляторных расстройств и внутриклеточных дистрофий. Все обнаруженные морфологические изменения носят неспецифический характер, однако, в совокупности с другими данными они достаточно четко характеризуют данный вид отравлений.

Проведено гисто-энзимологическое исследование коры лобной доли

головного мозга, печени и почек с цитоспектрофотометрической оценкой активности ферментов, характеризующих энергетические процессы (НАД-

Н2, ЛДГ, СДГ), а также специфических ферментов метаболизма нервной ткани (ХЭ, МАО).

Как показали результаты проведённых исследований, изменения активности ферментов во всех исследованных зонах коры головного мозга имели однонаправленный характер.

Так, отравление псилоцибинсодержащими грибами вызывало достоверное повышение активности ЛДГ, по сравнению с контролем. Активность ферментов энергообеспечения (НАД-Н2, СДГ), напротив, снижалась, что указывает на переход энергообеспечения нейроцитов на анаэробный путь.

Изменения активности МАО и ХЭ имели противоположную направленность. Так, активность МАО во всех исследованных зонах коры снижалась, а активность ХЭ наоборот повышалась.

Количественный гистоэнзимологический анализ нейроцитов коры лобной доли головного мозга показал, что отравление псилоцибинсодержащими грибами приводит к комплексному нарушению метаболизма нервных клеток, вследствие нарушения динамики ферментативных процессов, связанных, как с митохондриальными, так и с цитоплазматическими процессами в цикле Кребса и системе анаэробного гликолиза, а также существенно изменяет метаболизм моноаминов и ацетилхолинэстеразы.

При анализе гистохимических реакций установлено, что изменения активности ферментов печени и почек имели однонаправленный характер. Как и в нейроцитах коры лобной доли головного мозга отмечено достоверное повышение, активности ЛДГ в эпителии проксимальных и дистальных канальцев почек, а также в гепатоцитах вокруг центральной вены и вокруг триады, по сравнению с контролем. Повышение активности ЛДГ сопровождалось резким снижением активности СДГ и НАД-Н2, что указывает на активацию процессов анаэробного гликолиза. При моделировании отравлений псилоцибинсодержащими грибами изменялась и активность фермента трансэндотелиального транспорта - 5'НУК. Это сопровождалось повышением активности КФ–маркера повышения активности лизосомального аппарата в эндотелии микрососудов печени и почек. Выявленные изменения динамики ферментативных процессов в нефротелии проксимальных и дистальных канальцев, а также гепатоцитах, позволяют считать, что, несмотря на отсутствие прямого повреждающего эффекта наркотических алкалоидов псилоцибинсодержащих грибов, происходит снижение интенсивности обмена в цикле трикарбоновых кислот, а также активация внутриклеточного гидролиза.

Снижение активности ЩФ в апикальных отделах цитоплазмы эпителия проксимальных и дистальных канальцев приводит к блокаде реабсорбции белка. Гистоэнзимологический анализ показал, что отравление псилоцибинсодержащими грибами значительно изменяет метаболизм нефротелия и гепатоцитов, а так же выявляет некоторые особенности динамики ферментативных процессов. Активация лизосомального аппарата, в данном случае, скорее всего, связана с повреждением внутриклеточных мембран и структур, что в дальнейшем приводит к дистрофии нефротелия проксимальных и дистальных канальцев, к которой присоединяются пролиферативные изменения в почечных клубочках, что, очевидно, может привести к нарушению функции почек. Известно, что цикл Кребса через фумаровую кислоту связан с циклом синтеза мочевины. На этом основании можно предположить, что снижение активности ключевого фермента цикла трикарбоновых кислот, при одновременной активации ЛДГ может

свидетельствовать о нарушении синтеза мочевины.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что отравление этими грибами ведёт к комплексному нарушению внутриклеточного метаболизма нефротелия проксимальных и дистальных канальцев почек и гепатоцитов, а так же функционального состояния эндотелия микроциркуляторного русла сосудов стромы.

