К определению антигенов системы AB0 в волосах. Сообщение II. Обнаружение антигенов системы AB0 после воздействия на волосы ультразвуком

До настоящего времени нет единого мнения по вопросу о наличии в волосах антигенов системы АВ0. Большинство исследователей (Krefft; Tesar; Thoma; Г.А. Прейсман; Р.Г. Геньбом и Н.П. Корнеева; Л.Г. Бирюкова; Fiori; Pozzato и Molla; Steinhauser; Ю.В. Ванюшина; McWright; Н.Н. Ачеркан; Akaishi) на основании экспериментов считает присутствие групповых веществ несомненным. Однако отдельные специалисты (Yosida; Berg; Scheibe и Prokop; Szulman; Grflnewald; Vogt, Gibb и Eder) высказываются в этом отношении отрицательно.

При исследовании групповой принадлежности волос основную трудность создают препятствия, возникающие при контакте антигенов волос с антителами сывороток и обусловленные характером объекта (ороговевшая ткань). Мы попытались устранить эти препятствия, воздействуя на волосы ультразвуком.

Известно, что ультразвук деполимеризует макромолекулы (И.Е. Эльпинер; Grabar и Prudhomme; М.И. Гуревич; Hodge и Schmitt; Н.Ф. Свадковская, и др.), в частности кератины (Meirowski), а также нарушает и разрыхляет чешуйчатую структуру поверхности шерсти (Alexander; Rath и Merck), кутикулу и отчасти кортикальный слой волос человека (Bradbury).

Многие авторы указывают, что ультразвук повышает проницаемость мембран (Frenzel, Hinsberg и Schultes; Lehmann; Lehmann и Becher; И. E. Эльпинер, 1954, 1956, 1963, 1965; Глигорjевиh, Груиh, Jaнковиh, и др.). Кроме того, под действием ультразвука каждая отдельная клетка разрушается быстрее, чем содержащиеся в ней биологически активные вещества, в частности антигены (И.Е. Эльпинер, 1950, 1951, 1954, 1965; С.С. Дяченко и Е.П. Бернасовская).

Thoma, Steinhauser, McWright определили групповую принадлежность ногтей, обработанных ультразвуком.

Мы «озвучивали» волосы в лаборатории ультразвука Института биологической физики Академии наук СССР на пьезокварцевой установке (с водяной ванной), генерирующей ультразвук частотой 800 кгц и интенсивностью 15 вт/см².

Волосы отмывали горячей водой с мылом, трижды промывали горячей водой, обезжиривали в 2 порциях эфира (по 1 часу в каждой), просушивали фильтровальной бумагой, нарезали на кусочки длиной 0, 3—0, 5 см и подвергали действию ультразвука в конической колбочке с физиологическим раствором. Затем физиологический раствор удаляли, волосы просушивали фильтровальной бумагой и проводили абсорбцию агглютининов в количественной модификации.

Оптимальный срок «озвучивания» в большинстве случаев составлял 45 мин., а для наиболее толстых и жестких волос — 1 час. Сокращение или увеличение этого срока было неэффективным: в первом случае не достигались максимальные показатели специфической абсорбции, во втором степень абсорбции постепенно снижалась до нуля.

Контрольная реакция абсорбции агглютининов с теми же образцами волос, подвергшимися всем описанным воздействиям, кроме «озвучивания», всегда давала отрицательный результат.

Исследовали волосы 103 человек: 29 группы 0, 41 группы А, 23 группы В и 10 группы АВ, в том числе «слабых выделителей» и «невыделителей». Из них 6 относились к группе 0, 4 — к группе А, 5 — к группе В и 1 — к группе АВ.

Абсорбцию агглютининов, кроме изосывороток β-, а- и гетероиммунной козьей сыворотки анти-0(Н), проводили экстрактом из семян ракитника сидячелистного (Cytisus sessilifolius), содержащим фитагглютинин анти-Н (все реагенты в титре 1:16). Исследовали навески волос по 50, 25, 10, 5, 2 и 1 мг, которым соответствовали объемы сывороток и экстракта: 50 мг — 0, 3 мл; 25 мг — 0, 15 мл; 10 и 5 мг — 0, 1 мл; 2 и 1 мг — 0, 06 мл. Абсорбция длилась 24 часа при температуре 4°. Результаты учитывали титрованием исходных и абсорбированных сывороток и экстракта в смежных разведениях (развернутое титрование), реагенты разводили в пробирках, агглютинацию проводили на фарфоровых тарелках, наблюдение вели с лупой при ярком электрическом освещении.