Таким образом, количественный гистохимический анализ выявил существенные изменения активности изучаемых ферментов не только в ткани головного мозга, но и в тканях печени и почек, которые связаны с непосредственным влиянием наркотических алкалоидов псилоцибинсодержащих грибов, как на митохондриальные, так и на цитоплазматические окислительно-восстановительные процессы, связанные с циклом Кребса, пентозофосфатным шунтом и системой анаэробного гликолиза.

Полученные данные экспериментальных исследований могут быть использованы в судебно-медицинской практике для диагностики от равлений псилоцибинсодержащими грибами.

ВЫВОДЫ

1. Установлены обстоятельства, частота, динамика, клинические проявления острых несмертельных отравлений псилоцибинсодержащими грибами.

2. При моделировании отравлений псилоцибин-продуцирующими грибами у экспериментальных животных не изменяются процессы формирования и сохранения памяти, не нарушается реакция на внешние раздражители, отмечается увеличение двигательной активности, а также появление спонтанной и индуцированной агрессивной реакции с укорочением ее латентного периода.

3. Морфологические изменения внутренних органов экспериментальных животных в условиях моделирования отравления псилоцибинсодержащими грибами заключаются в дистрофических изменениях головного мозга, печени, почек, миокарда и гемомикроциркуляторных расстройствах, а также пролиферативных процессах в почечных клубочках.

4. Отравление псилоцибинсодержащими грибами изменяет активность как митохондриальных, так и цитоплазматических окислительно-восстановительных ферментов, что приводит к комплексному нарушению внутриклеточного метаболизма нейроцитов, нефротелия проксимальных и дистальных канальцев почек и гепатоцитов, а также функционального состояния эндотелия микроциркуляторного русла сосудов стромы.

5. Выявленные морфофункциональные изменения внутренних органов при отравлении псилоцибин-продуцирующими грибами имеют неспецифический характер, однако, в комплексе с результатами других лабораторных исследований, они могут быть использованы при диагностике таких отравлений.

Впервые для судебно-медицинской и клинической диагностики разработана методика количественного определения основного наркотического алкалоида псилоцибинсодержащих грибов - псилоцибина в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

7. Алгоритм судебно-медицинской диагностики в случаях отравлений псилоцибинсодержащими грибами представляет собой комплекс, включающий изучение клинических проявлений интоксикации, проведение морфологических, микологических исследований, причём решающее значение имеет химическое исследование растительного сырья и биологических объектов.

Практические рекомендации

При осмотре места происшествия, в случаях обнаружения объектов подозрительных на наркотикосодержащие средства растительного происхождения (свежие и высушенные грибы или их части, измельченные растительные вещества и др.), необходимо обратить внимание на подробное описание этих объектов, а также на изъятие их для по следующего морфологического (микологического) и химико-токсикологического исследования. Идентификация отдельного вида псилоцибинсодержащих грибов или смеси свежих или высушенных грибов проводится с помощью выявления характерных макро- и микроскопических морфологических признаков плодовых тел грибов и спор. Количественное содержание наркотических алкалоидов определяется при химико-токсикологическом или криминалистическом исследовании растительного сырья. При проведении судебно-медицинской экспертизы для установления факта наркотического опьянения или определения тяжести вреда здоровью в случаях употребления псилоцибинсодержащих грибов ориентирующее значение могут иметь следующие характерные жалобы пострадавших и объективные клинические симптомы: слуховые и зрительные галлюцинации, тревожность, дезориентация в пространстве, деперсонализация, психомоторное возбуждение, нарушение сознания, мидриаз, тахикардия. Для установления факта употребления псилоцибинсодержащих грибов необходимо производить забор крови у пострадавших для определения основного наркотического алкалоида этих грибов — псилоцибина. При гистологическом исследовании в случаях подозрения на отравление псилоцибинсодержащими грибами наиболее характерными изменениями являются: выраженное полнокровие сосудов и ткани головного мозга, дистрофические изменения нейроцитов, полнокровие и диспротеиноз миокарда, эмфизематозное расширение альвеол и распространенный спазм мелких бронхов, полнокровие центральных вен и внутридольковых синусоидов в печени, дистрофические изменения гепато-цитов, диспротеиноз эпителия проксимальных и дистальных канальцев почек, пролиферация мезангиальных клеток и увеличение в объеме мезангиального матрикса. Комплекс морфологических исследований должен включать проведение гистоэнзимологических исследований коры лобной доли головного мозга, печени и почек с последующей количественной цитоспектрофотометрической оценкой результатов. Для судебно-медицинской диагностики отравлений псилоцибинсодержащими грибами решающее значение имеют результаты судебно-химического исследования