Антигены 0, А или В считали обнаруженными, если снижение титра соответствующей сыворотки (экстракта) превышало ослабление разноименных сывороток (β и а) не менее чем на 3 ступени, антиген Н — при условий снижения титра сыворотки анти-0(Н) или экстракта анти-Н на 3 ступени и более.

Получены следующие результаты.

Волосы «выделителей»

Группа 0 (23 образца). При использовании экстракта анти-Н антиген 0¹ выявлен во всех навесках 21 образца, в том числе и в минимальной навеске 1 мг.

В 2 случаях навеска 1 мг оказалась недостаточной для обнаружения указанного антигена, так как титр экстракта снизился лишь на 1 ступень поглощения. Присутствие антигена 0 было доказано во всех навесках этих волос до 2 мг включительно.

Сыворотка анти-0 (H) дала аналогичные результаты. Антиген 0 выявлен в 22 образцах даже в навеске 1 мг (в том числе и в тех образцах, в которых при помощи экстракта анти-Н он не был открыт). В одном образце его обнаружили в навесках от 50 до 2 мг. С навеской 1 мг титр сыворотки анти-0(Н) был снижен на 2 ступени; при помощи же экстракта анти-Н антиген 0 был открыт и в 1 мг этого образца.

Таким образом, применение обоих реагентов обеспечило выявление антигена 0 в каждой навеске всех 23 образцов (см. таблицу).

Степень абсорбции фитагглютинина анти-Н и агглютинина анти-0(Н) одним и тем же образцом, как правило, была неодинакова.

Снижение титра сывороток β и α волосами группы 0 не превышало 2 ступеней поглощения, чаще оно выражалось в 1 ступени. Это было присуще только 13 образцам из 23; при этом ослабление титра указанных сывороток проявлялось в меньшем числе случаев по мере уменьшения навесок, а в навесках 2 и 1 мг вообще отсутствовало.

Группа А (37 образцов). В 34 образцах антиген А обнаружили во всех навесках, включая 1 мг. В 3 образцах его выявили в навесках от 50 до 2 мг (см. таблицу); в навеске 1 мг степень специфической абсорбции составляла лишь 2 ступени поглощения, что не позволяло считать антиген А обнаруженным.

Ослабление титра сыворотки β отмечалось при исследовании 16 образцов, причем не превышало 2 ступеней поглощения и чаще всего было равно 1 ступени. Связывание разноименного агглютинина ослаблялось по мере уменьшения навесок; с навесками 2 и 1 мг титр сыворотки β не был снижен.

В 15 образцах определяли присутствие антигена Н параллельно экстрактом анти-Н и сывороткой анти-0(Н).

При исследовании 6 образцов применение обоих реагентов привело к одинаковому результату: в 2 случаях антиген Н обнаружен во всех навесках (50—1 мг), в одном — в навесках 50, 25, 10 и 5 мг, в 3 не открыт ни экстрактом, ни сывороткой.

Иные данные получены в отношении 9 образцов. С 6 из них наилучшее действие проявил экстракт анти-Н: антиген Н был найден в 5 случаях во всех навесках (50—1 мг), а сывороткой анти-0(Н)—1 раз в навесках 50—2 мг, 2 раза — в навесках 50, 25 и 10 мг и 1 раз не выявлен ни в одной навеске; в шестом образце антиген Н обнаружен только экстрактом анти-Н (в навесках 50 и 25 мг).

В 3 случаях более эффективной оказалась сыворотка: в 2 образцах антиген Н был открыт только ею во всех навесках, а в одном образце при помощи сыворотки анти-О(Н) этот антиген обнаружен в навесках 50, 25 и 10 мг, тогда как экстрактом его удалось выявить лишь в навесках 50 и 25 мг.

Антигены системы АВ0 в волосах «выделителей»

Группа крови	Число образцов	Число образцов, в которых групповые антигены выявлены в минимальной навеске
		1 мг		2 мг
0	23	23		—
А	37	34		3
В	18	I71		—
АВ	92	Антиген А	7	1
		Антиген В	9	—

¹ В навесках одного образца более 10 мг выявлению антигена В препятствовало значительное ослабление титра сыворотки а, а в навесках меньше 10 мг — низкие показатели специфической абсорбции. Степень «выделительства» этого лица граничила со «слабым выделительством».

² В волосах одного человека антиген А не был открыт даже в навеске 50 мг. В его крови и слюне антиген А также выражен весьма слабо.

 

Показатели абсорбции фитагглютинина анти-Н и агглютинина анти-0(Н) были неодинаковы.

В 2 случаях в минимальной навеске волос антиген Н обнаружился, а присутствие основного антигена А доказать не удалось из-за низких показателей специфической абсорбции (2 ступени поглощения).

Группа В (18 образцов). В 17 образцах антиген В выявлен во всех навесках, включая 1 мг (см. таблицу).

Связывание разноименного агглютинина (α) наблюдалось при исследовании 8 образцов, причем, как и для групп 0 и А, оно было незначительным (1—2 ступени поглощения) и ослаблялось по мере уменьшения навесок.

Антиген Н определяли в 11 образцах волос обоими реагентами. Результаты были аналогичны полученным с волосами группы А.

Одинаковое действие экстракта анти-Н и сыворотки анти-0(Н) констатировано в отношении 7 образцов. Из всех навесок в 4 антиген Н обнаружен обоими реагентами, в 3 не выявлен ни одним из них.

В 3 случаях экстракт был более эффективным: в одном образце антиген открыт экстрактом анти-Н во всех навесках (50—4 мг), тогда как сывороткой анти-0(Н) он обнаружен только в навесках 20—2 мг; в 2 образцах волос антиген Н доказан только экстрактом анти-Н (в одном образце — в навесках 50—5 мг, в другом — в 50 и 25 мг). В одном случае этот антиген удалось выявить только сывороткой анти-0(Н) в навесках 50 и 25 мг.

Показатели абсорбции фитагглютинина анти-Н и агглютинина анти-0(Н) в подавляющем большинстве случаев были неодинаковыми.

Один образец принадлежал «выделителю умеренной силы», но степень «выделительства» в данном случае лишь незначительно превышала характерную для «слабого выделительства». В этом образце антигены В и Н открыты только в навеске 10 мг. В больших навесках оба антигена не могли считаться выявленными в связи с ослаблением титра сыворотки а, превышавшим показатели специфической абсорбции, а в меньших — ввиду слабого специфического связывания.

Группа АВ (9 образцов). Антиген В обнаружен во всех навесках 8 образцов волос, включая минимальную (1 мг). То же относилось и к антигену А в 7 образцах: в одном случае для выявления его 1 мг волос было недостаточно (2 ступени поглощения), а 2 мг и более обеспечивали достоверный результат реакции абсорбции.

Девятый образец группы АВ принадлежал человеку, в крови и слюне которого фактор А был выражен весьма слабо. Эта особенность была присуща и его волосам: антиген В отчетливо выявлялся во всех навесках, тогда как А не открывался даже в наибольшей навеске 50 мг (1 ступень поглощения) (см. таблицу).

Антиген Н исследовали обоими реагентами в 8 образцах, включая и тот, в котором антиген А был слабо выражен. С 4 образцами оба реагента проявили одинаковое действие — антиген Н выявлен во всех навесках 3 образцов (50—1 мг), а в одном случае обнаружить его не удалось.

В 4 случаях экстракт анти-Н дал лучшие результаты, чем сыворотка аити-0(Н): он обнаружил антиген во всех навесках, а сыворотка — лишь один раз в навесках 50—2 мг; 3 раза наличие антигена Н сывороткой не доказано.

Показатели абсорбции фитагглютинина анти-Н и агглютинина анти-0(Н) не были одинаковы.

Иногда антиген Н обнаруживался там, где один из основных антигенов (А) не мог считаться выявленным. Это относилось, во-первых, ко всем навескам человека со слабо выраженным в крови и слюне антигеном А, причем наличие антигена Н было доказано в навесках 50—1 мг обоими реагентами; во-вторых, к навеске 1 мг другого образца, где антиген Н открыт только экстрактом анти-Н.

Волосы «слабых выделителей» и «невыделителей»

Результаты исследования волос «слабых выделителей» и «невыделителей» значительно отличались от тех, которые получены в отношении волос «выделителей»: показатели степени специфической абсорбции были низкими, а связывание разноименных агглютининов было сильно выражено.

При исследовании разных навесок группы 0 снижение титра сывороток β и α в некоторых случаях было больше, чем ослабление титра экстракта анти-Н и сыворотки анти-0(Н), в других показатели абсорбции со всеми реагентами были одинаковы, в третьих снижение титра экстракта анти-Н и сыворотки анти-0(Н) незначительно (на 1—2 ступени) превалировало над ослаблением титра разноименных сывороток β и а.

То же наблюдалось и при исследовании волос групп А и В: показатели специфической абсорбции были меньше, равны или незначительно (на 1—2 ступени) превышали степень связывания разноименных агглютининов (β или α), ввиду чего судить о групповой принадлежности этих волос не представлялось возможным.

Не удалось выявить антигены А и В и в образце группы АВ, так как снижение титра сыворотки β при навесках 50 и 25 мг выражалось в 1 ступени поглощения, а при прочих навесках вообще отсутствовало; титр сыворотки а не был снижен ни одной навеской этих волос.