по количественному определению псилоцибина в крови пострадавших.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Судебно-химический анализ растительного сырья, содержащего псилоцибин //Актуальные вопросы теории и практики судебной медицины, - Пб, 1996. - С. 18-19 (соавт. С.В. Кораблева, Н.М. Колесник).

2. Отравления псилоцибинсодержащими грибами - новая проблема в судебно-медицинской и криминалистической практике// Проблемы практики судебной медицины. - СПб, 1997. - С.39-40 (соавт. Р.В. Бабаханян, Е.С. Бушуев, С.П. Казанков, К.С. Кузьминых).

3. Токсикологические аспекты отравлений псилоцибинсодержащими грибами //Судебно-медицинская экспертиза. - 1997. - № 3. - С.20-22 (соавт. Р.В. Бабаханян, Е.С. Бушуев, С.П. Казанков).

4. Морфологические изменения в органах экспериментальных животных при интоксикации псилоцибинсодержащими грибами //Фундаментальные и прикладные аспекты современной морфологии. - СПб, 1997. - Т. 1. - с. 132-134 (соавт. Р.В. Бабаханян, А.Е. Сафрай, О.Д. Ягмуров).

5. Влияние грибов Psilocybe semilanceata на спонтанное поведение экспериментальных животных// Теория и практика судебной медицины. Труды Петербургского научного общества судебных медиков. Выпуск 1. - СПб, 1997. -С. 76-78 (соавт. М.К. Шевчук).

6. Анализ случаев острых несмертельных отравлений грибами// Тезисы работ по судебной медицине молодых ученых ВУЗов Санкт-Петербурга. - Пб, 1997.-С. 12-13.

7. К вопросу о создании экспериментальной модели острой интоксикации псилоцибинсодержащими грибами// Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии. - СПб, 1997. - С. 68.

8. Функциональная морфология проксимальных и дистальных канальцев почек при моделировании хронической интоксикации псилоцибинсодержащими грибами// Нефрология. - СПб, 1997. - Т. 2. - № 2. - С. 85-87 (соавт. Р.В. Бабаханян, А.Е. Сафрай, О.Д. Ягмуров).

9. Histological, histochemical and immunomorphologic findings during poisoning by psilocybine-containing mushrooms in rodents //European Association of Poisons Centres and Clinical lexicologists XVIII International Congress. - Zurich, 1998. - P. 60.

10. Морфофункциональная характеристика коры головного мозга при отравлении в эксперименте псилоцибинсодержащими грибами //Теория и практика судебной медицины. Труды Петербургского научного общества судебных медиков. Выпуск 2. - СПб, 1998. - С. 110-111 (соавт. Г.В. Иванова).

11. Морфофункциональная характеристика изменений печени при отравлении псилоцибинсодержащими грибами в эксперименте// Тезисы работ по судебной медицине молодых ученых ВУЗов Санкт-Петербурга. - СПб, 1998. - С. 20-21.

12. Псилоцибинсодержащие грибы (учебно-методическое пособие). - СПб: СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова, 1998. -23 с. (соавт. Р.В. Бабаханян, Е.С. Бушуев, С.П. Казанков и др.).

13. Псилоцибинсодержащие грибы (криминалистическое и судебно-медицинское исследование). - СПб: СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова, 1998. - 107 с. (соавт. Р.В. Бабаханян, Е.С. Бушуев, С.П. Казанков и др.).