Ввиду способности волос «слабых выделителей» и «невыделителей» снижать титр всех примененных реагентов независимо от групповой принадлежности нет оснований для суждения о наличии в них и антигена Н.

Из полученных данных исключение составляли результаты исследования 3 образцов, один из которых принадлежал человеку группы 0, другой — человеку группы А, третий — человеку группы В. В этих случаях показатели специфической абсорбции с некоторыми навесками были достаточны для доказательства присутствия соответствующего антигена, а снижение титра разноименных сывороток либо отсутствовало (группа А), либо было незначительно (группы А и В).

Объяснение данного явления следует искать в том, что степень «невыделительства», свойственная «слабым выделителям», все же бывает несколько различной, причем в одних случаях граничит с «невыделительством», а в других — с «выделительством». Последнее, по-видимому, и послужило причиной указанных отклонений от обычно получаемых результатов.

Среди исследованных волос было 13 образцов, подвергшихся завивке («перманент», химическая), 23 образца, обработанных хной, басмой, «восстановителем», перекисью водорода, гидропиритом, «гаммой», «лондатоном», урсолом, и 5 образцов, на которые воздействовали указанными способами в различных сочетаниях. Все это не влияло на выявление антигенов.

Результаты наших исследований еще раз подтверждают присутствие в волосах антигенов системы АВ0, отчетливо выявляемых при соответствующей методике исследования в волосах «выделителей» групповых веществ. Отрицательные данные, полученные некоторыми авторами, видимо, объясняются недостатками в предварительной обработке волос, что не обеспечивает должного взаимодействия между антигенами и антителами, слишком высоким для этого вида исследования титром стандартных реагентов, непригодным техническим вариантом реакции абсорбции либо заменой последней менее чувствительной реакцией задержки агглютинации.

Выводы

1. Воздействие на волосы ультразвуком частотой 800 кгц и интенсивностью 15 вт/см² в течение 45—60 мин. создает благоприятные условия для обнаружения в них антигенов системы АВ0.
2. Антигены А и В в волосах «выделителей» групп А, В и АВ поддаются выявлению нормальными сыворотками а и β в минимальных навесках 1 мг, иногда 2 мг.
3. То же относится к антигену 0 в волосах «выделителей» группы 0 при исследовании экстрактом анти-Н, изготовленным из семян ракитника сидячелистного, и сывороткой анти-0(Н), полученной путем иммунизации козы дизентерийной вакциной Григорьева—Шига.
   Различие в действии 2 указанных реагентов обычно выражалось в неодинаковых показателях абсорбции, а при исследовании минимальных навесок (1 мг) обнаружение антигена 0 в отдельных образцах волос обеспечивалось только сывороткой анти-0(Н), в единичных — только экстрактом анти-Н.
4. Результат исследования антигена Н, входящего в состав групп А, В и АВ, в известной степени зависит от того, какой реагент введен в опыт — экстракт анти-Н или сыворотка анти-0(Н). Приблизительно в половине случаев действие экстракта и сыворотки одинаково, в остальных случаях более эффективным чаще оказывается экстракт, значительно реже — сыворотка, причем в отдельных образцах антиген Н обнаруживался либо экстрактом анти-Н, либо сывороткой анти-0(Н).
5. В волосах «слабых выделителей» и «невыделителей» групповая принадлежность, как правило, не определялась из-за сочетания низких показателей специфической абсорбции и значительного снижения титра разноименных сывороток. Поэтому нельзя судить и о наличии или отсутствии антигена Н в волосах «слабых выделителей» и «невыделителей» групп А, В и АВ.
6. При исследовании одного образца волос «выделителя» группы АВ отмечено, что особенности, присущие агглютиногенам его слюны и крови (сильная выраженность агглютиногена В и очень слабая агглютиногена А), свойственны также и антигенам его волос.
7. Различные косметические воздействия на волосы — завивки «перманент» и химическая, обработка некоторыми красителями, «восстановителем», перекисью водорода и их сочетания — не влияют на результаты исследования.
8. В процессе определения групп системы АВ0 в волосах возможны следующие ошибки: а) необнаружение слабо выраженного антигена А в волосах группы АВ даже при исследовании достаточно большой навески (50 мг), вследствие чего группа АВ может быть принята за группу В; б) выявление агглютиногена Н наряду с необнаружением агглютиногена А в минимальной навеске (1 мг) отдельных образцов группы А, в силу чего они могут быть отнесены к группе 0.

 

¹ Антиген, имеющийся в группе 0, мы обозначили как 0, а имеющийся в группах А, В и АВ — как Н.